鼻咽癌组织中还原型辅酶Ⅱ氧化酶4和表皮生长因子受体的表达与调强放疗预后的相关性研究

目的 探讨鼻咽癌组织中还原型辅酶Ⅱ氧化酶4(reduced coenzyme II oxidase 4,NOX4)和表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)的表达与调强放疗预后的相关性。方法 回顾性收集2018年1月~2021年6月南阳市中心医院收治的82例拟接受调强放疗的鼻咽癌患者及30名健康志愿者的临床资料,分别设为研究组和对照组。免疫组织化学法检测并比较研究组鼻咽癌组织与对照组正常鼻黏膜中NOX4和EGFR的表达情况;分析研究组鼻咽癌组织NOX4和EGFR表达水平与临床病理特征的关系;采用Cox比例风险模型和Kaplan-Meier生存曲线分析NOX4和EGFR表达与鼻咽癌患者预后生存的关系。结果研究组鼻咽癌组织NOX4高表达率、EGFR高表达率均高于对照组鼻黏膜组织(P<0.05)。T分级、N分级、临床分期及放疗敏感性与NOX4的表达有统计学意义(P<0.05),性别、年龄、肿瘤体积与NOX4的表达无统计学意义(P>0.05);年龄、T分级、N分级、临床分期及放疗敏感性与EGFR的表达有统计学意义(P<0.05),性别、肿瘤体积与EGFR的表达无统计学意义(P>0.05)。截止2022年6月31日,中位随访时间24个月(9~52个月),10.98%(9/82)局部复发、19.51%(16/82)远处转移、14.63%(12/82)死亡。Cox多因素回归分析结果显示,年龄>60岁、T3~T4分级、NOX4高表达、EGFR高表达是影响总生存期的独立危险因素(P<0.05)。NOX4高表达与低表达患者3年累积生存率分别为55.1%、80.0%;EGFR高表达与低表达患者3年累积生存率分别为47.3%、80.2%,Kaplan-Meier生存曲线分析显示,NOX4、EGFR低表达患者的累积生存曲线分别优于NOX4、EGFR高表达患者(Log rank χ^(2)=3.805、4.664,P<0.05)。结论鼻咽癌组织中NOX4和EGFR均异常高表达,二者表达情况与T分级、N分级、临床分期及放疗敏感性关系密切,NOX4和EGFR高表达患者调强放疗预后更差。

大黄酸对糖尿病大鼠肾脏还原型辅酶Ⅱ基因表达的影响

目的观察大黄酸对糖尿病大鼠肾脏氧化应激的影响。方法链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病肾病大鼠模型随机分为模型组与治疗组,治疗6周后,比较各组大鼠肾组织中丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性,同时检测各组大鼠血糖、血肌酐、尿素氮、24 h尿蛋白定量等。采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测p22phox及p47phox的表达。结果治疗组较模型组明显改善尿清蛋白、尿素氮水平和肾脏肥大指数。肾脏MDA含量明显下降(P<0.05),SOD活性显著上升(P<0.05)。与对照组比较,模型组p47phox和p22phoxmRNA表达明显增多,大黄酸干预使其表达明显降低。结论大黄酸对2型糖尿病肾脏病变有一定的保护作用,其机制可能是通过抑制氧化应激反应,下调糖尿病大鼠p22phox及p47phox的表达对2型糖尿病模型大鼠肾脏产生保护作用。

氧化抗氧化失衡与动脉粥样硬化

目的探讨氧化抗氧化失衡与动脉粥样硬化的关系。方法对采用高分辨超声检测技术筛选出的79例颈总动脉斑块形成患者(A组)、52例内膜中层增厚患者(B组)和36例内膜中层厚度正常患者(C组)进行静脉血浆还原型谷胱甘肽(GSH)与氧化型谷胱甘肽(GSSG)、还原型辅酶Ⅱ(NADPH)与氧化型辅酶Ⅱ(NADP+)、氧化型低密度脂蛋白(oxLDL)和丙二醛(MDA)检测。结果A组与B组相比,B组与C组相比,GSH、GSH/GSSG减低(P<0.05),GSSG、GSH/GSSG氧化还原电位升高(P<0.05);A组与C组相比,NADPH、NADH/NADP+减低(P<0.05),NADPH/NADP+氧化还原电位升高(P<0.05);A组与B组相比,B组与C组相比,oxLDL、MDA增加(P<0.05);GSH/GSSG氧化还原电位与oxLDL呈正相关(r=0.817,P<0.001),随着动脉内膜增厚斑块形成,氧化还原电位逐渐升高,向氧化方向偏移。结论动脉粥样硬化与氧化还原态失衡向氧化方向偏移相关。

