我国首次分离到辛德毕斯病毒

1990年从新疆维吾尔自治区伊犁地区捕获的一组按蚊中分离到1株虫煤病毒,命名为XJ160。该毒株对BHK和C6/36细胞致病变,表现为圆缩,脱落。对乳小白鼠可致死,对3周龄鼠不致死。对酸、乙醚敏感,抵抗5-氟脱氧尿苷。电镜超薄切片观察病毒颗粒呈球形,具有包膜,直径58nm。蔗糖丙酮法制备的血凝素对羊红细胞有凝集作用。血清学鉴定提示该毒株与甲病毒属的SIN,CHIK,RR和EEE的免疫腹水呈阳性反应,而与SAG等5种甲病毒的免疫腹水呈阴性反应。与黄病毒组的10种及布尼亚组的5种免疫腹水亦呈阴性反应。中和试验表明SIN抗体能中和XJ-160病毒,中和指数为100000,其它抗体无中和作用。以上结果提示XJ-160病毒为披膜病毒科甲病毒属辛德毕斯病毒(Sindbis Virus)。

中国首次分离的辛德毕斯病毒XJ-160病毒株感染性全基因组cDNA克隆的构建与分析

报告了中国首次分离的辛德毕斯病毒XJ-160株的感染性全基因组cDNA克隆的构建与鉴定.利用RT-PCR方法获得覆盖病毒全长基因组的cDNA片段,以低拷贝质粒pBR322作为骨架,将基因组cDNA置于SP6 RNA聚合酶启动子之后,基因组3'末端带有35个连续的A,通过DNA重组技术组装成病毒基因组全长cDNA克隆.该克隆可在大肠杆菌DH5a中稳定扩增.经体外转录,RNA转录体转染BHK-21细胞,细胞发生病变,恢复病毒滴度达到107～108pFU/ml.全基因组cDNA克隆构建过程中引入的沉默突变(8 453位核苷酸由C变为T)产生Xba Ⅰ酶切位点作为遗传标记,在子代恢复病毒的基因组中稳定存在.从细胞病变的特征、BHK-21细胞的空斑形态、病毒的抗原性、病毒在细胞中的生长动力学特征以及对乳鼠的致病性等方面比较,恢复病毒和亲本病毒XJ-160没有显著区别,提示获得了具有感染性的XJ-160病毒全长cDNA克隆.该病毒感染性全基因组cDNA克隆可以作为反向遗传学系统,为进一步研究病毒复制和致病机制,以及开发相应的载体表达系统提供分子生物学工具.

XJ-160病毒为辛德毕斯病毒新亚型

XJ 16 0病毒是我国首次分离的辛德毕斯病毒 ,在对其全基因组核苷酸序列测定的基础上 ,对病毒基因组序列、病毒同源性和病毒系统进化等进行了较为详细的分析 ,结果表明 :XJ 16 0病毒具有典型的甲病毒属辛德毕斯病毒的序列特征。该病毒nsp3蛋白基因中有 11处缺失及两处插入 (45 17～ 5 485 ) ,涉及 90个核苷酸。核苷酸序列的系统进化分析表明 ,XJ 16 0病毒属于辛德毕斯病毒欧洲 /非洲亚组。病毒全基因组核苷酸序列进化分析显示 ,XJ 16 0病毒是一株新的甲病毒或辛德毕斯病毒的新亚型。

首次从云南蚊虫分离到辛德毕斯病毒及其鉴定

目的了解云南省虫媒病毒的存在和流行情况。方法2005年8月,在云南省勐海县采集蚊虫,蚊虫标本经研磨后,上清液接种BHK21细胞以分离病毒,用间接免疫荧光试验和RT-PCR等方法进行鉴定,并对病毒的分子生物学特征进行分析。结果采集到蚊虫标本9400只,其中分离到一株对BHK-21细胞能产生明显细胞病变的病毒(MX10)。该病毒经间接免疫荧光试验提示为甲病毒。用甲病毒属特异引物和Sindbis病毒E1基因特异引物对MX10病毒的RT-PCR扩增为阳性,经核酸序列测定分析证实该序列与Sindbis病毒泰国分离株(AF492770)同源性最高,为90.0%;与1987年分离自云南发热患者的YN87448株和1991年新疆按蚊分离株XJ-160的同源性分别为73.1%和72.0%。结论本次从勐海县蚊虫分离到的MX10病毒株为Sindbis病毒,并可能是Sindbis病毒的新亚型或新株系。

辛德毕斯病毒在BHK-21细胞中繁殖过程的研究

辛德毕斯病毒(Sindbis virus)在 BHK-21细胞中繁殖的一步生长曲线表明,病毒感染后2小时便可产生大量的子代病毒;感染后6小时,病毒滴度达到最高峰,为10~9TCID_(50)/ml。电镜技术显示了病毒粒子的形态结构与形态发生过程。本文还对 SbV 的代谢合成动态及对宿主细胞的影响进行了研究和讨论。

