TGF-β_1对人输尿管平滑肌细胞增殖和迁移及α-SMA表达的影响

目的探讨外源性转化生长因子-β_1(transforming growth factor-β_1,TGF-β_1)对人输尿管平滑肌细胞(USMCs)生物学功能的影响。方法取正常的输尿管平滑肌细胞分为4组:1对照组;2TGF-β_1组(10μg/L TGF-β_1处理);3TGF-β_1拮抗剂组(30μmol/L SB-431542处理);4TGF-β_1+TGF-β_1拮抗剂组(10μg/L TGF-β_1+30μmol/L SB-431542处理)。MTT法检测各组输尿管平滑肌细胞在处理0、24、48、72h的增殖情况;细胞划痕实验检测各组输尿管平滑肌细胞处理24h、48h时的迁移能力;各组细胞处理48h后分别应用RT-qPCR和Western blot检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达变化。结果MTT实验显示与对照组相比,TGF-β_1处理24h后USMCs增殖率增加(P<0.05),处理48h、72h后增殖最明显(P<0.01),拮抗剂组细胞生长明显受抑制(P<0.05或P<0.01),TGF-β_1联合SB-431542共同处理细胞后其增殖活性与对照组相比无明显差异;细胞划痕实验显示TGF-β_1组与对照组相比,各时间点细胞迁移距离明显增加(P<0.01),拮抗剂组24h和48h细胞迁移距离与对照组相比明显减小(P<0.01),TGF-β_1联合拮抗剂处理组迁移距离与对照组相比差异无统计学意义;RT-qPCR和Western blot结果显示:与对照组相比,经TGF-β_1处理组α-SMA mRNA和蛋白的表达明显增加(均P<0.01),TGF-β_1拮抗剂则明显下调α-SMA mRNA和蛋白的表达(P<0.01)。结论 TGF-β_1能够明显上调输尿管平滑肌细胞中α-SMA mRNA和蛋白的表达,并能增强细胞增殖和迁移的生物活性,拮抗TGF-β_1信号路径可明显对α-SMA的表达及细胞增殖和迁移产生抑制效应。

神经源性尿路功能障碍大鼠输尿管平滑肌细胞Ca2＋变化的意义

目的探讨神经源性尿路功能障碍（NUTD）早期输尿管平滑肌细胞（USMC）内Ca2＋的变化及意义。方法选取45只SD大鼠按随机数字表法均分为NUTD组、实验对照组（EC组）和空白对照组（BC组）。其中NUTD组离断第1腰椎并破坏骶段脊髓；EC组仅咬除棘突，未破坏脊髓；BC组未争手术处理。术后1周行影像尿动力学检查，观察3组大鼠逼尿肌功能及膀胱输尿管返流发生情况。模型建立后6周，3组大鼠均行影像尿动力学检查，采用急性酶法获得USMC。应用激光共聚焦显微镜观察并比较3组细胞内Ca2＋浓度差异，并分别用10-8mol／L、10^-7mol／L、10^-6mol／L的BayK8644处理NUTD组细胞，比较其对细胞内Ca2＋浓度的影响。结果模型建立6周后，NUTD组大鼠均表现为膀胱逼尿肌无收缩，无逼尿肌过度活动和膀胱输尿管返流。所得细胞免疫荧光证实为USMC。NUTD组USMC内Ca2＋荧光强度（FI）（9．80±1．11）显著低于EC组（32．06±3．67）和Bc组（31．44±2．82），组间比较差异有统计学意义（P〈0．05）；10^-8mol／L、10^-7mol／L、10^-6mol／L的BayK8044处理NUTD组细胞的FI相对增加值分别是3．80±1．30、10．04±2．15、19．89±2．06，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论USMC内Ca2＋浓度降低可能是神经源性输尿管原发性功能障碍的重要因素之一，钙通道激动剂可对功能受损的USMC内异常Ca2＋浓度发挥有效调节作用。

输尿管上皮细胞及平滑肌细胞原代培养方法的比较

目的 比较组织块法与酶消化法两种不同细胞原代培养方法,探讨更有效的输尿管上皮细胞及平滑肌细胞的体外培养方法.方法 取临床肾癌切除术后患者的1段输尿管,分成2组,分别利用组织块法及酶消化法进行原代培养,比较两种方法培养的尿路上皮细胞及平滑肌细胞的成功率以及细胞长出所需平均时间.通过倒置显微镜、免疫组织化学染色法进行原代培养细胞的鉴定.结果 应用组织块法细胞原代培养成功率明显高于酶消化法.输尿管上皮细胞组织块法成功率为86.7％,细胞长出所需时间为（6.25±1.50）d;酶消化法成功率为20.0％,细胞长出所需时间为（3.15 ±0.80）d,两种方法获得的细胞均符合正常输尿管上皮的细胞形态及生物学特征,生长良好.输尿管平滑肌细胞组织块法成功率为66.7％,细胞长出所需时间为（5.05±1.50）d;酶消化法成功率为13.3％,细胞长出所需时间为（2.00±1.20）d,两种方法获得的细胞均符合正常输尿管平滑肌细胞形态及生物学特征,生长良好.结论 组织块法原代培养输尿管上皮细胞及平滑肌细胞培养成功率明显高于酶消化法,酶消化法细胞长出时间明显短于组织块法.