免疫性血小板输注无效患者HLA/HPA抗体特性分析及其对血小板输注效果的影响

目的 探讨免疫性血小板输注无效(PTR)患者HLA/HPA抗体特异性分布特征及其对血小板输注效果的影响。方法 本研究以86例免疫性PTR患者为研究对象,收集其性别、年龄、身高、体重、配血次数、疾病类型、输注前后血小板计数等临床资料,通过微珠法进行HLA特异性抗体的检测,并分析抗体特性对血小板输注效果的影响。结果 86例PTR患者中,单独HLA抗体、单独HPA抗体、HLA+HPA抗体阳性的患者分别为72例(83.72%)、8例(9.30%)、6例(6.98%)。HLA抗体在各位点中检出频率最高的抗体对应等位基因分别为A*25:01、B*15:12、C*02:02(和C*17:01),检出率分别为81.48%、87.04%、48.15%;而对应抗原表位出现频率最高的前三位为163LG、97V、71ATD,检出率分别为87.04%、77.78%、74.07%。仅存在HLA抗体的患者,输注交叉配型相合血小板的24 h血小板计数纠正增加指数(CCI)及输注有效情况均明显优于随机血小板(P<0.01)。在血小板交叉配型阴性结果的患者中,HLA抗体强度与交叉配型相合血小板的24 h CCI值及输注有效情况呈负相关关系,强度越高,输注效果越差(P<0.01)。HLA抗体强度为中、低等水平的患者,输注交叉配型相合血小板的24 h CCI值及输注有效情况均优于输注随机血小板(P<0.05)。结论 本研究所得到的PTR患者HLA/HPA抗体特性及其对血小板输注效果影响的结果,可为血小板库建立时供者的选择提供指导,同时对临床PTR患者的治疗方式选择有一定的参考价值。

因HLA和CD36复合抗体致血小板输注无效患者的配型策略

目的为HLA和CD36复合抗体所致血小板输注无效(PTR)患者寻求相合或相容的供者血小板输注。方法采用ELISA方法检测PTR患者的血小板抗体及HLA⁃Ⅰ类抗体特异性;运用MATCH IT!和HLA Matchmaker软件,分析患者HLA⁃Ⅰ类抗体特异性及相应抗原决定簇(epitopes);采用HLA⁃SSO分型技术,获得供、患者的HLA基因型;根据HLA⁃I类抗原交叉反应组(CREG)或HLA表位配型(Eplet)策略,寻找与PTR患者相合或相容的供者血小板;通过血小板抗原单克隆抗体特异性免疫固定检测技术(MAIPA)和血小板免疫荧光流式检测(PIFT)鉴定匹配程度;最后,通过血小板计数纠正增加指数(CCI)评估血小板输注效果。结果2名PTR患者体内检测到针对HLA⁃Ⅰ类和CD36的复合抗体,且CD36流式表型为Ⅰ型缺失;抗体特异性检测结果显示,患者1和患者2的血清中存在高频的HLA⁃Ⅰ类抗体,PRA分别为56%(54/96)和53%(51/96);运用HLA的CREG和Eplet配型策略,在CD36缺失供者库分别筛选到与患者1匹配等级C的供者1名,与患者2匹配等级D的供者1名,且选择的供者均规避患者HLA⁃Ⅰ类抗体表位所针对的抗原;MAIPA和PIFT结果亦证实患者与供者血小板无免疫反应,且患者2输注相容血小板24 h CCI>4.5。结论针对HLA和CD36复合抗体所致PTR患者,可联合运用血清学交叉配型、HLA⁃CREG及Eplet配型策略,选择CD36缺失,规避HLA⁃Ⅰ类抗体对应抗原且HLA表位匹配的供者血小板。

