pEgr-ssEndostatin的构建及其在体外的辐射诱导表达

为探讨 pEgr-ssEndostatin 重组质粒转染 B16 细胞后接受不同辐射剂量以及接受同一剂量不同时程endostatin 表达的规律。采用 RT-PCR 方法从鼠肝脏中扩增出 Endostatin cDNA,连入信号肽,构建了pEgr?ssEndostatin 重组质粒,用脂质体介导的转染法转染小鼠 B16 细胞,用 ELISA 方法检测 B16 细胞上清中endostatin 的表达水平。结果表明的分泌型 Endostatin 序列与报道完全一致,Egr-1 启动子和 Endostatin cDNA正确插入表达载体 pcDNA3.1;pEfr-ssEndostatin 具有辐射诱导表达特性。提示小鼠 Endostatin 基因成功地被克隆和表达,Egr-1 启动子具有辐射激活和诱导下游基因表达增强的功能。

γ干扰素和内皮抑素双基因表达质粒在Lewis肺癌细胞中的辐射诱导表达

目的构建双基因表达质粒pEgr-IFNγ-endostatin并检测其在Lewis肺癌细胞中的辐射诱导表达。方法利用基因重组技术构建含Egr-1启动子的IFNγ和endostatin双基因表达质粒,脂质体介导体外转染Lewis肺癌细胞,用酶联免疫吸附法(ELISA)检测不同剂量X射线诱导IFNγ和endostatin表达的量效关系和时程。结果酶切鉴定证实Eg-r1启动子、IFNγ和endostatin基因正确插入双基因表达载体pIRES1neo;不同剂量X射线照射转染该重组质粒的Lewis肺癌细胞上清中IFNγ和endostatin表达量明显高于假照组(均P<0.001),其中5Gy照后表达量最高,分别为假照组的4.14倍和2.92倍;2GyX射线照后Lewis肺癌细胞上清中IFNγ和endostatin含量随时间延长而增加,照后36h分别为照射前的3.75倍和3.02倍(均P<0.001)。

辐射诱导转录子RIGb cDNA对HeLa细胞增殖的抑制作用

核酸序列同源性分析和RT -PCR确定辐射诱导转录子RIGb是染色质重构基因CHD6表达的一个剪接转录子.Northern杂交结果表明,0 . 5Gyγ射线诱导RIGbmRNA表达增加,但4Gy大剂量照射对其表达无明显的影响.正常成人组织Northern杂交结果显示,RIGb基因在心脏、肝脏和睾丸中有高表达.细胞生长曲线分析结果表明,转染和稳定表达RIGb的人宫颈癌细胞(HeLa)的增殖生长受到明显抑制,细胞周期分析发现G1/S期阻滞.

RAC2对黑色素瘤细胞辐射敏感性的影响

黑色素瘤具有恶性程度高、转移早、死亡率高等特点,而且对常规放射治疗不敏感,因此,提高黑色素瘤细胞的辐射敏感性对于此种疾病的治疗具有重要意义。本研究中构建了辐射诱导型过表达Ras相关的C3肉毒素底物2(RAC2)和敲低RAC2的黑色素瘤细胞系,通过测定其辐照后的克隆存活率、γH2AX foci水平、ROS产额以及NADPH氧化酶活性研究了RAC2基因对于黑色素瘤细胞辐射敏感性的影响及可能的作用机制,发现RAC2能通过增强NADPH氧化酶活性和提高ROS产额显著增强黑色素瘤细胞的辐射敏感性。

射线诱导PIRES—Egr-1-IFN-γ在小鼠体内的表达

电离辐射可迅速诱导细胞中早期生长反应（Egr-1）基因的表达，Egr-1基因启动子含有6个CArG元件，电离辐射通过细胞产生活性氧自由基作用于CArG元件诱导Egr-1的表达，用Egr-1启动子经辐射可诱导下游基因的超强表达。根据Egr-1的辐射诱导特性，利用Egr-1启动子区的顺式作用元件以及调节免疫的基因来构建辐射诱导表达调控系统，以实现肿瘤的基因治疗联合放射治疗，又称基因．放射治疗是近年提出的肿瘤治疗新思路。本研究初步探讨放疗诱导Egr-1启动的IFN-γ了基因（PIRES-Egr-1-IFN-γ质粒）在小鼠体内表达的时效和量效关系，为基因．放射治疗的临床应用提供依据。

PIRES—EGR—1—endostatin基因放疗抗肿瘤效应的实验性研究

肿瘤基因一放疗（gene—radiotherapy，GR）是目前研究热点，电离辐射可启动重组表达载体中早期生长反应因子1（early growth response-1，EGR-1）同时诱导下游基因的超强表达。根据EGR-1的辐射诱导特性，利用EGR-1启动子区的顺式作用元件以及抗肿瘤目的基因来构建辐射诱导表达调控系统，以实现肿瘤基因治疗联合放疗。本研究充分利用放疗和基因治疗各自的优势，以及它们协同抗肿瘤效应，以提高肿瘤治疗疗效，为GR临床应用提供依据。