还原型辅酶Ⅱ氧化酶NOX家族在急性肺损伤中的作用

急性肺损伤(ALI)及其严重形式急性呼吸窘迫综合征(ARDS)是临床常见危重症,发病诱因复杂多样,主要病理特征是气血屏障破坏导致的弥漫性炎性、蛋白性肺水肿。活性氧(ROS)可氧化脂质、蛋白质、核酸等大分子物质从而介导氧化损伤。在产生ROS的诸多体系中,还原型辅酶Ⅱ(NADPH)氧化酶介导的ROS是其主要来源,其功能亚基、跨膜亚基NOX家族在肺组织中的分布具有细胞类型依赖性。NOX来源的ROS参与肺组织的防御功能并且与ALI/ARDS的发生发展相关。本文主要从NOX家族在肺组织中的细胞分布、活化因素及与ALI发生发展的关系进行综述。

非对称性二甲基精氨酸诱导内皮祖细胞氧化应激损伤及L-精氨酸的保护作用

目的:研究非对称性二甲基精氨酸(ADMA)对人脐带血内皮祖细胞氧化应激影响及观测L-精氨酸对内皮祖细胞的保护作用。方法:从脐带血中分离出内皮祖细胞,细胞随机分5组:对照组,ADMA组,ADMA+L-精氨酸组,ADMA+PDTC(吡咯烷二硫代氨基甲酸酯)组,L-精氨酸组。运用荧光染料检测细胞活性氧的产生。逆转录多聚酶链反应检测还原型辅酶Ⅱ氧化酶亚基及细胞内抗氧化剂超氧化物歧化酶mRNA变化。结果:①ADMA显著增加细胞内活性氧的生成;L-精氨酸和抗氧化剂(PDTC)能抑制ADMA刺激后的细胞内活性氧产生。②ADMA诱导还原型辅酶Ⅱ氧化酶p22phox亚基、gp91phox亚基mRNA的表达明显上调,L-精氨酸和抗氧化剂(PDTC)能阻断这些基因的上调。但ADMA对抗氧化剂超氧化物歧化酶mRNA表达没有影响。结论:ADMA可能通过诱导氧化应激,抑制内皮祖细胞的生物学活性,影响内膜的再生化,而给与外源性L-精氨酸能起到保护作用。

还原型辅酶Ⅱ氧化酶抑制剂夹竹桃麻素对重症急性胰腺炎大鼠肠道损伤的保护作用

目的探讨还原型辅酶Ⅱ（NADPH）氧化酶抑制剂夹竹桃麻素（Apocynin）对大鼠重症急性胰腺炎（SAP）大鼠肠道损伤的的保护作用及其机制。方法雄性Wistar大鼠48只，随机分为假手术组（SO组，n=8）、重症急性胰腺炎组[SAP组，按时间分3、12、24h亚组（n=8）]、Apocynin预处理组（APO组，n=8）、Apocynin药物对照组（APO-CON组，n=8）。SAP大鼠胆胰管逆行注射5％牛磺胆酸钠制备SAP模型。APO组造模同SAP组，在造模前30rnin股静脉注射Apocynin（50mg/kg），SO组仅翻动胰腺后关腹，APO-CON组仅行股静脉注射Apocynin（50mg／kg），余同S0组。全自动生化仪检测各组大鼠血清淀粉酶（AMY）及脂肪酶（HP）水平。苏木素一伊红（HE）染色观察各组胰腺组织及回肠组织病理改变。采用免疫组织化学法检测p38丝裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）、磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶（p—p38MAPK）及核转录因子-κB（NF—κB）回肠组织的表达。透射电镜下观察回肠黏膜上皮细胞超微结构改变。结果与SO组AMY、LIP胰腺病理评分及回肠病理评分（1236．00±155．72、90．50±9．60、0．24±0．07、0．34±0．18）比较，SAP组大鼠血清AMY、HP、胰腺和回肠病理评分升高明显（4918．20±389．63、1712．90±103．80、12．45±1．01、3．50±0．31，P〈0．05）。APO组上述指标明显下降（3698．00±386．93、659．40±92．40、8．76±1．34、2．20±0．36）。APO—CON组上述指标与SO组比较差异无统计学意义（P〉0．05）。SAP组肠组织光镜下可见损伤严重，APO组光镜下回肠组织病理损伤较SAP组减轻。免疫组织化学检查显示SAP组大鼠回肠组织p38、P-p38及NF—κB表达较SO组与APO—CON组升高明显（P〈0．05），APO组上述指标均明显下降（P〈0．05）。电镜下可见APO组大鼠回肠黏膜上皮细胞超微结构改变较SAP组减轻。光镜下及电镜下，SO组及APO—CON组均无明显改变。结论Apoeynin通过减少重症急性胰腺炎肠组织p38MAPK、NF—κB表达，对重症急性胰腺炎肠损伤具有保护作用。