血小板输注无效患者的HLA-Ⅰ类抗体特性分析

目的 分析血小板输注无效患者的HLA-Ⅰ类抗体特性。方法 本研究以65例血小板输注无效患者为对象。采用Luminex平台进行血小板相关抗体筛查和HLA-Ⅰ类抗体特异性鉴定。计算不同等位基因对应抗原的相对免疫原性。结果 65例标本有50例检出HLA-Ⅰ类抗体,且均包括HLA-A抗体和HLA-B抗体。河南汉族人群中HLA-A、B位点频率最高的等位基因A~*11:01和B~*13:02对应的抗体阳性率分别为0.33、0.65,相对免疫原性为0.1130和0.1838。而A~*34:01在河南人群的等位基因频率仅为0.0004,其对应抗原的相对免疫原性高达48.7953;同样,B~*44:02的等位基因频率仅为0.0001,其对应抗原的相对免疫原性高达127.4204。结论 HLA-Ⅰ类抗体对应抗原的免疫原性存在差异。通过分析抗体特性及抗原相对免疫原性可为患者选择合适供者,提高输注效果,预防新的抗体产生时提供数据支撑。

交叉配型血小板在血液病患者移植后血小板输注无效中的应用

目的 探讨血小板抗体筛查及交叉匹配血小板对于异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)后免疫性血小板输注无效(PTR)患者的应用价值。方法 选取2020年6月至2022年8月中国科学技术大学附属第一医院血液科接受过allo-HSCT后发生免疫性PTR患者16例,共输注单采血小板253次。根据血小板输注前交叉配型试验结果进行分组,结果阴性为配合性输注组(37次),阳性为非配合性输注组(216次);其中13例HLA-I类抗体阳性患者,根据输注前血小板交叉配型结果,分为HLA-I类抗体阳性配合性输注组(28次),HLA-I类抗体阳性非配合性输注组(158次)。以血小板输注后24小时血小板校正后增高指数(CCI)为衡量指标,分析不同输注策略对allo-HSCT后PTR患者血小板输注疗效的影响。结果 16例PTR患者,其中HLA-I类抗体阳性13例,HPA抗体阳性3例。配合性输注组血小板输注24 h-CCI和有效率分别为7.188(1.035,11.9)和62.16%,高于非配合性输注组0(0,3.546)和22.69%,差异有统计学意义(P<0.001);HLA-I类抗体阳性的PTR患者配合性输注组24h-CCI及有效率为7.722(2.118,13.41)、71.43%,明显高于非配合性输注组[0(-0.648,4.522)和25.32%],差异有统计学意义(P<0.001)。结论 交叉匹配的血小板输注可以明显提高alloHSCT后免疫性PTR患者血小板输注疗效。

血小板输注无效患者HLA-Ⅰ类抗体产生率及其eplets的分析

目的:筛选血小板输注无效(platelet transfusion refractoriness,PTR)的患者体内高免疫原性的人类白细胞抗原分子(human leukocyte antigen,HLA)-Ⅰ类抗体出现的频率并分析该基因型的eplets情况,以避免HLA-Ⅰ类抗体产生,提高血小板输注效果。方法:采用LUMINEX单抗原微珠包被法对133例PTR患者血清中可能存在的HLA-Ⅰ类抗体进行检测,利用HLA eplet网站(https://www.epregistry.com.br/)分析经抗体验证的eplets。结果:HLA-Ⅰ类抗体在PTR患者中的发生率为64.66%。其中,A*68:02、A*23:01、A*25:01、A*24:03、A*32:01、A*34:02、A*68:01等和B*57:01、B*15:12、B*49:01、B*08:01、B*15:16、B*56:01等基因型在人群中出现频率很低但抗体产生率较高。分析发现这些高免疫原性HLA分子大多含有一个或多个高免疫原性的eplets。结论:HLA-Ⅰ类的eplets个体间免疫原性相差较大,错配的eplets并不等价,血小板配型时应该避免这些高风险的eplets错配。

