辣根过氧化物酶同工酶C基因在巴斯德毕赤酵母中的克隆与鉴定

目的:克隆辣根过氧化物酶同工酶C基因,为此基因的表达作准备。方法:用PCR方法从辣根的总DNA中扩增得到一种辣根过氧化物酶同工酶C基因HRPC2,通过PCR的方法去除内含子后连接到pMD18-T载体上,测序证明正确后,用限制性内切酶切下目的基因,插入到巴斯德毕赤酵母表达载体pPIC9K中,构建成重组质粒pC2EX9K。再将辣根过氧化物酶同工酶C基因在毕赤酵母中进行克隆、鉴定。结果:重组质粒pC2EX9K转化毕赤酵母后,经PCR鉴定,证明形成了目的基因的克隆。结论:应用毕赤酵母作为受体菌,pPIC9K为载体,成功克隆了HRPC2。

过氧化物酶在食品分子及其胶体体系修饰中的应用进展

过氧化物酶是一类大量存在于自然界及生物体内的氧化还原酶。其家族成员众多,但都可以催化以过氧化氢(H_(2)O_(2))作为底物的氧化反应。现有研究表明可以通过利用过氧化物酶的氧化特性,来提高功能食品的质量属性和营养特性。而辣根过氧化物酶作为过氧化物酶家族的一员,近些年来被大量研究。尤其是在食品研究开发中,有很多研究通过使用辣根过氧化物酶去催化蛋白质或淀粉等食品分子来改善食品本身的性质或获得更合适的食品胶体,因此值得更深层次的挖掘其应用价值及市场。本文在介绍过氧化物酶的结构、催化机制及影响其催化的关键因素基础上,分析了过氧化物酶催化对食品分子结构和性质的影响,综述了近年来过氧化物酶在食品分子及其胶体体系修饰中的一些应用,以期为今后过氧化物酶的研究提供一定的理论参考和新思路。

青年脑卒中病人血清抗髓过氧化物酶抗体及补体C3、C4水平与神经功能缺损程度的相关性

目的:分析血清抗髓过氧化物酶抗体及补体C3、C4水平与青年脑卒中病人神经功能缺损程度的相关性。方法:选取2020年1月—2021年6月于我院住院治疗的青年脑卒中病人107例作为脑卒中组,采用美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分评估病人神经功能缺损程度,将病人分为轻型组40例,中型组35例,重型组32例;选取同期本院健康体检者104名作为对照组。收集收缩压、舒张压等一般资料,采用酶联免疫吸附实验(ELISA)法检测血清抗髓过氧化物酶抗体水平,采用免疫透射比浊法检测补体C3、C4水平。采用Pearson法分析青年脑卒中病人血清抗髓过氧化物酶抗体及补体C3、C4水平与神经功能缺损程度的相关性。采用多因素Logistic回归分析法分析影响青年脑卒中病人神经功能缺损程度的因素。结果:脑卒中组血清抗髓过氧化物酶抗体阳性率、补体C3、补体C4、收缩压、舒张压水平及高血压比例高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。重型组血清抗髓过氧化物酶抗体阳性率及补体C3、C4水平高于中型组、轻型组,中型组血清抗髓过氧化物酶抗体阳性率及补体C3、C4水平高于轻型组,差异均有统计学意义(P<0.05)。青年脑卒中病人血清抗髓过氧化物酶抗体及补体C3、补体C4水平与NIHSS评分均呈正相关(r值分别为0.523,0.509,0.547,P<0.05)。抗髓过氧化物酶抗体及补体C3、补体C4是青年脑卒中病人神经功能缺损的独立影响因素(P<0.05)。结论:抗髓过氧化物酶抗体、补体C3、补体C4在青年脑卒中病人血清中高表达,且均与神经功能缺损程度呈正相关。

