辣木籽蛋白酶解物对小鼠肠道黏膜炎的改善作用

探讨辣木籽蛋白酶解物(Moringa oleifera Seed Protease Hydrolysate,MSPH)对小鼠肠道黏膜炎的改善作用。提取辣木籽蛋白并进行酶解,冷冻干燥得到MSPH;随机将雄性BALB/c小鼠分为空白对照(Con)组、模型(Mod)组和MSPH组(800 mg/kg·BW),每组6只,腹腔注射5-FU诱导小鼠肠道黏膜炎,MSPH灌胃干预。每天记录小鼠体质量;通过HE染色观察肠道组织形态学并计算绒毛高度/隐窝深度;酶联免疫法测定小鼠血清(INF-γ、SIgA、ROS、G-CSF、ET、D-LA)和小肠组织(IL-1β、IL-6、MDA、MPO、TNF-α)含量变化;实时荧光定量聚合酶链式反应检测小肠组织ZO-1和Occludin m RNA表达量。与Mod组相比,MSPH组小鼠在实验后期体质量显著提高(P=0.001 1),脾脏和胸腺指数分别增加16.22%和34.69%,肠绒毛高度/隐窝深度增加25.88%,血清中INF-γ、ROS、G-CSF、ET、D-LA含量分别降低16.85%、17.50%、14.22%、8.28%、9.27%,SIgA含量升高23.07%,小肠组织中IL-1β、IL-6、MDA、MPO、TNF-α含量分别降低9.72%、11.23%、9.74%、7.29%、5.17%,肠道组织ZO-1和Occludin mRNA表达量增加121.64%和29.35%。因此,MSPH可以通过减轻炎症和氧化应激及降低肠道通透性改善5-FU诱导的小鼠肠道黏膜炎。

超声改性对辣木籽蛋白体外消化特性的影响

以辣木籽水溶蛋白(MOWP)为原料,采用体外模拟消化模型和体外抗氧化模型探究不同超声功率处理对其体外消化特性及氧化活性的影响。结果表明:在胃肠连续消化期间因超声作用,MOWP消化率、水解度明显提高,随着超声功率的增加消化率先降低后上升,在超声功率650 W时,胃消化和胃肠连续消化的酶解液消化率分别达(68.52±1.70)%和(91.48±0.64)%;经过模拟胃消化和胃肠连续消化,蛋白质分子分解成分子质量更小的蛋白,两阶段内源荧光峰值波长发生变化,胃消化的峰值由351 nm红移至353 nm,胃肠连续消化由353 nm红移后到达355 nm;超声功率为60%时,MOWP经过胃消化和胃肠连续消化的DPPH·清除能力最优,分别为(78.26±0.85)%和(44.23±0.98)%。MOWP-100在胃肠连续消化阶段ABTS自由基清除率最高,为(91.87±0.19)%。结论:超声改性有助于提高MOWP的消化性能,经超声处理MOWP消化物质具有优良抗氧化活性,为MOWP引入食品并在人体中消化提供参考。

反胶束法提取辣木籽蛋白工艺优化

以脱脂辣木籽粉为原料,利用反胶束法提取辣木籽蛋白并进行工艺优化。通过单因素实验和正交实验考察反胶束(AOT)质量浓度、提取温度、pH、料液比、水分活度(Wo)5个因素对提取辣木籽蛋白的反胶束前萃工艺的影响,再通过单因素实验和二次通用旋转实验考察提取温度、pH、KCl浓度、提取时间4个因素对提取辣木籽蛋白的超声波辅助反胶束后萃工艺的影响。结果表明:反胶束前萃最佳工艺条件为pH 9、料液比1∶50、AOT质量浓度0.08 g/mL、提取温度45℃、水分活度25,该条件下所得前萃辣木籽蛋白提取率为67.2%;超声波辅助反胶束后萃最佳工艺条件为提取时间45 min、提取温度45℃、pH 6.5、KCl浓度1.25 mol/L,在此条件下所得后萃辣木籽蛋白提取率为58.5%。

辣木籽蛋白对浊度水的去除作用

目的研究辣木籽蛋白对浊度水的去除作用。方法采用盐溶与盐析方法提取辣木籽蛋白，并用考马斯亮蓝法测定辣木籽蛋白浓度；采用混凝搅拌试验测定辣木籽蛋白对浊度水的去除作用。通过测定加入辣木籽蛋白后水中COD、氨态氮和硝态氮的含量，检测辣木籽蛋白对水质的影响。结果辣木籽蛋白对高、中浊度水的去除效果好，其去除效果呈浓度剂量依赖。其中7mg/L的辣木籽蛋白提取液对高、中浊度水的去除率分别达到了92.25%和64.71%。但对低浊度水的去除效果较差，7mg/L的辣木籽蛋白对低浊度水的去除率仅为31.91%。COD、氨态氮和硝态氮的测定结果显示，辣木籽蛋白在有效去除水中浊度的同时，并不会增加水中有机物的含量。结论辣木籽蛋白对浊度水均有一定的去除作用，其中对高、中浊度水的去除作用较强，对低浊度水的去除效果较差。辣木籽蛋白对水质影响较小。

响应面法优化辣木籽蛋白质提取工艺的研究

以脱脂辣木籽粉为原料,采用超声波辅助碱法提取辣木籽蛋白质,运用单因素和响应面法优化辣木籽蛋白质提取工艺参数。结果表明,其最佳提取工艺条件为:pH 8.0、提取时间45 min、提取温度44℃、超声功率150 W,按照此工艺参数,辣木籽蛋白质提取率达44.03%。各因素影响辣木籽蛋白质提取率顺序为:超声功率>提取时间>提取温度>pH值。辣木籽蛋白质等电点为3.4,沉淀后辣木籽蛋白质沉淀率和纯度分别为54.27%、91.31%。辣木籽蛋白质SDS-PAGE分析表明,其主要含有分子量为16.0、25.0和45.0kDa的3个亚基。氨基酸分析表明,该蛋白质中含有18种氨基酸,其中7种是人体必需氨基酸,占总氨基酸含量的25.63%,谷氨酸含量最高,达到9.031g/(100g)。