Rho/ROCK通路与NADPH氧化酶在糖尿病肾病中的作用

Rho/ROCK通路与NADPH氧化酶的激活,都能够促进糖尿病肾病的发生发展。Rho/ROCK通路与NADPH氧化酶可能也存在着某些联系,研究二者之间的关系与相关机制,对发现治疗糖尿病肾病的新药可能具有重要的意义。本文首先介绍了Rho/ROCK通路与NADPH氧化酶及二者的激活因素,然后总结了二者在糖尿病肾病中对肾脏血流动力学、滤过功能以及肾内基质的影响,最后简要介绍了与二者相关的糖尿病肾病药物治疗靶点。

还原型辅酶Ⅱ氧化酶抑制剂Apocynin对急性坏死性胰腺炎大鼠肾损伤的保护作用

目的探讨还原型辅酶Ⅱ氧化酶(NADPH oxidase,NOX2)抑制剂夹竹桃麻素(Apocynin)对急性坏死性胰腺炎(acute necrotic pancreatitis,ANP)模型大鼠肾损伤的保护作用。方法 30只Wistar大鼠随机分为3组:假手术组(SO组)、急性坏死性胰腺炎组(ANP组)、Apocynin治疗组(APO组),每组各10只大鼠。ANP组采用逆行胆胰管注射牛磺胆酸钠溶液1 ml/kg(STC)制备ANP模型。APO组在造模前30 min股静脉注射Apocynin(50 mg/kg),其余同ANP组。SO组开腹后仅翻动十二指肠和胰腺。造模后12 h处死大鼠,下腔静脉采血,留取各组大鼠肾组织以4%多聚甲醛固定。全自动生化仪检测血清淀粉酶(AMY)、脂肪酶(LIPA)、肌酐(Cr)、尿素(BUN)水平,肾脏组织固定行HE染色,光学显微镜下观察肾脏病理改变,免疫组化及免疫荧光法检测肾脏组织半胱天冬酶-3(Caspase-3)、核转录因子-κB(NF-κB)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、肠黏膜髓过氧化酶(MPO)水平。结果 (1)ANP组大鼠血清AMY、LIP、Cr、BUN水平及组织病理改变较SO组明显升高(P<0.05),应用Apocynin后降低(P<0.05)。(2)ANP组大鼠Caspase-3、NF-κB、TNF-α表达水平较SO组升高(P<0.05),应用Apocynin后有所降低(P<0.05)。(3)ANP组大鼠髓过氧化酶(MPO)表达水平较SO组升高(P<0.05),应用Apocynin后有所降低(P<0.05)。结论 NOX2抑制剂Apocynin可减轻ANP模型大鼠肾脏损伤。

