辣蓼黄酮乙酸乙酯部分抑制炎症因子产生及p38丝裂原活化蛋白激酶和细胞外调节蛋白激酶1/2蛋白磷酸化调节猪圆环病毒2型诱导的炎症反应

本研究旨在探索辣蓼黄酮乙酸乙酯部分(FEA)抵御猪圆环病毒2型(PCV2)感染猪肺泡巨噬细胞(3D4/2细胞)诱导的炎症反应的分子机理。试验共设置7个组,分别为空白对照组、PCV2感染组、脂多糖阳性对照组、芦丁阳性对照组和FEA药物组(25、50和100μg/mL),每组4个重复。检测不同浓度FEA作用3D4/2细胞后的细胞活性;接种PCV2后,检测白细胞介素-6(IL-6)、干扰素-γ(IFN-γ)、白细胞介素-10(IL-10)含量及环氧合酶-1(COX-1)、环氧合酶-2(COX-2)活性;定量PCR检测COX-2、IL-6、IL-10、原癌基因(c-myc和c-fos)、氨基酸端激酶(c-jun)、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)和细胞外调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)的mRNA相对表达水平;Western-Blotting检测p38 MAPK、ERK1/2的蛋白相对表达水平。结果表明,25、50和100μg/mL的FEA对3D4/2细胞活力无显著影响(P>0.05)。与PCV2感染组相比,25、50和100μg/mL FEA药物组的IL-6、IL-10和IFN-γ含量显著或极显著降低(P<0.05或P<0.01),25和100μg/mL FEA药物组的COX-1和COX-2活性显著降低(P<0.05),25、50和100μg/mL FEA药物组的IL-6、IL-10、COX-2和c-fos的mRNA相对表达水平显著或极显著降低(P<0.05或P<0.01),25和100μg/mL FEA药物组的c-jun、c-myc、MAPK和ERK的mRNA相对表达水平显著或极显著降低(P<0.05或P<0.01),25、50和100μg/mL FEA药物组的p38 MAPK、ERK1/2的蛋白相对表达水平极显著降低(P<0.01)。由此可见,FEA通过减少炎症因子的产生并抑制p38 MAPK和ERK1/2蛋白磷酸化而调节PCV2诱导的3D4/2细胞的炎症反应。

辣蓼黄酮乙酸乙酯部分体外抗猪伪狂犬病病毒研究

为了研究辣蓼黄酮乙酸乙酯部分(FEA)抗猪伪狂犬病病毒(PRV)的效果,探索FEA体外抗病毒的作用方式,为辣蓼资源开发与利用提供理论依据,试验用PK-15细胞扩增PRV,计算TCID50;采用观察细胞病变联合中性红检测的方法,筛选FEA对PK-15细胞的最大安全浓度;通过计算各试验组(空白对照组、PRV阳性对照组、FEA组)的细胞保护率观察3种作用方式(阻断作用、增殖抑制作用及直接灭活作用)下不同浓度FEA体外抗PRV的效果。结果表明:PRV扩增病毒液的TCID50为1×10-6.25/0.1 mL;FEA的最大安全浓度为200μg/mL;3种作用方式下,药物对细胞的保护率范围分别为23%~74%、60%~94%及42%~91%,并且后两种作用方式下FEA浓度为100~200μg/mL时对细胞保护率达80%以上,细胞活性与PRV阳性对照组差异极显著(P<0.01)。说明高浓度的FEA可能通过抑制病毒增殖及直接灭活病毒这两种方式发挥抗病毒作用,且抗病毒效果呈剂量依赖性。