重组辛德毕斯病毒E基因痘苗病毒的构建

为了构建表达辛德毕斯病毒E基因的重组痘苗病毒,本研究通过基因重组的方法将辛德毕斯病毒E基因及绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)基因分别连接至痘苗病毒转移载体pSTK,酶切鉴定得到阳性重组质粒pSTK-SINE-EGFP。采用脂质体转染的方法,将该重组质粒与痘苗病毒天坛株共转染BHK-21细胞,通过同源重组获得重组痘苗病毒。利用EGFP筛选阳性重组痘苗病毒vTTVV-SINE-EGFP,收集感染重组痘苗病毒的BHK-21细胞,SDS-PAGE电泳检测辛德毕斯病毒E基因在细胞中的表达情况,Western blot分析表达产物的免疫原性。结果证明辛德毕斯病毒E基因能在重组痘苗病毒vTTVV-SINE-EGFP中获得表达,且表达产物具有良好的免疫原性。表达辛德毕斯病毒E基因的重组痘苗病毒的成功构建,为研制辛德毕斯病毒活载体疫苗奠定了基础。

云南辛德毕斯病毒的生物学性状研究

本文对云南首次分离到的Sindbis病毒进行了滤过试验、耐酸耐醚试验、致细胞病变、动物敏感性试验、血凝特性、空斑和毒力等试验研究 ,结果符合披膜病毒科的病毒特性。交叉血抑试验和免疫荧光试验 ,以及空斑减少中和试验进一步证实为甲病毒属的Sindbis病毒。其空斑纯化株的生物学特性也与原株相符 ,纯化株的制备为该株病毒分子生物学研究的准确性和一致性提供了条件。云南Sindbis病毒的首次分离具有重要的流行病学意义 ,其生物学特性研究结果对我省该病的诊断和防治具有重要的指导意义。

基孔肯雅病毒和辛德毕斯病毒可视化基因芯片与荧光基因芯片的建立

根据GenBank中收录的基孔肯雅病毒和辛德毕斯病毒E蛋白基因序列,设计及筛选针对2种病毒的寡核苷酸探针及引物,制备基孔肯雅病毒与辛德毕斯病毒可视化基因芯片与荧光基因芯片,对芯片的灵敏性、特异性进行了验证,并将可视化基因芯片、荧光基因芯片进行灵敏性比较.结果显示,制备的两种基因芯片都能检测到基孔肯雅病毒和辛德毕斯病毒特异性杂交信号.可视化基因芯片、荧光基因芯片检测两种病毒质粒的灵敏度达到9.1×103copies/mL,6.8×101copies/mL和9.1×104copies/mL,6.8×103copies/mL,与普通PCR比较差异显著.荧光基因芯片灵敏度是PCR方法的10倍,可视化基因芯片是荧光基因芯片灵敏度的100倍.模拟病毒检测过程特异性检验证明,可视化基因芯片都具有良好的特异性.本试验建立了基孔肯雅病毒与辛德毕斯病毒两种特异的可视化和荧光基因芯片检测方法,两种方法灵敏度高、特异性强,适用于基孔肯雅病毒与辛德毕斯病毒的流行病学调查和种特异性鉴定.

猪瘟病毒与辛德毕斯病毒成熟和释放特征的比较研究

电镜下观察了二种有囊膜的正链 ＲＮＡ 病毒——猪瘟病毒（ＣＳＦＶ）与辛德毕斯病毒（ＳｂＶ）感染的宿主细胞。在ＳｂＶ ６Ｋ 蛋白突变株感染的ＢＨＫ－２１ 细胞中，可清楚地显示病毒从细胞质膜出芽与释放的过程，并在细胞质中积累了大量的核衣壳。在ＣＳＦＶ 感染的Ｍ ＰＫ 细胞中首次观察到较多的病毒核衣壳与成熟的病毒粒子，因而有可能对其成熟与释放方式的不同进行比较研究。此外。

一株辛德毕斯病毒的基因组序列测定及分析

目的:对引进的一株辛德毕斯病毒的基因组序列进行测定,阐明其与已报道毒株序列的关系。方法:对辛德毕斯病毒基因组编码区进行分段RT-PCR扩增,对非编码区采用RACE法进行扩增,将扩增产物直接进行测序,应用DNAStar软件将测序结果拼接得到基因组序列,采用MEGA3.1软件对9株辛德毕斯病毒基因组序列进行系统进化发生树的构建。结果与结论:此株辛德毕斯病毒基因组共11663nt,编码3745个氨基酸残基,其中5'端的2/3基因组编码4种非结构蛋白NSp1、NSp2、NSp3和NSp4,3'端的1/3基因组编码5种结构蛋白E1、E2、E3、6K和C;结构基因和非结构基因之间有48nt的连接区为非翻译区;病毒基因组5'末端和3'末端分别有59、318nt的非编码区;序列同源性分析结果表明,此株病毒与S.A.AR86株的同源性最高,两者核苷酸序列的同源性为99.7%,氨基酸序列的同源性为99.6%,而与本室保存的另一辛德毕斯病毒MEI株的遗传进化关系稍远,系统进化发生树处于不同分支上。