1例脐血移植植入失败伴免疫性血小板输注无效MDS患者报告

1病例资料患者,35岁,女性,因“乏力,全血细胞减少”入院,追溯病史,2012年6月于苏州大学第一附属医院血液科诊断为骨髓增生异常综合征(myelodysplastic syndrome, MDS)非特指型。口服环孢菌素和雄激素治疗,病情曾相对稳定,不依赖输血,血型B型Rh(D)阳性,孕2产2。2017年患者第二次怀孕后病情进展,需要依赖血小板和红细胞输注支持。2020年12月,病情进一步恶化,输血频繁。抗HLA-I类和Ⅱ类抗体的平均荧光强度(meanfluorescenceintensity,MFI)分别为8474.2和256.9(LABScreen混合试剂盒,One Lambda,加利福尼亚州卡诺加公园,美国),无血小板抗原(human platelet antigens, HPA)抗体。

HLA单抗原特异性抗体检测技术治疗血小板输注无效的应用

目的 分析血小板输注无效(PTR)患者的HLA-I类抗体分布特征,探讨供者特异性抗体(DSA)回避策略对血小板输注疗效的影响。方法 选取2020年4月至2022年5月复旦大学附属儿科医院(安徽省儿童医院)、中国科学技术大学附属第一医院(安徽省立医院)等送检的血小板输注无效患者223例,采用固相凝集法对PTR患者进行血小板抗体筛查,并对确定为HLA-I类抗体阳性患者采用HLA单抗原特异性抗体检测技术进行HLA-I类抗体高分检测,通过DSA回避策略,选择抗体对应抗原阴性的供者血小板进行配合性输注,根据患者24 h血小板计数增加值(CCI)评价血小板输注效果。结果 在223例PTR患者抗体筛查中发现130例患者抗体筛查为阳性,并对确定为HLA-I类抗体的42例患者进行HLA-I类特异性抗体鉴定,HLA-I类特异性抗体阳性率为32.31%(42/130),其中HLA-I类抗体强阳性者21例、中阳性者37例、弱阳性者41例,抗体强弱检出率分别为50%(21/42)、88.10%(37/42)和97.62%(41/42)。统计发现37例PTR患者HLA-I类特异性抗体(Raw Value>4 000)共检出97种,检出率最高的抗体分别是抗-B*57:01、抗-A*23:01、抗-B*40:01、抗-B*27:08、抗-B*27:03、抗-B*58:01、抗-B*13:02、抗-A*24:02、抗-A*24:03、抗-B*07:02、抗-B*81:01。其中13例患者先后申请了21次配型实验,供者数合计为210人次,交叉配合结果不合为141人次,交叉配合结果相合为69人次,6例进行了输注后首次校准血小板计数增加值(CCI)计算,24 h CCI值分别为:4 850、32 650、17 336、21 318、7 265、16 335,均显示输注有效,有效率为100%(6/6)。结论 了解了部分PTR患者体内HLA-I类抗体的分布特征。对产生HLA-I类抗体的免疫性PTR患者,采取DSA回避策略可提高HLA-I类抗体的免疫性PTR患者患者的输注疗效。

MASPAT配型相合血小板输注无效的异基因造血干细胞移植患者的血小板输注策略

目的:探讨异基因造血干细胞移植患者血小板抗体固相凝集法(MASPAT)配型相合血小板输注无效的原因及血小板输注策略。方法:选取1例因输血诱导产生供者特异性HLA抗体(DSA),且该DSA导致患者移植失败和MASPAT配型相合血小板输注无效的案例,详细分析该患者血小板输注无效原因及血小板输注策略。结果:患者女,32岁,以“发热、白细胞减少”为主要表现起病,于外院明确诊断为急性髓系白血病(高危),化疗缓解后拟行造血干细胞移植入院。在化疗过程中,患者因输注血小板产生DSA,且该DSA存在与首次移植供者不合的HLA基因位点,导致首次移植原发植入失败。该患者在移植前后多次进行血小板输注,结果显示,MASPAT配型相合血小板输注有效率仅为35.3%,进一步分析血小板输注无效的原因为MASPAT方法漏检了抗体。行二次造血干细胞移植时,选择了DSA-供者,且规避初次移植过程中配型相合但输注无效的血小板,结果该患者移植成功,顺利出院。结论:DSA可引发移植失败或使移植物失功。对于已经产生DSA的患者,在输注血小板前仅采用MASPAT配型相合的血小板输注策略会漏检抗体,导致血小板输注无效。