基于Nox4/NLRP3通路探讨桃叶珊瑚苷干预动脉粥样硬化的作用机制

目的:探究桃叶珊瑚苷干预动脉粥样硬化大鼠的作用机制。方法:将SD雄性大鼠采用高脂饲料联合维生素D_(3)腹腔注射的方法建立动脉粥样硬化模型。颈动脉超声和苏木精-伊红(HE)染色评估大鼠建模;建模后分为模型组、辛伐他汀组(20 mg/kg)及桃叶珊瑚苷高剂量(40 mg/kg)组、中剂量(20 mg/kg)组、低剂量(10 mg/kg)组,每组8只;另设正常组,8只大鼠给予普通饲料喂养并腹腔注射生理盐水。分组完成后开始给药,辛伐他汀组给予辛伐他汀溶液灌胃,桃叶珊瑚苷各剂量组腹腔注射相应剂量的桃叶珊瑚苷,正常组和模型组灌胃和注射等量的生理盐水,每日1次,连续给药4周。给药结束后,检测大鼠血清三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)以及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素(IL)-18、IL-1β水平;HE染色观察颈动脉组织病理学变化;荧光探针测定颈动脉中活性氧(ROS)的生成;蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测颈动脉组织还原型辅酶Ⅱ氧化酶4(Nox4)/核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)通路相关蛋白的表达。结果:造模大鼠管腔内出现大量动脉粥样硬化病变,颈动脉出现狭窄,局部血管壁上明显有斑块形成,颈动脉内膜中层厚度(IMT)增加,大量炎性因子浸润。与正常组比较,模型组大鼠血清TC、TG、LDL-C、ox-LDL、TNF-α、IL-1β、IL-18水平和颈动脉ROS荧光强度、Nox4、NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、Cleaved Caspase-1的表达明显升高(P<0.05),HDL-C水平明显降低(P<0.05),颈动脉组织内膜层增厚,局部有斑块形成,内皮受损,大量炎性因子浸润;与模型组比较,辛伐他汀组和桃叶珊瑚苷高剂量组、桃叶珊瑚苷中剂量组大鼠血清TC、TG、LDL-C、ox-LDL、TNF-α、IL-1β、IL-18水平和颈动脉ROS荧光强度、Nox4、NLRP3、ASC、Cleaved Caspase-1的表达明显下降(P<0.05),HDL-C水平明显升高(P<0.05),大鼠颈动脉内膜增厚、炎性因子浸润程度减少;且桃叶珊瑚苷高剂量组对Nox4/NLRP3通路的抑制作用以及对颈动脉组织的改善作用与辛伐他汀组接近。结论:桃叶珊瑚苷可调节血脂异常、抑制氧化应激和炎症反应,减轻动脉粥样硬化病变,其作用机制可能与抑制Nox4/NLRP3通路的激活有关。

过表达Nrf2基因对急性胰腺炎大鼠的保护机制研究

目的探讨核因子E2相关因子2(nuclear factor E2-related factor 2, Nrf2)过表达对急性胰腺炎(acute pancreatitis, AP)大鼠的保护机制。方法 32只雄性SD大鼠按照随机数字表法分为4组:阴性对照组(NC),胰腺炎组(NC+AP),过表达组(Nrf2+/+),过表达胰腺炎组(Nrf2+/++AP)。采用尾静脉注射法进行慢病毒转染,转染48 h后,采用蛙皮素联合脂多糖腹腔注射法建立大鼠AP模型。建模成功24 h后处死大鼠采集标本,采用对-硝基苯麦芽七糖苷法检测大鼠血清淀粉酶活性;RT-PCR检测胰腺Nrf2、HO-1和NQO1 mRNA相对表达量;Western blot检测Nrf2、HO-1和NQO1蛋白相对表达量;HE染色观察胰腺组织病理学改变并评分。结果胰腺炎组(200.72±14.56)U/dL及过表达胰腺炎组(184.60±11.75)U/dL血清淀粉酶水平均较阴性对照组(162.48±13.19)U/dL及过表达组(170.34±11.75)U/dL明显升高,差异有统计学意义(P<0.01),而过表达胰腺炎组较胰腺炎组明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);过表达胰腺炎组中Nrf2、HO-1和NQO1 mRNA表达量分别为(2.78±0.59)、(1.51±0.18)、(1.61±0.22),较阴性对照组显著升高,且过表达胰腺炎组Nrf2 mRNA表达高于胰腺炎组,差异均有统计学意义(P<0.05);过表达胰腺炎组中Nrf2、HO-1和NQO1蛋白表达量分别为(2.78±0.59)、(1.51±0.18)、(1.61±0.22),均较阴性对照组显著升高,且过表达胰腺炎组Nrf2和NQO1蛋白表达量明显高于胰腺炎组(P<0.05);胰腺炎组及过表达胰腺炎组胰腺组织HE染色均符合AP的表现,阴性对照组及过表达组胰腺组织病理检查除部分血管周围和胰腺间质偶尔可见少量炎性细胞浸润外,余未见明显异常改变,而过表达组胰腺组织改变较胰腺炎组有所改善,胰腺病理学损伤评分也明显降低。结论过表达Nrf2基因对蛙皮素联合脂多糖诱导的AP大鼠的胰腺具有一定的保护作用,这种作用可能与通过Nrf2的过表达,诱导其下游抗氧化酶HO-1及NQO1的表达有关。

