抗苗勒氏管激素的生物素-链霉亲和素-辣根过氧化物酶酶促化学发光免疫分析方法的建立

目的:抗苗勒氏管激素(AMH)在评价卵巢储备功能方面具有更高的准确性,将其用于青春期、生育期女性的生育指导时具有很好的临床价值。目前对于AMH的检测,临床上常采用的是酶联免疫分析法,但存在灵敏度低、检测范围窄等缺点,而影响AMH实际水平的测定,使得对病情的预估不准确对疾病的治疗产生影响。因此,建立一种低成本、高敏感度的检测AMH水平的方法尤为重要。方法:利用生物素-亲和素放大系统,将一组抗AMH的第一抗体包被微孔板,同时用生物素标记第二抗体,与第一抗体-抗原复合物结合之后,再与生物素-链霉亲和素-辣根过氧化物酶结合物结合,加入发光底物,建立AMH酶促化学发光免疫分析方法,同时对这一体系的线性、灵敏度、特异度、稳定性、回收率等参数进行检测,并与常规ELISA法进行相比检测AMH浓度。结果:线性检测范围为(0.42～50.00)U/ml,该体系稳定性好,灵敏度0.42U/ml,批内差异小于10.0%,批间差异小于10.0%,与常规ELISA对比差异有统计学意义。结论:AMH的生物素-链霉亲和素-辣根过氧化物酶酶促化学发光免疫分析易于操作、灵敏度高、价格低廉,适用于临床检测。

基于衍生化3-氨基-2-恶唑烷酮的夹心酶联免疫分析

建立一种3-氨基-2-恶唑烷酮(3-amino-2-oxazolidinone,AOZ)夹心免疫检测方法。通过1,6-己二醇连接2-硝基-4-羧基苯甲醛和生物素合成针对AOZ的新型衍生试剂。在样品前处理时加入衍生试剂可对AOZ进行衍生,衍生产率为89%。在酶标板上包被抗AOZ单克隆抗体并以辣根过氧化物酶标记的亲和素或抗生物素抗体作为第二结合物可实现AOZ的夹心酶联免疫吸附检测(enzyme-linked immunosorbnent assay,ELISA)。从实际应用的角度,得到双抗夹心和抗体-亲和素夹心模式下两个表位的极限距离,分别为12Å和13Å,理想距离分别为16Å和17Å。在双抗夹心和抗体-亲和素夹心模式下的检出限分别达到1.8 pg/mL和0.8 pg/mL(以AOZ质量浓度计),相对于竞争ELISA,其灵敏度最高提高了25倍。平均回收率为73%~85%,平均相对标准偏差为9.0%。

上皮性卵巢癌组织中DLL4、Slit2表达相关性及意义

目的研究DLL4、Slit2在正常卵巢组织、上皮性卵巢良性肿瘤组织、上皮性卵巢交界性肿瘤组织、上皮性卵巢恶性肿瘤组织中表达情况,探讨两者在上皮性卵巢恶性肿瘤相互关系。方法标本来源于2009年1月至2016年12月包头市中心医院病理科收集的卵巢石蜡,采用免疫组化(SABC)法检测正常卵巢组织、良性肿瘤组织、交界性肿瘤组织、恶性肿瘤组织各30例,分析DLL4、Slit2在其表达情况及探讨两者关联性。结果 DLL4在正常卵巢组、良性肿瘤组、交界性肿瘤组、恶性肿瘤组中阳性表达依次为:13.33%、23.33%、33.33%、83.33%,其中卵巢恶性肿瘤组阳性表达与三者相比,均有显著性差异(χ~2值分别为29.433、21.696、15.429,均P<0.01),而正常卵巢组织、良性肿瘤组织、交界性肿瘤组织之间两两比较无统计学意义(χ~2值分别为1.002、3.354、0.739,均P>0.05)。Slit2在正常卵巢组、良性肿瘤组、交界性肿瘤组、恶性肿瘤组中阳性表达依次为63.33%、66.67%、46.67%、36.67%,恶性肿瘤组阳性表达率显著低于正常卵巢组、卵巢良性肿瘤组(χ~2值分别为4.267、5.406,均P<0.05)。正常卵巢组织、良性肿瘤组织、交界性肿瘤组三组两两比较均无统计学意义(χ~2值分别为0.073、1.684、2.443,均P>0.05)。结论DLL4、Slit2有可能通过生长因子相互制约,为上皮性卵巢癌发病机制提供新思路,同时为其分子靶向治疗开辟新道路。