血清髓过氧化物酶与脑小血管病患者认知障碍的相关性分析

目的探讨血清髓过氧化物酶(MPO)与脑小血管病(CSVD)患者认知障碍的相关性。方法选取该院2021年3月至2022年12月收治的125例CSVD患者作为研究组。同期纳入在该院体检的健康人群125例作为对照组。使用简易精神评估量表(MMSE)和蒙特利尔认知评估量表(MoCA)评估研究组患者认知功能,并分为认知障碍组与认知正常组。检测各组血清MPO水平。采用Spearman相关分析血清MPO水平与CSVD患者认知障碍的相关性,采用Logistic回归分析CSVD患者认知障碍的影响因素,采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清MPO对认知障碍的预测价值。结果125例CSVD患者的认知障碍发生率为38.40%(48/125)。研究组血清MPO水平[(265.60±34.39)μg/L]较对照组[(241.36±27.58)μg/L]高,差异有统计学意义(P<0.05)。认知障碍组血清同型半胱氨酸(Hcy)、超敏C反应蛋白(hs-CRP)、MPO水平较认知正常组高,差异有统计学意义(P<0.05)。Hcy、hs-CRP、MPO水平与CSVD患者认知障碍呈正相关(r s=0.430、0.345、0.448,P<0.001)。Logistic回归分析结果显示,血清Hcy、hs-CRP、MPO是CSVD患者发生认知障碍的影响因素(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,血清Hcy、hs-CRP、MPO单独及联合检测预测CSVD患者发生认知障碍的曲线下面积(AUC)分别为0.752、0.669、0.778、0.867。结论血清MPO水平对CSVD患者发生认知障碍具有预测价值,可作为辅助预测的指标。血清MPO水平升高则提示CSVD患者发生认知障碍风险较高。

磁性固定化辣根过氧化物酶脱除玉米赤霉烯酮的研究

本文制备了磁性Fe_(3)O_(4)-SiO_(2)-HPG-COOH复合载体作为固定化载体,共价固定辣根过氧化物酶(HRP),应用于玉米赤霉烯酮(ZEN)的降解。利用傅里叶红外光谱、X-射线衍射分析、扫描电镜等表征方法对固定化HRP进行表征,验证了HRP被成功固定在载体上。制备的纳米级载体Fe_(3)O_(4)-SiO_(2)-HPG-COOH具有均匀的尺寸和形状,良好的分散性和较强的磁性,饱和磁化值为25.80 emu/g,平均粒径为103.15 nm。与游离酶相比,固定化HRP具有更高的耐酸碱性和热稳定性,最适pH值从6.5提高到7.0,最适温度从30℃提升到35℃。将磁性固定化HRP应用于ZEN降解,利用单因素实验,探究反应温度、过氧化氢浓度、溶液pH值和反应时间与ZEN降解率的关系。结果表明:在反应温度35℃,过氧化氢浓度26 mmol/L,溶液pH 7.0,反应时间480 min条件下,ZEN的脱除效率为68%,固定化HRP具有良好的重复使用性,循环5次后相对酶活力仍保持在79.85%以上。研究表明磁性固定化HRP对ZEN具有良好的降解能力。

披碱草和野大麦及其杂种F_1与BC_1过氧化物酶同工酶分析

采用聚丙烯酰胺垂直平板电泳技术对披碱草和野大麦及其杂种 F1和 BC1过氧化物酶(POD)同工酶做了比较分析。结果表明 ,亲本披碱草和野大麦的 POD同工酶谱可明显地分成A、B两区 ,有 4条相同位点的基带 ,从酶蛋白分子水平验证出两亲本有较近的亲缘关系 ;杂种 F1的 POD酶谱主要表现为双亲酶带的互补类型 ,正交 (野大麦×披碱草 ) F1和反交 (披碱草×野大麦 ) F1的酶谱基本相同 ,在个别位点存在酶带活性强弱的差别 ;野大麦×披碱草×野大麦 (BC1)和披碱草×野大麦×野大麦 (BC1)的酶谱基本相同 ,但也存在一定的差别 ,BC1的酶谱明显偏向轮回亲本野大麦 ,特别是野大麦×披碱草×野大麦 ,说明通过回交使野大麦的某些性状在 BC1代中进一步加强 ;POD同工酶具有多态性 ,可作为遗传标记用于杂种的鉴定和回交后代目标性状植株的检测。