NQO1基因C609T多态性与糖尿病视网膜病变的相关性研究

目的研究NQO1基因C609T多态性与糖尿病视网膜病变之间的关系。方法根据眼底检查的结果,把546例2型糖尿病患者分成糖尿病视网膜病变组(DR组)和糖尿病无视网膜病变组(NDR组)。采用构象差异凝胶电泳对NQO1基因C609T多态性进行分型。结果 NQO1基因C609T多态性的CC、CT和TT3种基因型在DR组的频率分别为29.7%、53.2%和17.1%,在NDR组的频率分别为28.1%、51.8%和20.1%,两组比较差异无统计学意义(c2=0.678,P=0.713)。结论 NQO1基因C609T多态性与我国江西汉族2型糖尿病视网膜病变的发生无关。

利拉鲁肽和艾塞那肽对2型糖尿病肾病大鼠肾脏结构和功能的影响

目的探讨利拉鲁肽和艾塞那肽在糖尿病肾病(DN)发病过程中对肾脏结构和功能的保护作用及两者是否存在差异。方法将雄性Sprague-Dawley大鼠40只随机分为正常对照组、模型组、利拉鲁肽治疗组和艾塞那肽治疗组,每组10只。模型组、利拉鲁肽治疗组、艾塞那肽治疗组大鼠给予高糖高脂饲养6周后空腹腹腔注射链脲佐菌素(STZ)35 mg·kg^(-1)诱导DN模型,之后3、7 d各测1次清晨空腹尾静脉血糖,2次血糖均≥16.7 mmol·L-1为DN造模成功。正常对照组、模型组大鼠给予皮下注射生理盐水10μL·kg^(-1)·12 h^(-1);艾塞那肽治疗组大鼠给予皮下注射艾塞那肽10μL·kg^(-1)·12 h^(-1);利拉鲁肽治疗组大鼠给予皮下注射利拉鲁肽0.3 mg·kg^(-1)·12 h^(-1),共用药8周。第8周末采集大鼠血液标本、肾脏标本。血液标本离心后收集血清,使用全自动生物化学分析仪检测大鼠血尿素氮(BUN)和血肌酐(Scr)水平;肾脏标本制作成蜡块,采用过碘酸雪夫染色(PAS)观察肾脏组织结构变化;免疫组织化学法检测大鼠肾脏组织中转化生长因子β_1(TGF-β_1)和还原性辅酶Ⅱ氧化酶4(NOX4)蛋白表达水平,使用Image-pro Plus软件对TGF-β_1和NOX4在肾脏组织中蛋白表达水平进行半定量分析。结果与正常对照组比较,模型组和艾塞那肽治疗组大鼠空腹血糖、BUN、Scr及肾组织中TGF-β_1、NOX4蛋白表达水平均显著升高(P<0.05);利拉鲁肽治疗组大鼠空腹血糖和肾组织中TGF-β_1蛋白水平显著升高(P<0.05);模型组、利拉鲁肽治疗组和艾塞那肽治疗组大鼠体质量显著降低(P<0.05)。模型组、利拉鲁肽治疗组和艾塞那肽治疗组大鼠肾小球系膜明显增厚,其中模型组大鼠增厚最明显,利拉鲁肽治疗组大鼠最轻。与模型组比较,利拉鲁肽治疗组和艾塞那肽治疗组大鼠BUN、Scr和肾组织中TGF-β_1、NOX4蛋白水平显著降低(P<0.05);利拉鲁肽治疗组大鼠Scr和肾组织中TGF-β_1、NOX4蛋白水平显著低于艾塞那肽治疗组(P<0.05)。结论利拉鲁肽和艾塞那肽均能通过减轻氧化应激和下调炎性因子表达改善大鼠肾脏功能;利拉鲁肽较艾塞那肽可更好地下调炎性因子TGF-β_1和减轻NOX4介导的氧化应激。

芍药苷对胆汁淤积肝损伤保护作用机制研究

目的:研究芍药苷对胆汁淤积型肝损伤的保护作用机制。方法:将ICR小鼠随机分成正常对照组、模型对照组、芍药苷低、中、高剂量组。α-萘异硫氰酸酯(ANIT)诱导胆汁淤积型黄疸模型,观察各组药物对小鼠血清总胆红素(TBIL)、直接胆红素(DBIL)、胆汁酸(TBA)、丙氨酸转氨酶(ALT)和碱性磷酸酶(ALP)的影响,并用Western Blot检测小鼠肝组织中钠-牛磺胆酸盐共转运多肽(NTCP)和还原型辅酶Ⅱ氧化酶4(NOX4)蛋白的表达。结果:与正常对照组比较,模型对照组血清学指标均明显升高(P<0.01或P<0.05);肝组织中NOX4表达升高,而NTCP表达降低。与模型对照组比较,除芍药苷低剂量组ALT、TBIL,芍药苷中剂量组TBIL外,其余各剂量组ALT、ALP、TBIL、DBIL、TBA均明显降低(P<0.01)。芍药苷治疗组肝组织中NOX4表达较ANIT模型对照组表达减少,芍药苷给药组小鼠肝组织中的NTCP蛋白表达较ANIT组上升。结论:芍药苷具有一定的利胆退黄和保肝降酶作用,且该作用是通过抗氧化减轻肝细胞损伤和增强肝细胞对血液中胆盐的摄取的机制实现的。

