应用辣根过氧化物酶化学发光法检测毒素原性大肠杆菌方法的建立

利用活化酶标复合物（HRP－PBQ－PEI＋－NH3＋）直接标记毒素原性大肠杆菌不耐热肠毒素（ETEC－LT）基因片段（0．8kb）作探针。HRP在戊二醛作用下与单链靶DNA形成DNA和酶的共价复合物，与DNA探针结合的辣根过氧化物酶（HRP）催化相应的发光刺，经增强型化学发光反应（ECL）在普通X光胶片上自显影（CPD）检测ETEC－LT。结果可检测到0．03pg的纯质粒DNA和103的ETEC菌细胞，dotblot杂交证明该酶标基因探针仅与产LT肠毒素的ETEC杂交，其余均未见杂交阳性反应。结果表明酶（HRP）标基因探针化学发光法检测ETEC是一种简便、快速、安全，高度敏感和特异的非放射性标记基因探针检测技术。

增强辣根过氧化物酶催化鲁米诺化学发光反应的新型增强剂四苯硼钠

报道了新型增强剂四苯硼钠对过氧化物酶催化鲁米诺－过氧化氢发光反应的增强作用，建立了流动注射化学发光测定或辣过氧化物酶（ＨＲＰ）的新体系。用该体系测定ＨＲＰ线性范围为１．０×１０－１２×１．２×１０－１３ｍｏｌ／Ｌ；检测限为０．６×１０－１３ｍｏｌ／Ｌ。对０．６×１０－１３ｍｍｏｌ／Ｌ的 ＨＲＰ进行１１次平行测定，相对标准偏差为 １． ５％。

固体表面化学发光法测定辣根过氧化物酶的研究

在不渗透阻挡滤纸上，建立了Ｌｕｍｉｎｏｌ－Ｈ２Ｏ２－ＨＲＰ固体表面化学发光分析法．游离ＨＲＰ测定的线性范围为６～８０００ｐｇ，检测限为０．６６ｐｇ／斑点，测定的相对标准偏差为７．４％（８ｐｇＨＲＰ，ｎ＝１１）．对标记的ＨＲＰ测定结果与ＥＬＩＳＡ法相一致．

化学发光法测定辣根过氧化物酶浓度的实验条件探讨

探讨了对碘苯酚（PIP）增强的鲁米诺—过氧化氢—辣很过氧化物酶（Luminol-H_2O_2-HRP）体系的反应特性,通过正交试验并经方差分析,获得了增强发光酶免疫检测法测定辣根过氧化物酶（HRP）及其标记物的最佳实验条件（缓冲液的pH=8.2,Luminol的浓度5×10^(-4)mol/L,H_2O_2的浓度4×10^(-3)mol/L,PIP的浓度4×10^(-4)mol/L,乙二胺四乙酸的浓度0.25mg/ml,温度25℃.反应时间10min）。在上述最佳条件下检测HRP的浓度,其线性范围为:10^(-9)～10^(-12)g/L,Y=-0.05+1.07X（r=0.96,P<0.01）,最低检出限为 0.2pg（5 amol）。

毛细管固定过氧化物酶流动注射化学发光法测定过氧化氢的研究

利用固定有辣根过氧化物酶的毛细管柱作为反应器与流通池，建立了一种简单、快速检测过氧化氢的流动注射化学发光分析新方法。当鲁米诺和过氧化氢的混合溶液流经反应器时，辣根过氧化物酶催化过氧化氢氧化鲁米诺产生化学发光。在选定的实验条件下，化学发光信号与过氧化氢的浓度在3．0×10^-8-1．0×10^-4 mol/L范围内分段呈线性关系，检出限为1×10^-8 mol/L（S／N=3），相对标准偏差1．4％（1．0 μmol/L，n=9）。该方法用于雨水中过氧化氢的测定，结果满意。

毛细管电泳流动注射化学发光检测辣根过氧化物酶及其在免疫分析中的应用

辣根过氧化物酶(Horseradish Peroxidase,HRP)是从植物辣根中提取出来的一种由无色的酶蛋白和深棕色的卟啉结合而成的糖蛋白,能催化鲁米诺(luminol)、异鲁米诺(isoluminol)及其衍生物而发光.……