血小板输注无效临床诊疗困境

血小板输注无效(PTR)是多次输注血小板患者常见的并发症,不仅会导致危及生命的出血风险、住院时间延长和生存期降低等,还会因反复输血增加输血安全问题。本文就PTR发生的原因以及对策进行了回顾总结,重点探讨免疫因素导致的PTR和相应的血小板输注策略,以期对解决PTR困境提供思路。

HPA配型在免疫性血小板输注无效中的应用研究

目的探讨以HPA配型解决免疫性血小板输注无效的方案。方法 1)建立PCR-SSP方法检测HPA-1～5基因型检测方法,建立机采血小板供者库;2)采用微柱凝胶法和Capture-P法对32名血小板输血无效患者作血小板同种抗体筛查,并对2种方法比较;3)对血小板同种抗体筛查阳性患者采用已知HPA基因型的标准谱血小板作抗体鉴定并采取HPA基因型同型输注的原则寻找供者。结果 1)采用PCR-SSP方法成功检测出HPA-1～5基因型,并对1 000名血小板供者的HPA-1～5基因型定型;2)32例血小板输注无效病例中,微柱凝胶法检测血小板同种抗体阳性率为50%,Capture-P法血小板抗体阳性检出率为40%;3)32例血小板输血无效病例中2种方法同时血小板抗体阳性13例,其中2例鉴定为抗-HPA,分别为抗-HPA-5b(P=1/84)、抗-HPA-1a(P=1/55)。结论对抗-HPA引起的血小板输注无效患者采用HPA基因型相合的方法寻找供者是有效的。

白细胞滤过的血小板预防血小板输注无效和人类白细胞抗原同种免疫反应的Meta分析

目的系统评价白细胞滤过的血小板与标准血小板输注预防血小板输注无效(PTR)和人类白细胞抗原(HLA)同种免疫反应的效果。方法电子检索Medline数据库、EMBASE、The Cochrane Library和CBM收录的白细胞滤过血小板与标准血小板输注的随机或半随机对照试验(截至2009年12月31日),对预防PTR和HLA同种免疫反应的效果进行Meta分析。结果共检索到558篇文献,最终纳入7篇英文研究。Meta分析显示,白细胞滤过的血小板预防PTR的效果优于标准血小板[RR=0.59,95%CI(0.42,0.82),P=0.002],且发生HLA同种免疫反应的风险低于标准血小板输注[RR=0.49,95%CI(0.33,0.74),P=0.0006]。HLA同种免疫反应的风险差异在急性髓细胞样白血病患者中有统计学意义[RR=0.42,95%CI(0.32,0.56),P<0.00001],而在急性淋巴细胞白血病患者中由于样本量有限,尚未发现统计学意义[RR=0.50,95%CI(0.10,2.41),P=0.39]。结论现有研究证据显示输注白细胞滤过的血小板可减少PTR和HLA同种免疫反应的发生,预防效果优于标准血小板。但因纳入研究数量较少、样本量小、方法学质量不高,尚需开展大样本、高质量的研究进一步证实该结果。

血小板人白细胞抗原和/或人血小板抗原基因配型预防血小板输注无效的Meta分析

血小板输注是治疗因血小板减少或功能障碍疾病所致出血的重要手段，但多次输注血小板后出现血小板输注无效（platelet transfusion refractoriness，PTR）的情况日益突出。研究显示，血液病及肿瘤患者PTR发生率达7％-34％^[1-3]，血小板减少患者多次输血后门R发生率为30％-70％^[4]。阳R不仅延误病情，加重患者负担，也造成了血小板资源的浪费。