不同剂量Apocynin对重症急性胰腺炎模型大鼠肠组织的保护作用

目的探讨还原型辅酶Ⅱ氧化酶(NOX)抑制剂apocynin对重症急性胰腺炎(SAP)模型大鼠肠道损伤的保护作用及剂量关系。方法 53只SPF级Wistar大鼠随机分为假手术组(SO组,10只)、SAP模型组(SAP组,12只)、apocynin低剂量组(25 mg/kg,11只)、中剂量组(50 mg/kg,10只)、高剂量组(100 mg/kg,10只)。胆胰管逆行注射5%牛磺胆酸钠溶液制备SAP模型,造模前30 min,各剂量组注射apocynin干预。造模后12 h记录大鼠存活情况,测定各组腹水量、血清淀粉酶(AMY)、丙氨酸转氨酶(ALT)和肌酐(Cr)水平,并取胰腺、回肠组织行HE染色,进行组织病理学分析。结果 SAP组死亡2只,apocynin低剂量组死亡1只。SAP组大鼠腹水量、AMY、ALT、Cr水平、胰腺病理评分、回肠病理分级均较SO组明显升高(P<0.05)。低剂量组Cr、肠病理分级较SAP组降低,其他指标与SAP组比较差异无统计学意义。中、高剂量组腹水量、AMY、Cr、胰腺病理评分、肠病理分级均较SAP组降低(P<0.05)。高剂量组ALT、Cr水平较中剂量组升高(P<0.05)。结论 Apocynin可改善SAP模型大鼠症状并减轻肠损伤,这可能与其抑制NOX活性有关,50 mg/kg可能是最佳剂量。

赤芍对颈动脉球囊损伤术后兔血管内膜增生的干预作用研究

目的探讨高脂喂养兔颈动脉球囊损伤术后增殖的血管内膜丝裂素活化蛋白激酶磷酸酶-1(MKP-1)、还原型辅酶(NADPH)氧化酶亚单位p22phox表达、血管内皮功能及赤芍提取物的干预影响。方法喂养高脂饲料,并给予高、中、低剂量赤芍提取物(75、50、25 ml,分别含生药75、50、25 g)10周。采用Clowes方法建立兔颈总动脉球囊损伤模型。免疫组化染色测定兔颈动脉新生内膜成分,增殖细胞核抗原(PCNA)及巨噬细胞表达,血管特殊染色观察型胶原增生,图像分析系统测定新生内膜面积;张力换能器及血管环张力曲线Chart软件测定血管内皮功能;放射免疫法测定血浆血管紧张素(Ang)及醛固酮(ALD)含量;原位杂交染色及逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测增生的血管内膜中MKP-1及p22phox的mRNA表达。结果赤芍提取物可抑制型胶原增生,减少PCNA阳性细胞数,减轻新生内膜形成;降低血浆Ang水平及减弱血管对Ang的收缩反应;显著降低p22phox mRNA表达;上调高脂喂养兔颈动脉球囊损伤后MKP-1 mRNA表达,其中以高剂量组作用最明显(P<0.05或P<0.01)。结论赤芍抑制血管内膜增生作用与保护血管内皮功能有关,其机制可能涉及抗氧化应激、抗血管内皮炎症反应及阻断丝裂素活化蛋白激酶(MAPK)信号通路有关。