辣根过氧化物酶同功酶C基因克隆及其在大肠杆菌中的表达

无论从应用还是从理论研究角度，辣根过氧化物酶（ＨＲＰ）是一种非常重要的酶．ＨＲＰ基因克隆与表达将有利于更深入研究ＨＲＰ的结构与功能．利用反转录ＰＣＲ从天然植物辣根中分离和克隆编码辣根过氧化物酶同功酶Ｃ（ＨＲＰ－Ｃ）一个ｃＤＮＡ，并测定其序列．结果发现，从基因推导出的氨基酸序列与Ｗｅｌｉｎｄｅｒ报道的辣根过氧化物酶序列有９０．６％的同源性．将该基因连接到表达载体ｐＥＴ－２４ｂ上，利用抗ＨＲＰ多克隆抗体进行Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ，检测有少量目标产物表达．在诱导表达过程中。

^(60)Co-γ辐射对多年生黑麦草植株过氧化物同工酶和酯酶同工酶的影响

利用60Co-γ射线辐照处理多年生黑麦草超级德比(Derby Supreme)的干种子,对植株过氧化物同工酶(POD)和酯酶(EST)同工酶酶谱进行分析。结果表明,辐射引起了植株POD和EST的差异,且不同剂量处理的种子后代植株在POD和EST酶谱特征上有所不同。

Cd和Cr(VI)单一及复合污染对鲫鱼组织过氧化物酶同工酶的影响

用聚丙烯酰胺凝胶电泳的方法研究了 Cd和 Cr(VI)的单一及复合污染对鲫鱼组织过氧化物酶 (POD)同工酶的影响。结果表明 ,随着Cd、Cr(VI)中毒浓度的升高 ,Cd对肝 POD同工酶起激活作用 ,对肾、脑则起抑制作用 ;Cr(VI)对肝 POD同工酶和肾 POD同工酶起激活作用 ,对脑 POD同工酶影响不明显 ;Cd、Cr(VI)复合污染则均显示出协同效应的趋势。另外 ,Cd、Cr(VI)对鲫鱼主要器官 POD同工酶的影响具有组织差异性。

外源过氧化物酶对Hg^(2+)胁迫下小麦幼苗叶片中POD,CAT,SOD同工酶的影响

采用水培法,用一定浓度的Hg2+和不同浓度的萝卜过氧化物酶(RsPrx)对小麦进行浸种处理后,对小麦幼苗叶片中的过氧化物酶(POD)、过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)等同工酶的活性变化进行了研究.结果显示:在Hg2+胁迫下加入一定浓度外源活性POD后的小麦幼苗的叶片中的POD和SOD同工酶表达量与单独Hg2+胁迫处理时相比,明显减少,更接近正常对照.在Hg2+胁迫下加入一定浓度外源活性POD后的小麦幼苗叶片中的CAT同工酶表达量与单独Hg2+胁迫处理时相比明显增加,更接近正常对照.POD,CAT和SOD同工酶的表达量都有明显变化,但其谱带的数目没有发生明显变化.由此推测,一定浓度外源活性POD对Hg2+胁迫下的小麦幼苗的早期生长和发育可以起到一定的缓解作用.

铝胁迫下大麦根过氧化物酶同工酶及根中Al、Ca和P含量的变化

在恒定pH系统中不同Al浓度胁迫下 ,大麦根过氧化物酶同工酶的聚丙烯酰胺凝胶电泳酶谱发生明显变化 ,Rf0 .4 ,Rf 0 .78酶带变化最典型 ,酶带的强度与根的生长有明显的相关性 ,不同品种间酶带的变化存在差异。Al的作用与强光 ( 30 0lx)对根的作用使酶带变化相似。在Al胁迫下 ,大麦根中Al含量显著增加 ,恒定pH系统中敏感品种沪麦 8号、早熟 3号根中的Al含量比耐性品种浙皮 2号高。Al处理引起根中Ca含量的急剧减少 ,4mg/kgAl条件下耐性品种比敏感品种Ca含量高一倍以上。根中P的含量与Al含量在较敏感的品种中存在一定的正相关。元素分析结果所显示的品种耐性序列与根相对伸长率所显示的耐性序列基本相符。

