辅酶Ⅰ诱导Cerasome聚集及乳酸脱氢酶对聚集的影响

用紫外可见分光光度计分别在500 nm和340 nm考察了由肽脂质—溴化N,N-二-十六烷基-Nα-6-三乙氧基硅基己酰基-L-甘氨酰胺((EtO)3SiC3N+C5Ala2C16)形成的阳离子脂质体——Cera-some,在还原型辅酶I(NADH)的作用下,以及在乳酸脱氢酶(LDH)和底物丙酮酸的存在下,其光密度(吸光度)随时间的变化。结果表明:随着NADH浓度的增加,Cerasome悬液的光密度(吸光度)明显增加,脂质体产生了聚集,但是聚集体不能被乳酸脱氢酶重新分散;而由溴化N,N-二-十六烷基-Nα-6-三甲胺基己酰基-L-丙氨酰胺(N+C5Ala2C16)形成的阳离子脂质体聚集体,在乳酸脱氢酶的作用下,可以被重新分散。

辅酶Ⅰ诱导阳离子囊泡的聚集和酶分散的研究

分别在500nm和340nm考察了由表面活性剂溴化N,N-二-十六烷基-Nα-6-三甲胺基己酰基-L-丙氨酰胺形成的阳离子囊泡,在氧化型辅酶Ⅰ(NAD+)或还原型辅酶Ⅰ(NADH)作用下,以及在乳酸脱氢酶和底物丙酮酸的存在下,吸光值随时间的变化。结果表明,由0.50mmol/L的表面活性剂形成的阳离子囊泡悬浮液中,NAD+浓度从0增加到2.40mmol/L,囊泡悬液外观没有明显变化,囊泡不形成聚集;而NADH浓度从0.25mmol/L增加到0.80mmol/L,囊泡悬浮液的吸光值明显增加,囊泡产生了聚集;在乳酸脱氢酶存在下,囊泡的聚集体随着NADH在酶反应过程中不断转化为NAD+,重新分散,借助电子显微镜观察到了囊泡的聚集和用酶进行分散后的状态。最后,用超滤方法考察了囊泡结合的NADH与初始NADH浓度的关系,囊泡结合的NADH最大量为0.33mmol/L。

还原型辅酶Ⅰ对抗肿瘤药物抑制人胃癌细胞的影响

[目的]研究还原型辅酶Ⅰ(NADH)对抗肿瘤药物抑制人胃癌SGC鄄7901细胞活性的影响。[方法]用MTT法观察NADH和抗肿瘤药物氟尿嘧啶、鬼臼乙叉甙、顺铂、表阿霉素、丝裂霉素对人胃癌SGC鄄7901细胞活性的抑制率。[结果]NADH可明显降低氟尿嘧啶、鬼臼乙叉甙、顺铂、表阿霉素的肿瘤细胞抑制率(P<0.05)。并且可显著提高人胃癌细胞对丝裂霉素的化疗敏感性(P<0.01)。[结论]NADH可能是肿瘤化疗过程中的重要调节剂。

毕赤酵母木糖还原酶定点突变改善其对双辅酶的亲和力

通过毕赤酵母(Pichia stipitis)木糖还原酶(xylose reductase,XR)基因定点突变,获得NADH高亲和力的毕赤酵母木糖还原酶(PsXR),改善了辅酶不同而导致的酿酒酵母胞内氧化还原失衡.同时克隆了PsXR编码基因,通过BLAST工具进行同源性搜索,并用生物软件进行序列比对和结构分析,确定突变位点.用融合PCR方法进行定点突变,并在大肠杆菌表达系统中进行融合表达,且对表达产物进行HIS-TAG亲和纯化,分光光度法检测酶活性,计算比活力.本研究成功获得突变XR编码基因,并收集了纯化的突变蛋白.酶活性检测和比活力计算显示,3种突变酶对2种辅酶的亲和力在一定程度上都发生了变化.与未突变的PsXR相比,3种突变酶对辅酶NADPH的亲和力均显著下降,突变酶M3对辅酶NADH的亲和力未发生变化,而突变酶M1和M4对辅酶NADH的亲和力显著升高,其中突变酶M1对NADH的亲和力明显提高,对NADPH的亲和力明显下降,其活性主要依赖辅酶NADH,提示K270R位点在XR与辅酶结合中起关键作用.

三磷酸腺苷供应优化促进谷氨酸棒杆菌产氨基酸的研究进展

谷氨酸棒杆菌是目前氨基酸生产中最主要的工业菌株,其中三磷酸腺苷(adenosine triphosphate,ATP)是该菌生产各种氨基酸所需能量的主要来源。以ATP供应为导向,在谷氨酸棒杆菌中开发具有可人工调控的ATP供应的细胞工厂是提高生物产量的一种关键策略。因此,通过调控谷氨酸棒杆菌的ATP供应从而促进氨基酸的生产引起了广泛关注。该文综述了近年来通过操纵ATP供应调控谷氨酸棒杆菌产氨基酸的研究进展,为进一步改善谷氨酸棒杆菌生产氨基酸提供思路,也为其他工业菌株的工业生产优化提供参考。