化学发光法检测抗髓过氧化物酶抗体和抗蛋白酶3抗体

目的研究全自动、定量和随机上样化学发光法(chemiluminescent immunoassay,CLIA)检测抗髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)抗体和抗蛋白酶3(proteinase 3,PR3)抗体的临床应用价值,为临床抗MPO抗体和抗PR3抗体检测方法的选择提供参考。方法对临床242例常规申请抗中性粒细胞胞浆抗体(anti-neutrophil cytoplasmic autoantibodies,ANCA)检测的样本采用间接免疫荧光法(immunofluorescent assay,IFA)筛查的同时,应用CLIA和酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)平行检测抗MPO抗体和抗PR3抗体。对上述检测结果进行统计学分析。结果 CLIA与ELISA针对抗MPO抗体的检测表现出良好的一致性和符合率,其中总符合率为93.8%,阳性符合率81.9%,阴性符合率98.8%,一致性结果显示kappa=0.845,受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic curve,ROC曲线)以下面积(area under the curve,AUC)为0.966。两种方法学在检测抗PR3抗体时一致性和符合率表现较低,其中总符合率为86.8%,阳性符合率为35.1%,阴性符合率为96.1%。ROC曲线分析显示AUC为0.839;抗PR3抗体两种方法检测结果不一致的样本经第三方试剂验证结果显示,CLIA检测结果与第三方试剂验证结果差异无统计学意义(P>0.05),而ELISA检测结果与第三方试剂验证结果差异存在统计学意义(P<0.05)。CLIA检测结果与IFA检测结果阳性符合率为60.8%、阴性符合率为94.8%、总符合率为79.8%。而ELISA检测结果与IFA检测结果阳性符合率、阴性符合率和总符合率则分别为73.6%、77.2%和75.6%。结论与ELISA比较,CLIA检测抗MPO抗体具有良好的一致性和符合率,而检测抗PR3抗体时一致性和符合率偏低。在检测抗PR3抗体和抗MPO抗体时,CLIA的特异性均优于ELISA。建议实验室开展抗MPO抗体和抗PR3抗体检测方法选择时,应同时结合IFA抗体筛查试验、样本临床信息以及方法学自身特点等因素进行严格的判断和评价。

四磺基锰酞菁作为过氧化物模拟酶在过氧化氢化学发光测定中的应用

以四磺基锰酞菁 (MnTSPc)作为过氧化物模拟酶催化H2 O2 与鲁米诺的化学发光反应 ,建立了测定环境样品中H2 O2 的化学发光分析新方法。该法的线性范围为 4 .0× 10 - 8～ 2 .0× 10 - 5mol L ;检出限为 6 .8×10 - 9mol L ;对 1.0× 10 - 6 mol L的H2 O2 进行连续 10次平行测定 ,相对标准偏差为 2 .4 %。用本法对天然雨水进行了分析测定 ,结果良好。

利用过氧化物模拟酶催化化学发光法检测钾离子

K＋存在时,富含鸟嘌呤（Guanine）的特定序列单链DNA会发生构象变化形成G-四联体结构,从而能够与氯化血红素（hemin）结合生成具有过氧化物酶活性的模拟酶,对鲁米诺-H2O2化学发光体系具有强的催化作用.据此,提出了利用G-四联体-hemin-鲁米诺-H2O2化学发光体系测定K＋的新方法.探讨了DNA浓度,hemin浓度,反应时间及干扰离子对化学发光体系的影响,在优化的实验条件下,对K＋检测的线性范围为2.8×10-5~1.5×10-4mol/L,检出限（3σ,n=11）为9.0×10-6mol/L.本方法用于环境水样中K＋检测,结果良好.

固定化辣根过氧化物酶在有机溶剂/水混合溶液中的电化学

用魔芋多糖(KGM)将辣根过氧化物酶(HRP)固定在玻碳电极(GCE)表面,制备了HRP-KGM膜修饰电极.在乙醇等亲水性有机溶剂与水的混合溶液中,包埋在KGM中的HRP可以与电极发生直接电子传递,且能催化还原过氧化氢、氢过氧化异丙基苯、氢过氧化叔丁基、过氧化丁酮等过氧化物.HRP-KGM膜修饰电极具有较好的稳定性和重现性,可用于这些物质的定量检测.