辣蓼黄酮乙酸乙酯部分对PRV体外诱导RAW264.7细胞分泌炎性因子的影响

探讨辣蓼黄酮乙酸乙酯部分(ethyl acetate of flavonoids from Polygonum hydropiper L.,FEA)对猪伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)体外诱导RAW264.7细胞分泌炎性因子的影响。正式试验前将不同浓度的FEA作用于RAW264.7细胞,通过CCK-8检测细胞体外增殖活性,筛选FEA对RAW264.7细胞的安全浓度范围。正式试验分为空白对照组、PRV阳性对照组、芦丁对照组、5个FEA药物组,除空白对照组外,其余各组细胞加入PRV共孵育1.5 h后,再加入芦丁或不同浓度的FEA,分别培养4、8、12、24 h,CCK-8法检测FEA对病毒感染的RAW264.7细胞活性,筛选出3个FEA药物组(高、中、低剂量FEA),再通过ELISA法检测各时间点细胞培养液上清中炎症相关因子TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10、MCP-1和IFN-γ的分泌水平,以确定FEA体外调节炎症反应的最适时间及药物浓度。结果显示:①FEA对RAW264.7细胞的安全浓度为12.5~200μg/mL;②25~100μg/mL FEA能显著提高PRV感染的RAW264.7细胞体外增殖活性;③PRV感染RAW264.7细胞后促进细胞炎症因子的分泌,用FEA处理8~12 h后,在一定程度上降低了TNF-α、IL-1β、IL-6和MCP-1的分泌水平(P<0.05),升高了IFN-γ分泌水平(P<0.05),调节了IL-10分泌水平,且FEA处理8 h抗炎效果最好。结果表明,FEA能调节病毒感染细胞分泌炎性因子的水平,提示其具有体外抗炎作用。该结果可为进一步研究FEA抗病毒分子机制提供参考依据。

辣蓼黄酮乙酸乙酯部分对脂多糖诱导内毒素血症小鼠生化指标和炎性细胞的影响

目的观察辣蓼黄酮乙酸乙酯(FEA)部分对内毒素血症小鼠生化指标和炎性细胞的影响,探讨其作用机制。方法采用酶解-超声偶联法提取辣蓼全草中总黄酮,结合大孔树脂纯化富集获得辣蓼黄酮乙酸乙酯(FEA)部分,脂多糖(LPS)刺激小鼠建立内毒素血症模型。实验小鼠分为空白组、模型组和FEA高、中、低剂量组,各给药组给予相应浓度药液。测定肠组织丙二醛(MDA)和髓过氧化物酶(MPO)的含量,肝组织总抗氧化能力(T-AOC)、总超氧化物歧化酶(T-SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性,血清还原型谷胱甘肽(GSH)含量与溶菌酶(LZM)、酸性磷酸酶(ACP)的活性,RT-PCR检测肺组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、干扰素(IFN)-α、IFN-γ和白细胞介素-2(IL-2)含量。结果与空白组比较,模型组小鼠肠组织MDA、MPO和血清ACP水平升高,肝组织T-AOC、T-SOD、GSH-Px和血清GSH、LZM水平降低,血清、肠组织和肝组织TNF-α升高,肺组织TNF-α、IFN-α、IFN-γ和IL-2 m RNA表达升高;与模型组比较,FEA各剂量组小鼠肠组织MDA、MPO和血清ACP水平降低,FEA中、高剂量组肝组织T-AOC、T-SOD、GSH-Px和血清GSH、LZM水平升高,FEA各剂量组小鼠血清、肠组织和肝组织TNF-α含量显著降低,肺组织TNF-α、IFN-α、IFN-γ和IL-2 m RNA表达显著降低;FEA高剂量组较模型组小鼠肺组织、回肠和结肠病理形态明显改善。结论 FEA部分能降低LPS诱导小鼠内毒素血症的炎性损伤,对机体具有保护作用。

辣蓼黄酮乙酸乙酯部分干预LPS诱导RAW264.7炎症反应机制

为探讨辣蓼黄酮乙酸乙酯部分(FEA)对脂多糖(LPS)诱导的RAW264.7炎症反应的调节机制,采用不同剂量的FEA作用于LPS刺激诱导的RAW264.7炎症反应体外模型,测定细胞内iNOS、COX-2的表达水平和AMPK、ERK、P38、JNK、c-Jun及其相应蛋白磷酸化的水平。结果表明,80μg/mL的FEA预处理LPS诱导的RAW264.74 h可显著抑制细胞内iNOS和COX-2水平,并显著提高p-AMPKα/AMPKα水平;40、80μg/mL的FEA预处理LPS诱导的RAW 264.7细胞2 h可显著抑制p-ERK/ERK水平,4 h可显著抑制p-P38/P38水平;80μg/mL的FEA预处理LPS诱导的RAW 264.7细胞2 h、4 h可显著抑制p-JNK/JNK水平,4 h可显著抑制c-Jun水平。说明辣蓼黄酮乙酸乙酯部分对LPS诱导的RAW264.7发挥的抗炎作用可能与抑制细胞内iNOS和COX-2的水平、抑制MAPKs信号通路的磷酸化和增加磷酸化AMPK的表达水平有关。