辛德毕斯病毒YN87448株与宿主细胞凋亡的研究

为了了解云南辛德毕斯病毒在BHK2 1细胞上的生长特性 ,并观察该病毒在BHK2 1细胞、3d龄和 2周龄小白鼠中是否有凋亡反应出现。在接种后不同时间取样 ,检测病毒的滴度 ,电镜检测凋亡细胞 ,检测细胞的DNA阶梯。一步生长曲线结果表明病毒在出现CPE之前就有大量繁殖。秋水仙素对该病毒的成熟释放没有抑制作用。该病毒对BHK2 1。

云南省辛德毕斯病毒血清流行病学调查

采用血凝抑制试验 (HI)检测了 1998年采集的云南省 31个县市 1847份健康人血清中的辛德毕斯 (Sindbis)病毒抗体 ,阳性 35 6份 ,总阳性率为 19.2 7% ;其中健康人阳性率为 2 0 .71% (334 / 16 13) ,儿童阳性率为 1.33% (2 / 15 0 ) ,放牧人员阳性率为 49.0 3% (76 / 15 5 ) ,士兵阳性率为 2 .38% ,发热病人阳性率为 13.33% (2 0 / 15 0 ) ;不同县市抗体阳性率之间有显著差异 ,以滇西南及金沙江河谷地带较其它地区高 ,抗体阳性率与海拨、气温。

小白鼠经口感染辛德毕斯病毒的研究

辛德毕斯病毒经口途径可使小白鼠感染.并能在体内繁殖,经短期的病毒血症.侵入中枢神经系统。在脑、心、血、肺、肝、肾、胃、肠和脾等脏器内分离到病毒,其中脑内病毒量最高。此外,经腹腔和皮下途径.亦可使小白鼠感染辛德毕斯病毒。

辛德毕斯病毒非结构蛋白nsP2在细胞内的分布

应用免疫电镜技术,直观地显示出辛德毕斯病毒的nsP2蛋白存在于细胞核中以及它在核内的分布.将含有nsP2蛋白的一段SbV的cDNA转染细胞,结果表明,单独表达的nsP2仍可进入细胞核中.

辛德毕斯病毒6K蛋白在病毒成熟释放中的作用

应用多种细胞生物学技术,对辛德毕斯病毒(Sindbis Virus,SbV)的6K蛋白在细胞中的分布和转运动态及在病毒释放过程中的作用进行了探讨,结果表明:6K蛋白不仅存在于成熟病毒粒子中,而且在粗面内质网合成后及在向细胞质膜的转运过程中均与囊膜蛋白E2形成复合物。对6K蛋白酰基化位点突变株的研究结果表明,它与E2突变株在病毒形态发生方面有惊人的相似之处,说明SbV的出芽释放过程不仅仅是靠E2蛋白C端与病毒核衣壳的相互作用,6K蛋白的酰基化修饰可能在这个过程中也起着十分重要的作用。根据6K蛋白的二级结构的预测及综合上述实验结果,对SbV出芽释放的模式提出了新的补充。

辛德毕斯病毒装配及其6K蛋白与中间纤维的关系

用温和的选择性抽提方法与整装细胞电镜技术、DGD包埋-去包埋剂电镜技术相结合,对辛德毕斯病毒的装配与宿主细胞中间纤维的关系进行了探讨。电镜观察清晰地显示了病毒'装配中心'被中间纤维所网络,病毒的装配过程显然是以中间纤维为支架;正在装配的核壳体与已装配的核壳体紧密结合在中间纤维丝上。根据电镜照片分析,核壳体可能是沿中间纤维由装配中心向外扩散。应用人工合成6K 蛋白所得抗体进行胶体金标记,证明辛德毕斯病毒非结构性6K 蛋白也与中间纤维紧密结合。

福建省首次发现辛德毕斯病毒感染

目的：为了解福建省是否存在Sindbis病毒感染，作者在宁化县林区采集入群血清210分（包括不明发热病人），在军事医学科学院五所进行间接免疫荧光试验。结果：检出阳性27例，阳性率12．6％，并对感染者性别、年龄、民族、文化程度及在当地居住年限等进行统计分析，首次报告福建省林区存在Sindbis病毒感染。