辣根过氧化物酶在表面活性剂膜中的直接电化学

利用 3种表面活性剂分别将辣根过氧化氢酶固定在裂解石墨棱面 (edge planepyrolyticgraphite ,EPG)电极表面 ,研究了辣根过氧化物酶 (HRP)中Fe /Fe 电对与电极之间的直接电子传递过程以及酶催化双氧水还原过程。实验结果表明 :(1)表面活性剂是一种固定酶的理想材料 ;(2 )这种体系可能构造第三代生物传感器 ,对解释生物体代谢过程具有理论意义 。

辣根过氧化物酶在分析化学中的应用

辣根过氧化物酶是一种重要的分析化学试剂，对过氧化氢底物特异性强，广泛用于临床化学、环境化学和食品工业等领域。本文评述了近十年来辣根过氧化物酶在分析化学中的应用进展。包括光度法、荧光法、化学发光法、电化学传感器和光导纤维传感器法测定过氧化氢及相关物质，及辣根过氧化物酶在其他无机、有机及生物物质分析中的应用。引用参考文献６０ 篇。

辣根过氧化物酶在碳纳米管-离子液体修饰碳糊电极上的直接电化学研究

以室温离子液体1-丁基-3-甲基咪唑六氟磷酸盐（[EMIM] PF6）为粘合剂与多壁碳纳米管（Multi-walled carbon nanotubes,MWCNTs）、石墨粉相混合制备新型碳糊电极,并在该电极表面修饰辣根过氧化物酶（HRP）制成新型碳糊酶电极（HRP-MWCNTs-CILE）.应用循环伏安法（CV）和计时电流法（it）研究了该修饰电极的直接电化学行为.结果表明,该修饰电极在pH 6.0的0.05 mol/L磷酸缓冲溶液中,其循环伏安曲线上出现了1对准可逆的氧化还原峰,为HRP中Fe（Ⅲ）/Fe（Ⅱ）电对的特征峰.该修饰电极对过氧化氢具有良好的催化活性、抗干扰能力和稳定性.在最佳条件下,修饰电极对H2O2的测定线性范围为7.0×10-6～3.0×10-3 mol/L,检出限（S/N=3）为2.5×10-6mol/L.该传感器具有制备简单、成本低廉、响应快等特点,具有较好的应用前景.

基于明胶-碳纳米管的辣根过氧化物酶修饰电极在离子液体中的直接电化学

制备了明胶(Gel)-多壁碳纳米管(MWCNTs)纳米复合物,将其修饰在玻碳电极表面,再吸附辣根过氧化物酶(HRP),制得明胶-多壁碳纳米管-辣根过氧化物酶修饰电极(Gel-MWCNTs-HRP/GCE)。该修饰电极在PBS中的循环伏安图上出现了一对峰形良好、几乎对称的氧化还原峰,式量电位为-0.356 V(vs.SCE),表明包埋在Gel-MWCNTs中的HRP与电极之间发生了直接电子传递。当扫速在20～180 mV/s时,氧化峰电流(Ipa)与还原峰电流(Ipc)均与扫速成正比,表明电极过程是受电子传递速率控制的表面传质过程。运用循环伏安法研究了修饰电极的电化学特性,探讨了工作电位、pH值、干扰物质等对修饰电极的影响。实验结果表明,HRP在修饰电极表面能有效和稳定地进行直接电子转移,并保持了其对过氧化氢(H2O2)的生物催化活性。进一步研究发现,在含有亲水性离子液体1-丁基-3-甲基咪唑四氟硼酸([BMIM]BF4)的溶液中,修饰电极对H2O2显示出更灵敏的催化活性,其线性范围为2.0×10-7～0.13 mol/L,检出限(S/N=3)为2.3×10-8mol/L。该电极具有灵敏度高、重现性及稳定性好、使用寿命较长等优点,同时还显示了较好的抗干扰能力。

辣根过氧化物酶修饰电极在离子液体[EMIM]BF4中的直接电化学

将壳聚糖(Chi)-辣根过氧化物酶(HRP)-多壁碳纳米管(MWCNTs)的复合物修饰在玻碳电极(GCE)表面,制备了HRP修饰电极(Chi-HRP-MWCNTs/GCE),并将其用于在亲水性离子液体1-乙基-3-甲基咪唑四氟硼酸([EMIM]BF4)中HRP的直接电化学研究.紫外可见光谱和红外光谱表明,HRP在复合物内保持了其原始构象.电化学研究表明,该修饰电极在[EMIM]BF4中的循环伏安图上出现了一对峰形良好、几乎对称的氧化还原峰,式量电位为-0.247V(vs.Ag/AgCl),说明包埋在Chi-MWCNTs中的HRP与电极之间发生了直接电子传递;HRP在电极表面直接电子转移的速率常数ks为3.12s-1;在65℃的[EMIM]BF4中HRP仍然保持其活性;HRP修饰电极对过氧化氢的还原具有电催化作用,其表观米氏常数Km为5.6×10-5molL-1,催化电流与过氧化氢浓度在5.0×10-7～5.0×10-5mol·L-1范围内呈线性关系,检出限为2.0×10-7mol·L-1.该研究为非水相生物传感器的构制提供了一种新途径.