马兜铃酸肾病与代谢酶基因多态性的相关性研究

目的:探讨依赖还原型辅酶Ⅰ/Ⅱ醌氧化还原酶(NQO1)和细胞色素P450 1A1(CYP1A1)基因多态性与马兜铃酸肾病(AAN)的相关性。方法:应用双相引物-聚合酶链反应(PCR-CTPP),对90例AAN患者和159例健康对照组进行NQO1基因609位点和CYP1A1基因4889位点单核苷酸多态性的检测,比较两组基因型分布频率的差异。并将病例组按不同基因型分组,分析不同基因型与临床表现的关系。Logistic回归检验AAN患者发生重度贫血的影响因素。结果:CYP1A1A4889G基因型和等位基因分布频率在两组间差异均无统计学意义(P>0.05)。AAN组NQO1C609T低表达基因型(TT+CT)分布频率高于对照组(76.7%vs65.4%,P<0.05);TT基因型患者重度贫血的发生率明显增高(P<0.05);Logis-tic回归分析提示NQO1C609T低表达基因型为AAN患者重度贫血的危险因素。结论:NQO1 C609T基因多态性与马兜铃酸肾病的发病有关,并且可能增加了AAN患者早期重度贫血的风险。

降钙素基因相关肽通过降低炎性小体活性抑制巨噬细胞功能

目的探讨降钙素基因相关肽(CGRP)抑制巨噬细胞炎性反应的机制。方法使用不同浓度CGRP处理LPS活化/未活化的小鼠巨噬细胞(RAW264.7),实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测巨噬细胞内促炎细胞因子白介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和还原型辅酶Ⅱ氧化酶-活性氧簇-NOD样受体蛋白3(NLRP3)mRNA表达水平;酶联免疫吸附法(ELISA)定量检测细胞上清分泌型IL-1β和TNF-α蛋白表达量;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞内NLRP3蛋白表达水平。结果 CGRP显著降低LPS活化/未活化RAW264.7细胞内炎性因子IL-1β、TNF-α、NLRP3 m RNA水平与蛋白水平,同时,NLRP3下游调节分子Caspase-1的蛋白水平被显著下调。在mRNA水平,NLRP3随CGRP剂量变化而变化的趋势与IL-1β、TNF-α非常相似。结论CGRP抑制巨噬细胞炎性激活,其机制可能与CGRP抑制NLRP3表达与活性有关。

基于Ang Ⅱ/AT1R/NOX4信号通路探讨加味真武汤延缓慢性肾功能衰竭肾间质纤维化机制

目的:通过观察加味真武汤对腺嘌呤诱导慢性肾功能衰竭(CRF)大鼠血清及肾组织中血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)、血管紧张素Ⅱ1型受体(AT1R)、还原型辅酶Ⅱ(NADPH)氧化酶4(NOX4)、转化生长因子-β_(1)(TGF-β_(1))、Ⅰ型胶原蛋白(COL1A1)、Ⅲ型胶原蛋白(COL3A1)表达的影响,探讨加味真武汤延缓CRF肾间质纤维化的可能作用机制。方法:将50只SPF级雄性SD大鼠按照随机数字表法分为正常组10只、造模组40只,将大鼠适应性饲养1周后采用腺嘌呤150 mg·kg^(-1)·d^(-1)灌胃的方法建立实验性CRF大鼠模型。造模完成后随机选取正常组和造模组大鼠各3只取材,检测造模是否成功。造模成功后,将造模组大鼠按照随机数字表法分成模型组、中药低剂量组、中药中剂量组、中药高剂量组、盐酸贝那普利组各6只,进行药物灌胃,每日1次,治疗4周。于实验第1周末、第13周末、第17周末检测24 h尿蛋白定量(24 h-UTP),第17周各组大鼠麻醉后取材,腹主动脉取血后离心取上清检测血清总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、肌酐(Cr)、尿素氮(BUN);酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清AngⅡ表达水平;苏木素-伊红(HE)、马松(Masson)染色法观察肾组织病理改变;免疫组织化学(IHC)法观察AT1R、NOX4、TGF-β_(1)、COL1A1、COL3A1表达情况;实时荧光定量聚合酶链式反应法(Real-time PCR)观察AT1R、NOX4、TGF-β mRNA表达水平;蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测AT1R、NOX4、TGF-β_(1)表达水平。结果:(1)与正常组比较,模型组实验大鼠24 h-UTP显著增高(P<0.01);模型组实验大鼠Cr、BUN含量水平显著升高(P<0.01),TP、ALB含量水平显著降低(P<0.01);模型组实验大鼠血清AngⅡ含量显著升高(P<0.01);模型组实验大鼠肾小球球囊间隙明显增宽,可见坏死肾小球,肾间质明显增宽伴有大量炎细胞浸润,大量肾小管管腔有褐色沉淀物阻塞,无规整肾小管,肾间质有大量胶原纤维沉积,肾脏血管周围、肾小囊壁层囊壁外、肾小球基底膜和肾小管基底膜胶原纤维明显增多;模型组实验大鼠AT1R、NOX4在肾小球、肾小管表达明显增强,TGF-β_(1)在肾小管表达明显增强,COL1A1、COL3A1在肾间质表达明显增强;模型组实验大鼠AT1R、TGF-β_(1)mRNA表达显著增强(P<0.01),NOX4 mRNA表达显著减弱(P<0.01);AT1R、NOX4、TGF-β_(1)蛋白表达显著增强(P<0.01)。(2)与模型组比较,加味真武汤干预后,24 h-UTP显著降低(P<0.01);Cr、BUN含量水平显著降低(P<0.01),TP、ALB含量水平显著升高(P<0.01);AngⅡ含量显著下降(P<0.01);肾脏病理损害减轻;AT1R、NOX4、TGF-β_(1)、COL1A1、COL3A1在肾小球、肾小管、肾间质达减弱;AT1R、TGF-β_(1) mRNA表达显著下降(P<0.01),NOX4 mRNA表达显著升高(P<0.01);AT1R、NOX4、TGF-β_(1)蛋白表达显著减弱(P<0.01);中药组表现出明显的量效趋势。结论:加味真武汤可能通过降低CRF大鼠血清及肾组织中AngⅡ、AT1R、NOX4、TGF-β_(1)表达,延缓肾间质纤维化进展,从而减轻肾脏病理损害,减少蛋白尿,保护肾功能,达到延缓CRF进展的目的,且中药组具有量效趋势。

