辣根过氧化物酶/吲哚乙酸自杀基因系统联合放射对Hep-2细胞的生长抑制作用

目的:研究辣根过氧化物酶(HRP)/吲哚乙酸(IAA)自杀基因系统联合放射对人喉鳞癌Hep-2细胞株的生长抑制作用,观察HRP/IAA系统是否具有放射增敏性。方法:将构建成功的pcDNA3.1-HRP转染Hep-2细胞,RT-PCR及Western blotting分别在mRNA和蛋白质两个水平检测其表达;分别以0.5 mmol/L IAA、2 Gyγ-射线及两者联合作用于转染HRP后的Hep-2细胞,实验分为4组:A、对照组;B、加药组;C、放射组;D、加药及放射组。克隆形成实验观察HRP/IAA系统对细胞存活分数的影响,通过拟合生存曲线计算放射增敏比SERSF2;流式细胞仪分析各组细胞周期时相的变化;AnnexinV-FITC试剂盒比较各组细胞凋亡率。结果:转染pcDNA3.1-HRP的Hep-2细胞,RT-PCR和Western blotting能检测到HRP的表达;加药及放射组比单纯放射组细胞存活分数降低,SERSF2为1.302;与A组相比,B、C、D组G2/M期细胞比例升高,S期细胞比例降低,细胞凋亡率均显著增高(P<0.01);D组与B组相比,G2/M期细胞比例升高,S期细胞比例百分比降低,凋亡率增高(P<0.01);D组与C组比较,G0/G1期、G2/M期细胞比例升高(P<0.05),S期细胞比例百分比降低,凋亡率增高(P<0.01)。结论:HRP/IAA系统与放射联合应用能更有效地抑制Hep-2细胞生长、诱导其凋亡,HRP/IAA系统具有放射增敏性。

辣根过氧化物酶/吲哚乙酸系统作为基因导向性酶前体药物疗法的研究

目的:研究辣根过氧化物酶(HRP)/吲哚乙酸(IAA)系统作为基因导向性酶前体药物疗法(GDEPT)体外作用于人喉鳞癌Hep-2细胞株所产生的细胞毒性作用。方法:构建pcDNA3.1-HRP,将其瞬时转染Hep-2细胞后,Western blotting检测HRP蛋白的表达,MTT法检测加药IAA后对细胞增殖的影响。结果:pcDNA3.1-HRP构建成功,瞬时转染Hep-2细胞后Western blotting能检测到HRP蛋白的表达,MTT法显示HRP/IAA系统能较明显抑制细胞增殖。结论:HRP/IAA系统具备一定的作为基因导向性酶前体药物疗法治疗肿瘤的潜力。

吲哚乙酸结合辣根过氧化物酶诱导K562细胞凋亡机制的探讨

为探讨吲哚乙酸(indole3aceticacidIAA)和辣根过氧化物酶(horseradishperoxidaseHRP)共同作用诱导k562细胞凋亡的可能机制,应用MTT法和DNA末端标记法(TUNEL)分别检测IAA/HRP对k562细胞增殖及诱导k562细胞凋亡的影响;用化学方法检测了不同IAA浓度结合HRP作用下细胞内超氧化物歧化酶(SOD)活力、丙二醛(MDA)含量的变化;应用DCFHDA探针通过共聚焦显微镜检测药物作用下细胞内自由基的产生情况。研究结果表明:MTT和TUNEL显示IAA/HRP能明显抑制K562细胞的增殖,诱导K562细胞凋亡,其诱导凋亡的作用与IAA浓度呈正相关(r=0.971,P<0.01),且随IAA浓度的增加,细胞内SOD活力、MDA量也随之升高;DCFHDA探针检测表明,胞内自由基水平的荧光强度也随IAA浓度的增加而呈明显上升趋势。结论:IAA结合HRP能抑制K562细胞增殖,并诱导凋亡,其机制可能与IAA/HRP作用下K562细胞内自由基的产生增加有关。