碳纳米管电极上辣根过氧化物酶的直接电化学

制备了碳纳米管修饰玻碳电极 (CNT/GC) .将辣根过氧化物酶 (HRP)固定在CNT/GC电极表面 ,形成HRP CNT/GC电极 .研究了HRP的直接电子转移 .实验结果表明 ,HRP在CNT/GC电极表面能进行有效和稳定的直接电子转移反应 ,其循环伏安曲线上表现出一对良好的、几乎对称的氧化还原峰 ;式量电位E0 ′几乎不随扫速 (至少在 2 0～ 10 0mV/s的扫速范围内 )而变化 ,其平均值为 (-0 3 19± 0 0 0 2 )V (vs .SCE ,pH 6 9) ;HRP在CNT/GC电极表面直接电子转移的速率常数为(2 0 7± 0 5 6)s-1;式量电位E0 ′与溶液pH的关系表明HRP的直接电化学是 (1e + 1H+ )的电极过程 .进一步的实验结果显示 ,固定在CNT/GC电极表面的HRP能保持其对H2 O2 还原的生物电催化活性 ,而且能快速地响应H2 O2 浓度的变化 .本文制备碳纳米管修饰电极和固定酶的方法具有简单和易于操作等优点 。

辣根过氧化物酶在海藻酸钠水凝胶中的电化学和电催化特性

用海藻酸钠(SA)将辣根过氧化物酶(HRP)固定到热裂解石墨电极表面,制备了HRP-SA膜修饰电极。研究结果表明,包埋在SA膜中的辣根过氧化物酶可与电极直接传递电子,在磷酸盐缓冲溶液和磷酸盐/乙醇混合溶液中均可得到1对辣根过氧化物酶辅基血红素Fe(Ⅲ)/Fe(Ⅱ)电对的可逆氧化还原峰。其式电势随溶液pH值增加而负移,呈线性关系,这说明辣根过氧化物酶的电子传递过程伴随有质子的转移。考察了HRP-SA膜修饰电极对O2气、H2O2、NO和六氯乙烷的电催化性质。

锇-聚乙烯吡啶复合物与辣根过氧化物酶分子多层膜的制备及其电化学性质研究

基于分子间静电相互作用力 ,将锇 -聚乙烯吡啶复合物 ( PVP-Os)与辣根过氧化物酶 ( HRP)交替沉积于固体基质表面 ,制得了包含生物成分的分子多层膜 .膜层间的聚合物分子起到了粘接与导电的双重作用 .用紫外 -可见光谱法跟踪了石英基片上的组装过程 ,研究了多层膜电极对过氧化氢的电催化还原性能 。

定量检测抗甲状腺过氧化物酶抗体的吖啶酯化学发光法的建立及初步应用

目的建立一种用于定量测定血清中抗甲状腺过氧化物酶抗体(Anti-TPO)的吖啶酯为标记物的化学发光免疫分析法并初步进行临床验证。方法用TPO抗原偶联磁微粒,鼠抗人IgG抗体标记吖啶酯,建立间接法的反应模式。对该方法的线性范围、精密度、检出限、准确度进行测定,并与罗氏的电化学发光试剂进行比对。结果在5~1000 IU/mL范围内,线性相关系数r为0.9999,检出限为0.224 IU/mL,两份样本的精密度(CV)分别为3.1%和4.3%,两份样本的准确度分别为1.1%和3.0%。经检测185例正常健康人,将参考区间定为小于30.32 IU/mL。与罗氏的电化学发光试剂平行测定84份血清样本,两者检测结果的相关系数r为0.975,显著性检验P<0.01,相关性良好。结论建立了定量测定血清中Anti-TPO的吖啶酯为标记物的化学发光免疫分析法,满足临床检测要求。

不同化学发光检测系统测定抗甲状腺过氧化物酶抗体的比较研究

目的对Roche Cobase E601和SIEMENS Centaur XP两种化学发光检测系统测定抗甲状腺过氧化物酶抗体(TPOAb)结果的可比性和相关性进行评价。方法使用上述两种发光检测系统测定94例患者血清中的TPOAb浓度,对两组数据进行比较,并对相关性进行分析。结果两种发光检测系统的批内、批间精密度较好,差异无统计学意义;SIEMENS Centaur XP检测系统阳性率大于Roche Cobase E601检测系统的阳性率,结果比较差异有统计学意义(P<0.05);两检测系统对TPOAb的检测结果总符合率为75.6%,两检测系统检测结果呈正相关(r=0.866,P<0.01)。结论建议对TPOAb检测建立标准化的参考系统,现有的检测系统应与标准化的参考系统进行比对。