辣蓼黄酮通过调控核因子E2相关因子2信号通路及组蛋白乙酰化缓解伪狂犬病毒感染小鼠诱导的脾脏和肺脏氧化应激

本研究通过探索辣蓼黄酮对核因子E2相关因子2(Nrf2)信号通路及组蛋白乙酰化的调控效果,以阐明辣蓼黄酮干预伪狂犬病毒(PRV)感染小鼠诱导氧化应激的分子机制。将60只无特定病原体(SPF)级昆明种小鼠,随机分为6个组(每组10只小鼠),即空白对照组、PRV组、维生素C(VC)组(灌服100 mg/kg BW VC)及辣蓼黄酮高、中、低剂量组(灌服200、100和50 mg/kg BW辣蓼黄酮混悬液),各组灌服量均为0.2 mL。PRV感染小鼠7 d后,通过荧光定量PCR测定小鼠脾脏和肺脏组织中诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、Nrf2、血红素加氧酶-1(HO-1)、依赖还原型辅酶Ⅰ(Ⅱ)醌氧化还原酶1(NQO1)、乙酰转移酶(HAT)和去乙酰转移酶(HDAC)的mRNA表达水平;通过免疫组化和蛋白免疫印迹法(Western Blot)测定iNOS、Nrf2、HO-1、NQO1、乙酰化组蛋白H3(AcH3)和乙酰化组蛋白H4(AcH4)的蛋白表达水平。结果表明:与空白对照组相比,PRV组脾脏组织中iNOS、HAT的mRNA表达水平和AcH3的蛋白表达水平显著或极显著升高(P<0.05或P<0.01),脾脏组织中HO-1、HDAC的mRNA表达水平极显著降低(P<0.01);PRV组肺脏组织中iNOS、Nrf2、HO-1、NQO1、HAT的mRNA表达水平和iNOS、Nrf2、AcH3的蛋白表达水平显著或极显著升高(P<0.05或P<0.01),肺脏组织中AcH4的蛋白表达水平极显著降低(P<0.01)。与PRV组相比,辣蓼黄酮高、中、低剂量组脾脏组织中Nrf2、HO-1和HDAC的mRNA表达水平和AcH4的蛋白表达水平显著或极显著升高(P<0.05或P<0.01),脾脏组织中HAT的mRNA表达水平和AcH3的蛋白表达水平显著或极显著下降(P<0.05或P<0.01);辣蓼黄酮高、中、低剂量组肺脏组织中iNOS的mRNA表达水平和AcH3的蛋白表达水平显著或极显著下降(P<0.05或P<0.01),肺脏组织中AcH4的蛋白表达水平极显著升高(P<0.01)。由此可见,辣蓼黄酮对Nrf2信号通路和组蛋白乙酰化修饰具有调控作用,且其通过该调控作用缓解PRV感染小鼠脾脏和肺脏诱导的氧化应激。