人类血小板抗原1—16基因与血小板输注无效风险研究

目的探讨HPA-1—16基因多态性分布与血小板输注无效相关性。方法应用PCR-SSP法对上海地区268名汉族人群行HPA-1—16基因检测;应用ELISA法对49名反复输血的恶性血液病患者行血小板抗-HLA-Ⅰ与抗-HPA筛查试验。结果上海地区汉族人群HPA-1—16系统中,HPA-1—6,15系统等位基因频率1a=0.9889,1b=0.0111,2a=0.8881,2b=0.1119,3a=0.5989,3b=0.4011,4a=0.9963,4b=0.0037,5a=0.9907,5b=0.0093,6a=0.9832,6b=0.0168,15a=0.6418,15b=0.3582,均呈多态性分布;其余HPA-7—14,16系统等位基因均呈单线性分布。HPA-1,2,4—6,15系统主要以aa纯合子基因型频率分别为0.9776,0.7799,0.9925,0.9813,0.9664,0.4328。在HPA-2、3、15系统中出现bb纯合子基因型,其频率均为0.0037,0.1530,0.1492外,其余系统均未出现bb纯合子基因型。另外,在HPA-1—6,15系统中出现ab杂合子基因型,其频率分别为0.0224,0.2164,0.4963,0.0075,0.0187,0.0336,0.4180,以HPA-3杂合度最高,其次次序为HPA-15、HPA-2。在随机输血中,HPA不合发生率以HPA-3为最高(0.3650),其次分别为HPA-15(0.3541)、HPA-2(0.1790)。49名反复输血的恶性血液病患者中,有61.22%(30名)输血后相继出现抗-HLA-Ⅰ,而始终未检出抗-HPA。结论上海地区汉族人群血小板输注无效的主要原因是抗-HLA-Ⅰ所致;只需检测供者与受(患)者的HPA-2、-3、-15基因相合,就可基本达到血小板匹配性输注。

HLA抗体引起血小板输注无效的探讨

目的探讨HLA抗体引起血小板输注无效的原因,以及HLA抗体特异性。方法选择19例具有生育史或输血史或移植史的符合血小板输注无效的临床诊断患者。使用HLA基因分型试剂盒检测HLA-Ⅰ类抗原(HLA-A、HLA-B),使用Antigen Tray-LAT1240检测试剂盒对HLA抗体进行特异性分析。结果19例患者的HLA-A、B抗原HLA-A*02(0.275),HLA-A*11(0.275);HLA-B*13(0.111),HLA-B*46(0.173),HLA-B*60(0.142),基因频率表达高。其中2例PRA检测结果<20%,16例PRA检测结果在20%～80%之间,1例PRA检测结果>80%。分析HLA抗体的特异性,其中抗-A2(36.8%),抗-A11(26.3%),抗-A19(31.6%),抗-B13(26.3%),抗-B40(31.6%)的抗体表达较高。结论HLA抗体引起血小板输注无效,主要和HLA-Ⅰ类抗原频率密切相关,针对相应的特异性抗体,寻找相合HLA-Ⅰ类抗原的血小板可以提高输注效果。

随机血小板输注无效患者的HLA抗体分析

目的 动态监测患者HLA抗体情况 ,了解HLA抗体在解决血小板无效输注中的临床意义及应用价值。方法 对各医院送检随机血小板无效输注患者在行交叉淋巴细胞毒实验配型血小板的同时 ,用ELISA法检测其HLA抗体及其强度。结果 在 90例随机血小板无效输注患者中 ,HLA抗体阳性率为 6 3% ;未成人组与成人组之间HLA抗体阳性率差异有显著性 ;动态观察 4例长期输注血小板患者 ,其HLA抗体强度随输注交叉淋巴细胞毒实验配型血小板数量的增加而逐渐减弱。结论 当患者出现血小板输注无效时 ,应首先检测其HLA抗体 ,如为幼儿应重点考虑使血小板破坏或消耗增加的非免疫因素 ;对长期输注血小板患者 ,应动态观察HLA抗体的变化。

