辐射敏感性启动子调控CD基因表达联合^(125)Ⅰ照射对膀胱癌EJ细胞的杀伤作用

以脂质体介导的辐射敏感性基因联合胞嘧啶脱氨酶(cytosine deaminase,CD)基因转染膀胱癌EJ细胞,研究放射性核素125I照射后5-氟胞嘧啶(5-fluorocytosine,5-FC)对转染膀胱癌EJ细胞的杀伤作用。人工合成辐射敏感性启动子E8,将启动子克隆至质粒pCD2的CD基因上游,构建以E8为启动子、CD基因为目的基因的新质粒,并采用DNA测序法测定E8和CD基因的序列;脂质体Lipofectamine2000介导pE8-CD转染膀胱癌EJ细胞,用131I照射(吸收剂量为2Gy)后,蛋白质免疫印迹分析(Western blot)测定CD蛋白表达;在转染EJ细胞中分别加入不同剂量125I和5-FC,四唑盐比色法(MTT法)测定各组细胞存活率,并以未经125I照射组、未加5-FC组和5-氟尿嘧啶(5-FU)组(阳性对照组)进行对照。DNA测序显示构建的pE8-CD质粒含E8启动子及CD基因序列;Western blot可检测到CD基因表达;125I加5-FC组细胞存活率明显低于未经125I照射组及未加5-FC组,与5-FU组相近。这表明放射性核素与基因治疗联合对肿瘤细胞具有协同杀伤作用。