吲哚乙酸结合辣根过氧化物酶对K562细胞增殖的影响

应用MTT实验、细胞计数法检测吲哚乙酸结合辣根过氧化物酶,流式细胞仪(FCM)和DNA末端标记法(TUNEL)检测IAA/HRP对细胞增殖周期和细胞凋亡的作用,研究了吲哚乙酸(indole-3-acetic acid IAA)结合辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase HRP)对K562细胞增殖的影响.结果表明,与对照组相比,IAA和HRP单独处理组对K562细胞的生长具有部分抑制作用,但无显著性差异;而IAA与HRP结合后对K562细胞的抑制作用明显增强.流式细胞仪检测结果表明,K562细胞阻滞于G2/M期.IAA/HRP具有明显的诱导K562细胞凋亡的作用,且诱导凋亡的作用与IAA浓度呈正相关(r=0.971,P<0.01).IAA/HRP能明显抑制K562细胞生长,将细胞周期阻滞于G2/M期,诱导细胞凋亡.

吲哚乙酸与辣根过氧化物酶对BXPC-3细胞凋亡的影响

目的:探讨吲哚乙酸(IAA)联合辣根过氧化物酶(HRP)对BXPC3细胞凋亡及自由基表达的影响.方法:台盼蓝(曲利本兰)排斥试验,研究IAA/HRP对BXPC3细胞死亡率的影响;原位细胞凋亡检测法检测细胞凋亡;生化法检测细胞内SOD,MDA的含量;激光共聚焦显微镜检测细胞内的自由基含量.结果:与对照组相比,IAA/HRP组的细胞凋亡数增加,而且随着IAA浓度的增大,细胞凋亡数存在上升的趋势;SOD活性和MDA含量在IAA/HRP组中均明显升高;对照组的自由基含量比IAA/HRP组明显降低,且自由基的含量具有浓度和时间依赖性.结论:IAA联合HRP诱导自由基产生是诱发人胰腺癌BXPC3细胞凋亡的可能机制之一.

吲哚乙酸联合辣根过氧化物酶对人SACC-2细胞的抑制作用

目的:探讨吲哚乙酸(IAA)与辣根过氧化物酶(HRP)在体外共同作用对人涎腺腺样囊性癌细胞SACC-2生长抑制的影响.方法:用不同浓度的IAA/HRP(IAA20、40、60、80、100μmol/L+HRP1.2mg/L)与SACC-2细胞共同培养48h后,光镜下观察癌细胞的生长;CCK-8法测定细胞生长抑制率;半定量RT-PCR技术检测caspase-3mRNA水平.结果:与阴性对照组比较,48h后SACC-2细胞皱缩,变小变圆,空泡明显;40、60、80、100μmol/LIAA组的细胞生长抑制率明显增高(31.8%,38.71%,60.57%,80.18%,均P<0.05);半定量RT-PCR结果显示,60、100μmol/LIAA与1.2mg/LHRP联合作用可上调caspase-3mRNA水平(0.835±0.019,1.667±0.022vs0.242±0.025,均P<0.01).结论:IAA/HRP对人涎腺腺样囊性癌细胞SACC-2生长有明显的抑制作用,可通过激活caspase-3mRNA的表达,诱导凋亡.

光叶楮扦插生根的吲哚乙酸氧化酶、多酚氧化酶、过氧化物酶活性变化研究

对光叶楮扦插生根过程中吲哚乙酸氧化酶(IAAO)、多酚氧化酶(PPO)、过氧化物酶(POD)3种酶进行了动态跟踪分析。结果表明:IAAO活性在扦插初期逐渐上升,第10d上升到高峰,之后下降再上升,第30d达到新高峰,然后迅速下降;前25dPOD活性变化规律与IAAO相似,但30d以后活性一直上升;PPO活性在扦插前期缓慢上升,第20d上升到了最高点,此后变化不大。还研究了IAAO、PPO、POD与不定根的发生和发展关系,认为光叶楮扦插生根可分为愈伤组织形成期、根诱导期和根的伸长期3个阶段,愈伤组织形成期3种酶活性都呈上升趋势,根诱导期IAAO和POD的活性达到高峰;而根伸长期IAAO和POD活性下降,PPO活性上升。