NADPH氧化酶在大鼠心肌梗死后左室重构中的作用

目的探讨还原型辅酶Ⅱ(NADPH)氧化酶在大鼠心肌梗死后左室重构中的作用。方法 25只SD大鼠随机分为四组:心肌梗死组(A组,7只)、心肌梗死+夹竹桃麻素15mg.kg-1.d-1组(B组,6只)、假手术组(C组,6只)和假手术+生理盐水组(D组,6只)。6周后处死大鼠,称取心脏和左室重量,ELISA法检测胶原蛋白Ⅰ、Ⅲ含量,TUNEL法检测心肌细胞凋亡并分析其与左室射血分数(LVEF)的关系。结果与A组相比,B、C、D组心脏及左室重量指数、胶原蛋白Ⅰ含量及Ⅰ/Ⅲ比值、心肌细胞凋亡指数均明显降低(P<0.05或P<0.01),而LVEF则显著增高(P<0.01)。心肌细胞凋亡指数与LVEF呈负相关(r=-0.757,P<0.01)。结论心肌梗死后NADPH氧化酶激活可能是导致左室重构的重要原因之一。

NOX2在黄连素减轻Aβ所致神经元氧化应激损伤中的作用

目的:探讨还原型辅酶氧化酶Ⅱ(NADPH oxidase II,NOX2)是否参与了黄连素(Berberine,BBR)对β淀粉样蛋白(βAmyloid,Aβ)诱导的神经元损伤的保护作用。方法:将HT22神经元细胞分为5组,分别为正常培养的Control组、10μM的Aβ损伤组(Aβ)、1μM的BBR保护组(BBR+Aβ)、NOX2-siRNA干扰组(NOX2-siRNA+BBR+Aβ)和乱序si RNA处理组(SC-si RNA+BBR+Aβ),孵育24 h后,采用噻唑蓝法(Methylthiazolyldiphenyl-tetrazolium, MTT)检测细胞活力,试剂盒检测培养基内乳酸脱氢酶(Lactic Dehydogenase,LDH)水平,Western blot检测细胞凋亡相关蛋白Cleaved caspase-3和NOX2蛋白表达、试剂盒检测细胞内活性氧(Reactive Oxygen Species,ROS)和戊二醛(Malondialdehyde,MDA)水平。结果:与Control组相比,10μM的Aβ可显著下调HT22细胞活力,增加LDH释放和细胞内ROS及MDA水平,上调Cleaved caspase-3和NOX2蛋白表达(P<0.05);1μM的BBR可显著抑制Aβ对神经元细胞产生的上述氧化损伤作用(P<0.05),而NOX2-siRNA显著逆转了BBR对Aβ诱导的HT22神经元细胞的保护作用(P<0.05),而SC-si RNA未对BBR的上述细胞保护作用产生显著影响(P>0.05)。结论:NOX2蛋白介导了BBR对暴露于Aβ中的神经元细胞的保护作用。