基于磁性纳米颗粒和金纳米粒子构建DNA电化学生物传感技术

本文构建了一种基于纳米粒子、茎环DNA和丝网印刷电极(SPCE)的电化学生物传感技术用于乳腺癌基因的快速、灵敏检测。该传感技术中,探针DNA的两端分别标记了巯基和生物素,巯基用于与金纳米粒子(AuNPs)作用,生物素用于与磁性纳米颗粒(MNPs)表面修饰的链酶亲和素作用以达到富集的目的,之后利用SPCE进行电化学检测。无目标DNA存在时,双标记DNA保持茎环结构,使得生物素分子很难和MNPs上的亲和素接触。一旦加入目标DNA,茎环结构打开,生物素得以与MNPs上的链霉亲和素发生特异性结合,形成的复合物(MNPs-DNA-AuNPs)通过磁性富集到SPCE表面,从而获得AuNPs的电化学信号。该DNA电化学生物传感对单碱基错配有良好的分辨能力,完全互补DNA的检出限为8.0×10-13 mol/L。

改进的反向斑点杂交方法

目的改进反向斑点杂交的操作方法,探索更为简便快捷的实验流程。方法优化杂交液II的组分,使用HPV基因分型、β-地中海贫血基因突变和HBV基因分型三个试剂盒验证改进的实验方法。结果 HPV基因分型、β-地中海贫血基因突变和HBV基因分型试剂盒的实验结果证实,使用优化后的杂交液II,链霉亲和素过氧化物酶在杂交温度能够有效地与生物素结合,试剂盒的灵敏度不受影响且膜条的背景低。结论改进的反向斑点杂交方法不影响试剂盒的灵敏度,并且操作简便、实验时间短、实验结果背景低。

苦参碱对高糖致大鼠腹膜间皮细胞NF-κB p65表达的影响

目的探讨苦参碱对高糖致大鼠腹膜间皮细胞NF-κB p65表达的影响及其在腹膜炎症发病机制中的作用,为临床防治腹膜硬化提供部分实验依据。方法将30只健康雄性SD大鼠随机分成3组:对照组(n=10,NS组):腹腔每天注射生理盐水30 m l;模型组(n=10,HGC组):腹腔每天注射4.25%的葡萄糖腹透液30 m l+每周1次腹腔注射红霉素6.25万单位;治疗组(n=10,HGM组):腹腔每天注射4.25%葡萄糖腹透液+苦参碱溶液30 m l+每周1次腹腔注射红霉素6.25万单位。8周后分别处死每组各10只大鼠,取腹膜组织以链霉亲和素过氧化物酶(SP)免疫组织化学法行NF-κB p65蛋白检测,并取腹膜组织行HE及M asson染色病检。结果 与NS组比较,HGC和HGM组腹膜间皮细胞NF-κB p65表达上调,但HGC组显著高于HGM组(P<0.05)。结论苦参碱能拮抗高糖引起的NF-κB p65表达上调,减轻腹膜慢性炎症,延缓腹膜纤维化的发生。

《解剖学报》可以直接使用的英文缩略词

以下词汇在论文中首次出现时可直接用英文缩略词CT（计算机X线断层摄影术）NOS（一氧化氮合酶）MRI（磁共振成像）PB（磷酸缓冲液）RT—PCR（反转录-聚合酶链式反应）PBS（磷酸盐缓冲液）SP（链霉卵白素-过氧化物酶法）DAB（二氨基联苯胺）HRP（辣根过氧化物酶）5-HT（5-羟色胺）

大鼠体内生物素示踪重组人胶原蛋白的方法研究

目的:建立一种在大鼠体内示踪外部重组人胶原蛋白的方法。方法:采用超级生物素标记重组人胶原蛋白,将标记后的重组人胶原蛋白植入大鼠体内,实验周期结束后取植入部位组织,制备石蜡切片,用辣根过氧化物酶标记链霉亲和素识别病理切片上生物素标记的蛋白,二氨基联苯胺法染色(DAB法染色),显微镜观察组织情况。结果:在病理切片中观察到生物素标记重组人胶原蛋白的棕褐色沉淀,实现了植入组织的重组人胶原蛋白的定位。结论:生物素标记重组人胶原蛋白的方法灵敏度高,操作简单,可快速实现对重组人胶原蛋白的追踪。本文通过设立生物素对照组,排除生物素本身体内代谢对实验结果的影响。