雷竹笋期鞭侧芽吲哚乙酸氧化酶和过氧化物酶的变化

根据雷竹笋期鞭侧芽吲哚乙酸氧化酶和过氧化物酶的测定分析表明，竹鞭侧芽的萌发受营养、水分等构成组织物质供给的限制，芽体间产生营养争夺，通过刚哚乙酸的氧化酶活性变化，调节吲哚乙酸含量，达到了影响侧芽生长的目的，在萌发芽中，吲哚乙酸氧化酶活性变化和芽体活跃生长区的出现相关；从竹鞭和竹鞭侧芽的过氧化物酶活性分析表明，过氧化物酶系统不仅在生长素的氧化降解中起作用，而且可能在木质素的生物合成或其它生理过程中起重要作用。

苹果叶片中吲哚乙酸氧化酶与过氧化物酶活性的相关性

利用PAGE分离酶谱、考马斯亮蓝R_(350)和醋酸-联苯胺分别染色的方法分析了不同苹果砧木叶片中不同迁移率过氧化物酶带的活性和比活性,用萨尔科夫斯基试剂分析了同一叶样酶液的吲哚乙酸氧化分解的量,将吲哚乙酸氧化分解的量与不同砧木不同迁移率的过氧化物酶活性和比活性通径分析,结果表明,迁移率在0.49和0.70的两条过氧化物酶带与吲哚乙酸氧化分解的量存在着一定的相关性,但相关不显著.吲哚乙酸氧化酶的活性的迁移率在0.57附近.

陆地棉纤维初始发育与胚珠过氧化物酶和吲哚乙酸氧化酶的关系的研究

比较研究陆地棉品种徐州１４２ 与其无絮突变体开花前４ｄ 至开花后６ｄ 胚珠内细胞壁结合的离子型蛋白质含量、过氧化物酶和ＩＡＡ氧化酶活性变化。结果表明， 过氧化物酶和ＩＡＡ氧化酶阻碍纤维的初始发育。

吲哚乙酸氧化酶和过氧化物酶关系的同工酶研究

用细胞质雄性不育系小麦（Ａｅ．ｔｒｉｕｎｉｃｉａｌｉｓ）ｃｓ；（Ａｓ．Ｚｈｕｋｏｖｓｋｙｉ）ｃｓ；（Ｔ．ｔｉｍｏｐｈｅｅｖｉ）ｃｓ；（Ａｅ．ｓｐｅｌｔｏｉｄｅｓ）ｃｓ和普通小麦中国春（Ｔ．ａｅｓｔｉｖｕｍ，保持系，ｃｓ）与鄂恩１号（Ｔ．ａｅｓｔｉｖｕｍ）为材料，用Ｄａｖｉｓ和Ｒｅｉｓｆｅｌｄ不连续聚丙烯酰胺垂直板凝胶电泳技术进行吲哚乙酸氧化酶（ＩＡＡ－ｏｘｉａｓｅ）和阴、阳离子过氧化物酶同工酶分析；并用ＳＣ９１０型双波段薄层扫描仪进行扫描，记录其谱带数及强弱．结果表明阳离子过氧化物酶同工酶谱与ＩＡＡ－氧化酶同工酶谱十分相似；而阴离子过氧化物酶酶谱相差甚远．由此表明具有吲哚乙酸氧化酶活性位点的过氧化物酶，应主要是阳离子过氧化物酶．

籼、粳两系杂交水稻幼根中吲哚乙酸氧化酶和阳离子过氧化物酶的初步研究

三系杂交水稻的大面积推广引起了生产中的一次重大革命;光敏核不育水稻的发现又为人们利用两系杂种优势开辟了新的途径,也为研究两系杂交稻杂种优势配组的利用奠定了基础。籼粳亚种水稻组合和两系杂交稻具有十分明显的优势。三系杂交水稻的根系生理特性与地上部的关系十分密切。