羊草(Leymus chinensis)的过氧化物酶同工酶分析

通过采集内蒙古兴安盟地区不同地理及生态环境下的羊草种子，在相同的实验室条件下进行栽培.取幼苗期整株进行过氧化物酶同工酶分析，并作同株酶谱对照，对其结果采用极点排序法进行排序.结果表明，不同地理及生态环境下的羊草在分子水平（过氧化物酶同工酶）存在着种内分化．

孢子诱变菌株CJL990灵芝过氧化物酶和酯酶同工酶的研究

长白山野生灵芝 (Gamoderma lucidum)通过组织分离获得的灵芝 CL988菌株经 60 Co-γ射线与紫外线交替累积诱变获得菌丝高长速灵芝菌株 CJL990 (已经中国科学院微生物研究所鉴定 ) .本文探讨了供试与诱变灵芝菌株的过氧化物酶和酯酶同工酶的电泳分析 ,进一步确定它们的亲缘关系和差异 .结果表明 :(1 )灵芝 CL988菌株和灵芝 CJL990菌株 ,具有灵芝的某些共同的遗传和生物学特性 ,但他们在酶带条数 RF值尚有差异 ,说明诱变灵芝菌株遗传基因有所改变 ;(2 )两种灵芝的菌丝体的 EST和 POD同工酶谱比较稳定 ,完全可以作为鉴定灵芝种类菌属变异的科学依据 .

磁场和Cu^(2+)对蚕豆幼根生长、细胞分裂和过氧化物酶同工酶谱的影响

研究蚕豆种子经过磁场处理后,在不同的Cu^（2+）浓度下对根的生长、细胞分裂及过氧化物酶同工酶的影响.实验结果表明,蚕豆种子在一定Cu^（2+）浓度条件下,较无磁场处理的种子根生长速度快,有丝分裂指数较高,同工酶的活性也高,但伴随着Cu^（2+）浓度的再增高时,这种现象逐渐消失.

辣根过氧化物酶同功酶C3基因在毕赤酵母中的表达

目的:克隆与表达辣根过氧化物酶同功酶C3(HRPC3)基因。方法:用PCR方法从辣根的总DNA中,扩增得到一种辣根过氧化物酶同功酶C3基因,将PCR产物连接到pMD18-T载体上,测序证明正确后,再将目的基因正确插入到巴斯德毕赤酵母表达载体pPIC9K中,含有目的基因的重组pPIC9K质粒在毕赤酵母中进行表达与分析。结果:应用毕赤酵母作为受体菌,成功表达了HRPC3基因,其活性为56IU/L。结论:毕赤酵母直接表达出了具有生物活性的辣根过氧化物酶同功酶C3。