血小板输注无效的临床分析

目的通过实验室检查和临床资料统计分析,明确感染、发热、肝脾肿大和血小板抗体等因素对血小板输注效果的影响。方法血小板的输注效果通过CCI等指标进行综合评价,血小板抗体采用ELISA法进行检测,感染、发热、肝脾肿大等因素的分析经临床资料统计获得。结果观察的30例患者共输注血小板568次,有174次发生血小板输注无效,其中输注前有感染症状的占59.8%(104/174),发热症状的占14.9%(26/174),肝脾肿大的占11.5%(20/174),血小板抗体的占13.8%(24/174)。结论感染是导致血小板输注无效的主要原因。

血小板交叉配型在免疫性输注无效患者中的临床应用

目的探讨血液病患者产生血小板抗体的影响因素及血小板抗体阳性患者经血小板交叉配型后的输注效果。方法用全自动血型仪,采用固相抗体检测法进行血小板抗体筛选及交叉配型,对血小板输注有效率进行统计学分析。结果血小板相关抗体的产生与妊娠史、输血史相关,对产生抗体的患者进行血小板交叉配型后,24h CCI>4.5者为86.7%。结论对于血小板抗体阳性的患者,在保证同型输注的基础上进行血小板交叉配型可以极大的提高血小板输注效率,减少血小板输注无效症的发生。

血小板相关抗体与血小板输注无效关系探讨

目的探讨血小板相关抗体(PAIgG)与血小板输注无效的关系。方法采用流式细胞术分别对42名特发性血小板减少性紫癜(ITP)患者及39名再生障碍性贫血患者的PAIgG进行检测,并分析其与血小板输注无效率的关系。结果ITP患者组、再生障碍性贫血组PAIgG阳性血小板百分率均明显高于正常对照组(P<0.01);PAIgG阳性的ITP患者及再生障碍性贫血患者中的血小板输注无效率均明显高于PAIgG阴性的患者(P<0.01;P<0.05)。结论PAIgG与血小板输注无效存在密切关系,是引起血小板输注无效的重要原因之一。

92例血小板输注无效的原因探讨

目的了解血小板输注无效的原因,以便做好预防工作。方法采用ELISA方法对92名血小板输注无效的患者进行血小板特异性抗体检测及HLA抗体检测,并调查其临床情况。结果 92名患者由免疫因素导致的PTR为61例(占66.3%),其中HLA抗体引起的血小板输注无效最常见(占40.2%)。在患者血清中多表现为GPⅡb/Ⅲa和GPⅠa/Ⅱa特异性糖蛋白抗体阳性。结论血小板输注无效的主要原因为免疫因素。因此提倡配合性血小板输注,以提高其治疗效果。

血小板输注无效患者的抗体监测及血小板配型的疗效评估

目的回顾性分析配型血小板对于血小板输注无效患者的长期疗效评估,以及对血小板特异性抗体进行监测。方法 2014年5月-12月共登记49名血小板输注无效患者的临床医疗记录,患者连续≥2次输注随机单采血小板24 h后的CCI值<4 500,即定义为血小板输注无效。血小板配型采用商品化的单克隆抗体固相法试剂盒,血小板特异性抗体检测采用酶联免疫吸附试验(ELISA)。结果 49名患者平均输注配型血小板4 U(2-11U不等),共输注了ABO同型的配型单采血小板194 U,24 h后CCI值显示:配型相合的血小板输注效果(7800±7000)明显优于输注随机单采血小板(1500±2100)(P<0.01)。每例患者初次及末次交叉配型的平均反应性分别为36.64%及29.01%(P>0.05),表示长期输注配型血小板的患者其免疫反应性无进一步增加的倾向。88.46%不相合配型是由抗-HLA引起,其中,单独引起的占57.69%,合并抗-HPA的占30.77%。结论 HLA和/或HPA同种免疫反应是临床引起血小板输注无效的重要因素,对于绝大多数患者而言,输注配型血小板可成为血小板输注无效的1项快速、有效的治疗措施。