辣蓼黄酮缓解猪伪狂犬病病毒诱导的小鼠炎症及相关信号通路研究

为研究辣蓼黄酮乙酸乙酯部分(ethyl acetate of flavonoids from Polygonum hydropiper L,FEA)对猪伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)感染小鼠诱导的炎症反应及炎症相关信号通路的调节作用,以50~200 mg/kg体重的FEA处理PRV感染的小鼠炎症模型后,检测各组小鼠免疫器官指数变化,脾脏匀浆液中氧化应激相关因子、炎症相关因子的水平或表达量,以及NF-κB等炎症相关信号通路的活化情况。结果显示,50和200 mg/kg体重的FEA能降低PRV感染的小鼠脾脏指数(P<0.05);50~200 mg/kg体重FEA能不同程度的降低PRV感染的小鼠脾脏细胞中ROS、NO水平,IL-1β、IL-6、MCP-1和TNF-α等细胞因子的含量及mRNA表达,以及XOD、MPO、iNOS的酶活性(P<0.05),升高IL-10的水平和GSH的酶活性(P<0.05)。此外,FEA降低了PRV感染的小鼠脾脏细胞中p-p65/p65、p-JNK/JNK和p-p38/p38等炎症相关信号通路蛋白的磷酸化比值(P<0.05)。结果表明,FEA能减缓PRV诱导的小鼠氧化应激状态和炎症反应,发挥体内抗炎作用,其可能是通过抑制NF-κB和MAPK等炎症相关信号通路的活化发挥作用。

辣蓼黄酮正丁醇部位对伪狂犬病病毒感染小鼠抗氧化作用研究

旨在探究辣蓼黄酮正丁醇部位(FNB)对小鼠氧化应激反应的调节作用。将72只SPF级小鼠随机分为空白对照组、伪狂犬病病毒(PRV)模型组、芦丁对照组,3个FNB处理组(25、50、100 mg/kg体重)。采用注射联合滴鼻的方式感染10^(2.33)TCID_(50)PRV,以建立小鼠体内氧化应激模型,病毒感染后1 h,用不同剂量的FNB灌胃给药,0.3 mL/只。连续灌胃7 d后采样测定氧化应激相关因子水平并进行病理组织学观察,期间记录小鼠的临床表现。结果显示,PRV感染后,小鼠脾脏、肺脏和肝脏发生了不同程度的病理损伤,FNB显著或极显著降低小鼠脾脏、心脏指数(P<0.05,P<0.01);FNB能增强血清中CAT、SOD、HO-1和NQO1的活性,升高血清中GSH、NO、T-AOC和脾脏中T-AOC的水平,剂量为100 mg/kg体重的FNB效果最为显著。结果表明,FNB具有良好抗氧化应激作用,并可有效缓解小鼠PRV感染引起的氧化应激对机体损伤。

辣蓼黄酮正丁醇部位对PRV感染RAW264.7细胞氧化应激的干预作用及组蛋白乙酰化水平的影响

试验旨在探究辣蓼黄酮正丁醇部位(FNB)对猪伪狂犬病毒(PRV)感染小鼠单核巨噬细胞(RAW264.7)氧化应激反应的干预作用及组蛋白乙酰化水平的影响。采用CCK-8法检测FNB对细胞的毒性作用,采用不同浓度的FNB(25、50、100 mg/L)处理PRV感染的RAW264.7细胞4、8、12 h,测定氧化应激相关因子和组蛋白乙酰化水平。结果显示,与PRV感染组相比,25 mg/L FNB作用于PRV感染的RAW264.7细胞12 h后,细胞内诱导性一氧化氮合酶(iNOS)活性及一氧化氮(NO)、丙二醛(MDA)水平降低,谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、小鼠血红素氧合酶1(HO-1)和小鼠醌氧化还原酶1(NQO1)活性升高,iNOS mRNA的表达水平极显著下调(P<0.01),HO-1 mRNA的表达水平显著上调(P<0.05),核因子E2相关因子2(Nrf2)、NQO1的表达水平极显著上调(P<0.01)。与PRV感染组相比,25 mg/L FNB组处理12 h时后,细胞内组蛋白乙酰化酶(HAT)的活性降低,组蛋白去乙酰化酶(HDAC)的活性升高,细胞内HAT mRNA的表达水平下调,HDAC mRNA的表达水平上调。研究表明,FNB对PRV感染RAW264.7细胞诱导的氧化应激具有一定的调节作用,可通过提高细胞内多种抗氧化酶的基因表达水平发挥抗氧化作用,调节细胞内的乙酰化水平,降低PRV感染导致的氧化应激损伤。