整合素αvβ3对大鼠C6脑胶质瘤细胞增殖影响的实验研究

目的研究整合素αvβ3对大鼠C6脑胶质瘤细胞增殖的影响,为以整合素αvβ3为靶点治疗脑胶质瘤提供实验依据。方法采用MTT比色法和SABC免疫组化检测法,观察不同浓度的整合素αvβ3抗体对体外培养的大鼠C6脑胶质瘤细胞增殖的抑制作用和对增殖细胞核抗原(PCNA)表达的影响。结果整合素αvβ3抗体对体外培养的大鼠C6脑胶质瘤细胞的增殖和PCNA表达有明显的抑制作用,其作用表现出明显的量效关系(P<0.05)。结论整合素αvβ3对脑胶质瘤细胞的恶性增殖具有促进作用,而整合素αvβ3抗体对其有明显抑制作用,为抗整合素αvβ3治疗脑胶质瘤提供了实验依据和理论依据。

儿童急性白血病促凋亡蛋白Smac、HtrA2表达的意义

目的探讨促凋亡蛋白Smac、HtrA2在儿童急性白血病（AL）中的表达，分析二者的关系及临床意义。方法77例AL患儿，其中初诊组32例，缓解组33例，复发组12例；15例非恶性血液病患儿作为对照组。采用免疫组织化学过氧化物酶标记链霉卵白素染色（SP）法检测患儿骨髓中Smac、HtrA2蛋白表达情况。应用SPSS13．0软件对结果进行分析。结果所有检测标本仅部分表达Smac，而HtrA2则在所有检测标本中均表达；初诊组患儿骨髓中Smac、HtrA2表达水平均高于缓解组（χ^2=17．38、F=2．36，P均〈0．05）和对照组（χ^2=12．89、F=5．26，P均〈0．05），差异均有统计学意义，但与复发组比较差异均无统计学意义（χ^2=1．18、F=1．57，P均〉0．05）；缓解组二者表达水平均高于对照组，但差异均无统计学意义（χ^2=1．20、F=2．23，P均〉0．05）。初治AL患儿骨髓中Smac、HtrA2蛋白表达水平在急性淋巴细胞白血病（ALL）组和急性髓系自血病（AML）组比较差异均无统计学意义（χ^2=0．113、t=1．024，P均〉0．05）。初诊组AL完全缓解率在Smac蛋白表达阴性（Smac^-）患者组（90．9％）、HtrA2蛋白低表达（HtrA2^low）患者组（84．6％）分别明显高于Smac蛋白表达阳性（Smac^＋）组（47．6％）、HtrA2蛋白高表达（HtrA2^high）组（47．4％），差异均有统计学意义（χ^2=5．772、4．596，P均〈0．05）；Smac^-HtrA2^low表达组完全缓解率（100％）明显高于Smac^＋HtrA2^high表达组（30．8％），差异有统计学意义（χ^2=9．692，P〈0．01）。初治AL患儿骨髓中Smae、HtrA2蛋白表达水平呈正相关（r=0．979，P〈0．001）。结论促凋亡蛋白Smae、HtrA2可能参与了儿童AL的发生与病情变化过程，且二存在此过程中相互影响。在初诊患儿中二者表达水平与白血病临床类型可能无关，但Smae、HtrA2蛋白高表达提示预后不良。

RT—PCR—ELISA方法检测甲肝减毒活疫苗病毒滴度的初步研究

目的应用核酸扩增产物测定的固相杂交酶联显色法(RT-PCR-ELISA)检测甲肝减毒活疫苗病毒滴度。方法应用RT-PCR-ELISA，将标记有生物素的寡核苷酸引物所扩增的疫苗病毒基因产物，与微孔反应板上的特异性探针进行快速杂交，通过辣根过氧化物酶标记的链亲和素进行酶联显色，读取吸光度(A值)，判断结果。应用此法检测了11批甲肝活疫苗滴度，并与常规细胞培养法(CCID50）比较。结果本方法与细胞培养法的敏感性相仿，具有简便、快速、特异的优点。结论RTPCR—EUSA法有望代替常规细胞培养法应用于甲肝减毒活疫苗病毒滴度的检测。