采后‘伏’苹果吲哚乙酸氧化酶和过氧化物酶活性的变化

随‘伏’苹果成熟衰老，果肉硬度迅速下降，吲哚乙酸氧化酶和过氧化物酶活性呈双峰曲线变化。在果实的不同部位，以果肉的吲哚乙酸氧化酶活性最高。

两系杂交水稻幼苗吲哚乙酸氧化酶和过氧化物酶同工酶的研究

以两系杂交水稻幼苗为试材，采用Ｄａｖｉｓ和Ｒｅｉｓｆｅｌｄ不连续垂直板聚丙烯酰胺凝胶电泳技术，在ｐＨ４６和ｐＨ７８下对其吲哚乙酸氧化酶和过氧化物酶同工酶进行研究。结果表明：吲哚乙酸氧化酶和负极向的过氧化物酶同工酶均表现出明显的差异；正极向的过氧化物酶同工酶中，ｐＨ４６提取的酶液其同工酶谱相似，而ｐＨ７８提取的酶液。

吲哚丁酸处理桉树插条后过氧化物酶活性和同工酶变化与插条生根的关系

尾叶桉MLA无性系 (简称MLA)为难生根植物 ,尾叶桉U6 无性系 (简称U6)和刚果12号桉W5 无性系 (简称W5)为相对易生根植物。MLA的插条中的过氧化物酶 (POD)活性较U6、W5 的高。用吲哚丁酸 (IBA)处理桉树的插条后 ,在扦插生根的不同阶段 ,插条内的POD活性呈现规律性的变化。蛋白质含量呈上升趋势。POD同工酶谱带也随生根的进程出现增多的现象。本文讨论了过氧化物酶与桉树插条生根的关系。

嫩茎花椰菜愈伤组织分化能力与过氧化物酶及吲哚乙酸氧化酶的稳定性

嫩茎花椰菜的过氧化物同功酶与其形态发生有一定关系。它在脱分化开始以前的增加,可能与细胞恢复分生能力有关;而在脱分化或分化开始后的变化,可能是脱分化或分化的结果。由于过氧化物酶易受外界因素影响,培养基中的激素也会引起过氧化物同工酶的变化,因而不能笼统地说过氧化物酶同功酶谱的变化可作为脱分化或分化的指标。

青花菜组培中过氧化物酶及吼哚乙酸氧化酶与形态发生的关系

青花菜在脱分化及分化过程中其过氧化物酶活性升高;脱分化培养的第12天该酶活性的大幅度增加与愈伤组织的明显发生相对应;分化培养的第21天该酶活性的大幅度增加与真正的芽发生相关.脱分化时过氧化物酶同工酶的c带、e带发生在愈伤组织产生以前,可能是脱分化的原团;分化时c带在芽点出现以前的重新出现可能与分化的启动有关.在脱分化过程中吲哚乙酸氧化酶活性略有升高;在分化过程中该酶活性基本保持稳定.

吲哚乙酸处理桉树插条后氧化酶活性及同工酶变化与生根关系的比较研究

尾叶桉 ML A无性系 (简称 MLA)为难生根植物 ,尾叶桉 U6无性系 (简称 U6)和刚果 12号桉W5无性系 (简称 W5)为易生根植物。 MLA的插条内的 POD、IAAO活性较 U6、W5的高 ,而 PPO活性比 U6、W5的低。用 IAA处理桉树的插条后 ,在扦插生根的不同阶段 ,插条内的 POD、PPO、IAAO活性呈现规律性的变化。蛋白质含量呈上升趋势。POD、PPO同工酶谱带也随生根的进程出现增多现象。本文讨论了 3种氧化酶与桉树插条生根的关系。

吲哚-3-乙酸间接酶联免疫吸附测定法的建立

报道了一种利用兔抗 IAA-N-BSA 抗血清和辣根过氧化物酶标记的羊抗兔 IgG 建立的IAA 固相抗原型(或称间接)酶联免疫吸附测定法;该法的线性测定范围在0.8～200ng 之间;本文研究了合成包被抗原的适宜方法;并在植物样品测定冲对该法做了一系列的质量控制试验。