干燥加热磷酸化修饰对辣木籽蛋白结构和抗氧化活性影响的研究

采用干燥加热磷酸化法制备磷酸化辣木籽蛋白(Phosphorylation of Moringa seed protein,PP-MSP)。通过ABTS+自由基清除能力、超氧阴离子自由基清除能力和二价铁离子螯合能力综合评价辣木籽蛋白在干燥加热磷酸化前后的抗氧化性。通过荧光光谱和圆二色谱法鉴定干燥加热磷酸化修饰对辣木籽蛋白结构的影响。结果表明,干燥加热使辣木籽蛋白的抗氧化性有所提高,干燥加热磷酸化修饰后其抗氧化性显著提高。通过磷酸化修饰,辣木籽蛋白二级结构轻度改变,表面巯基含量增加且对溶解性几乎没有影响。磷酸化修饰之后抗氧化性提高主要是由于磷酸亲水基团的引入和表面巯基含量的增加。

超声波辅助酶法制备辣木籽ACE抑制肽工艺优化

为进一步提高辣木籽蛋白资源的开发利用,采用盐提法提取辣木籽蛋白,再采用超声波辅助酶法制备辣木籽ACE抑制肽。以水解度和ACE抑制率为评价指标,通过单因素实验探究超声波功率、超声酶解时间、超声酶解温度及料液比对制备ACE抑制肽的影响,采用响应面法对制备工艺条件进行优化。结果表明:超声波辅助酶法制备辣木籽ACE抑制肽的最佳酶解工艺条件为碱性蛋白酶添加量5.5 mg/mL、pH 9、超声波功率500 W、超声酶解时间1.7 h、超声酶解温度55℃、料液比1∶45,在此条件下制备的酶解物ACE抑制率达到78.32%,水解度为7.78%。以辣木籽为原料制备ACE抑制肽作为功能性蛋白肽产品,可有效提高辣木籽蛋白资源的开发利用。

超声波辅助高效提取辣木籽中的蛋白质

以脱脂辣木籽粉为原料,采用超声辅助法提取蛋白质,研究超声功率、液料比、NaCl浓度等因素对蛋白质提取率的影响。当NaCl浓度从0增大至0. 250 mol/L时,辣木籽蛋白质的提取率从7. 78%迅速增大至70. 68%,说明辣木籽蛋白质主要为盐溶蛋白质。通过响应面分析得到影响提取率的主次因素为:液料比> pH>NaCl浓度;当超声功率为120 W、超声时间为15 min、液料比为60∶1、pH为6. 30、NaCl浓度为1. 10 mol/L时,重复2次提取,辣木籽蛋白质的提取率高达88. 09%。将此条件下所得的上清液在pH为10. 00,NaCl浓度为4. 27mol/L的盐析条件下盐析,沉淀率达86. 80%,透析纯化后蛋白质纯度为96. 22%。因此,超声辅助能高效提取辣木籽蛋白质。

盐法结合两步分级沉淀法提取辣木籽蛋白质工艺优化

以脱脂辣木籽粉为原料,分析辣木籽盐提液中蛋白质的酸碱沉淀条件,在单因素试验基础上结合响应面法优化辣木籽蛋白质的提取工艺条件,通过SDS-PAGE凝胶电泳试验测定该条件下蛋白质提取物的分子量分布情况。结果表明,辣木籽蛋白质的酸沉pH为4.3、碱沉pH为11.0,盐法结合两步分级沉淀法提取辣木籽蛋白质的最佳工艺条件为:NaCl浓度0.2 mol/L、料液比1︰64 g/mL、温度30℃、水浴浸提时间90 min,在此条件下辣木籽蛋白质提取率为65.19%,蛋白质纯度达到86.57%。电泳图显示该蛋白质提取物中酸沉蛋白和碱沉蛋白的分子量在15 kDa、35 kDa、40~60 kDa都有分布,但分子量在25 kDa、35~40 kDa存在较大差异。研究结果为辣木籽蛋白质的进一步开发利用提供参考。

负载茶树精油的辣木籽渣蛋白乳液在槟榔保鲜中的应用

本研究以新鲜槟榔为实验材料,研究了常温贮藏条件下,负载茶树精油(0%、0.1%、0.3%和0.5%)的辣木籽渣蛋白乳液涂膜液对新鲜槟榔保鲜效果的影响。结果表明,负载0.1%、0.3%和0.5%茶树精油的辣木籽渣蛋白乳液对抑制槟榔的腐烂具有较好的效果,且随着浓度的增加(0%~0.3%),抑制越显著,但高至0.5%时效果减弱,其中0.3%茶树精油涂膜可有效减少新鲜槟榔贮藏期内水分的蒸发,进而减缓质量损失,同时还能有效维持较高的硬度,减缓组织软化,可有效减缓槟榔表皮转黄,保持较好色泽形态,常温贮藏期达到11 d,且抑菌试验表明,负载0.3%茶树精油-辣木籽渣蛋白乳液对大肠杆菌(Escherichia coli)的抑菌直径为(11.33±0.81) mm,对金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)的抑菌直径为(13.38±0.88)mm。综上所述,负载0.3%茶树精油-辣木籽渣蛋白乳液涂膜效果最好,既能达到抑菌效果,同时也能最大程度保持槟榔外观品质和营养品质,可作为延长槟榔保鲜时间和贮藏品质的适宜处理条件。