低含量Pb^(2+)对Cd^(2+)污染下冬小麦幼苗根系过氧化物同工酶的影响

【目的】研究Pb2+含量低于国家"土壤环境质量标准(GB 15618-1995)"规定的Ⅱ类土壤环境基准值(300.0mg/kg)时,其对Cd2+污染下冬小麦幼苗根系过氧化物(POD)同工酶表达的影响,为正确评价土壤重金属污染条件下冬小麦生长发育的安全性和稳定性提供科学依据。【方法】采用盆栽试验,在不同含量Cd2+和Pb2+/Cd2+污染条件下培育冬小麦幼苗,待幼苗生长3周、7周和12周时,采集冬小麦幼苗根系,采用聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE),分析低含量Pb2+对Cd2+污染下冬小麦幼苗根系POD同工酶的影响。【结果】在幼苗生长的3周、7周和12周3个阶段中,土壤Cd2+污染对冬小麦根系POD同工酶的表达表现出了抑制效应;3周龄时,冬小麦根系POD同工酶表达量受Cd2+抑制影响最强,随着冬小麦生长时间的延长,Cd2+的影响开始减弱,且在冬小麦3周和7周龄时,20.0mg/kg Cd2+对冬小麦根系POD同工酶表达量的抑制作用最强。除3周龄时120.0mg/kg Pb2+可减缓20.0mg/kg Cd2+对冬小麦根系POD同工酶表达的抑制作用外,低含量Pb2+对Cd2+污染条件下冬小麦根系POD同工酶的表达均起协同抑制效应。【结论】冬小麦幼苗生长初期,土壤Cd2+污染对其根系POD同工酶表达表现出较强的抑制作用,随着冬小麦生长时间的延长,Cd2+的抑制作用减弱;当土壤中Pb2+含量低于国家"土壤环境质量标准"规定的Ⅱ类土壤环境基准值(300.0mg/kg)时,其增强了Cd2+污染对冬小麦根系POD同工酶表达的抑制作用。

在甲醇酵母Pichia pastoris胞内表达有活性的辣根过氧化物酶

为了开辟在甲醇酵母 Pichia pastoris中表达 HRP的新途径 ,将编码成熟 HRP同功酶 C基因克隆到表达载体 p PIK3.5K中 .p PIK3.5KHRP转化 GS1 1 5后 ,用 PCR筛选阳性 P.pastoris重组株 ,并用甲醇进行诱导 . Western印迹杂交分析表明目标蛋白 (约为 38k D)能被天然 HRP的多克隆抗体所识别 ,因此活性辣根过氧化物酶已在 P.pastoris胞内表达 .筛选菌株中显示了明显的过氧化物酶活性 ,同时诱导过程中血红素和 Ca Cl2

SC2053诱导的雄性不育进程中过氧化物酶同工酶的研究

用雄性不育诱导剂 SC2053,在药隔期对小麦植株进行一次性喷施处理。在药隔期、抽穗始期和开花期分别进行了过氧化物酶同工酶的研究,处理和对照的分析样品是从幼穗或花药中提取的。试验结果如下:(1)在药隔期,处理的过氧化物酶同工酶的酶带多于对照;(2)在抽穗始期,处理和对照的酶带数是一致的;(3)在开花期,处理的过氧化物酶同工酶带少于对照。经SC2053处理后的过氧化物酶同工酶的这种动态变化,可能导致营养和能量的提前消耗,而最终导致被处理植株的雄性不育。

ATRP法合成AC-g-PSStNa及其对辣根过氧化物酶固定化的影响

以活性炭(AC)为原料,利用原子转移自由基聚合法(ATRP)合成了AC-g-PSSt Na有机无机杂化材料,并对其进行FT-IR、SEM、XPS表征。以AC-g-PSSt Na为载体对辣根过氧化物酶(HRP)进行固定化,比较游离酶和固定化酶的pH稳定性、热稳定性及储存稳定性。结果表明,Ac-g-PSSt Na固定化HRP的pH稳定性及热稳定性均强于游离酶,特别是在高温范围内表现出高的催化活性;在碱性环境中固定化酶的活性比游离酶高。可见AC-g-PSSt Na复合材料可有效地应用于固定化HRP。

库尔勒香梨^(60)Co-γ辐射育种材料的过氧化物同工酶研究

采用不连续的垂直平板聚丙烯酰胺凝胶电泳,分析了库尔勒香梨及其不同剂量辐射处理材料叶片的过氧化物同工酶。结果表明:酶谱差异主要表现在酶带的数量和酶活性两个方面,所有供试样品均具有主导酶谱R f为0.46,可以认为是库尔勒香梨稳定的特征酶带。辐射明显改变了过氧化物同工酶谱带的宽度、颜色、条数。强酶带(主导酶带)的变化可导致形态上较大幅度、较高频率的变异,且强酶带(主导酶带)的变化对性状变异起着较强的作用。