辣蓼黄酮提取物对南美白对虾免疫功能及其免疫相关因子mRNA表达水平的影响

试验旨在探索辣蓼黄酮提取物对南美白对虾免疫功能的调节及其作用机制。将1 000尾南美白对虾随机平均分为空白对照组,黄芪对照组,辣蓼黄酮提取物高(8.0 g/kg饲料)、中(4.0 g/kg饲料)、低(2.0 g/kg饲料)剂量试验组,连续给药35 d,于第17、35天测定对虾体长、体重,肝胰腺指数、血细胞分类计数、免疫相关酶活性和含量及肝胰腺组织中免疫相关因子的mRNA表达水平。结果表明,用药后第17天,低剂量组南美白对虾终末体长、体重和增重率与空白对照组相比差异不显著(P>0.05)。第35天时,低中高剂量组的iNOS均极显著高于空白对照组(P<0.01);中剂量试验组南美白对虾血液中ACP和TP活性与空白对照组比较差异极显著(P<0.01),中剂量组南美白对虾终末体长、体重和增重率均极显著高于空白对照组(P<0.01);低、中、高剂量组血液中颗粒细胞比例极显著高于空白对照组(P<0.01);血液中TP、SOD、T-AOC、iNOS、ACP、AKP等免疫相关酶活性和含量以及肝胰腺组织中ProPO、PE、LGBP等免疫相关因子的mRNA表达水平均呈不同程度升高。说明辣蓼黄酮提取物对南美白对虾具有促生长、抗氧化和免疫调节作用,其作用机制可能是增加血液中免疫细胞数量和升高相关酶活性及调节免疫相关因子的基因表达水平。

饵料中添加辣蓼黄酮提取物对南美白对虾生长性能的影响

试验旨在探索饵料中添加辣蓼黄酮提取物对南美白对虾生长性能的影响。将600尾健康的南美白对虾随机分为5组,每组3个重复,每个重复40尾虾。对照组对虾饲喂基础饵料,各试验组分别在饵料中添加推荐剂量的1、3、5、10倍饲喂辣蓼黄酮提取物。试验期35 d。结果显示,与对照组相比,连续35 d按推荐剂量的1、3、5倍饲喂辣蓼黄酮提取物可极显著提高南美白对虾的体长、体重和增重率。与对照组相比,给药35 d,5倍剂量试验组对虾血液TG含量均极显著升高(P<0.01),3倍剂量组、5倍剂量组和10倍剂量组对虾血液AST活性极显著升高(P<0.01),1倍剂量组对虾血液BUN含量显著升高(P<0.05)。连续35 d按推荐剂量的1、3、5倍饲喂辣蓼黄酮提取物的南美白对虾血细胞颗粒细胞和半颗粒细胞的数量不同程度升高,肝胰腺组织结构完整,细胞形态清晰。研究表明,连续35 d饲喂辣蓼黄酮提取物可提高南美白对虾生长性能和机体免疫功能,且推荐剂量(4.0 g/kg)的5倍剂量范围内均具有良好的安全性。

辣蓼黄酮正丁醇部位对PRV感染3D4/2细胞氧化应激相关因子水平的影响

【目的】探究辣蓼黄酮正丁醇部位(N-butanol fraction of Polygonum hydropiper flavonoids,FNB)对猪伪狂犬病毒(Pseudoabies virus,PRV)体外感染猪肺泡巨噬细胞(3D4/2细胞)氧化应激相关因子的影响,旨在初步分析FNB的抗氧化效果。【方法】采用10-1至10-10浓度PRV体外感染猪肾细胞(PK15细胞),计算病毒半数组织培养感染剂量(TCID50);将3D4/2细胞分为BC组、DMSO组、PRV组、FNB 1、FNB2和FNB3组,BC组用DMEM培养液处理,其余各组用感染复数(multiplicity of infection,MOI)=0.1 RPV处理,孵育2 h后,PRV组添加DMEM培养液,DMSO组及FNB1、FNB2、FNB3组分别添加0.05%DMSO及12.5、25、50μg/mL FNB的DMEM培养液。培养4、8、12、24 h后,分别收取各组细胞培养液上清和细胞,通过试剂盒测定细胞培养液上清中一氧化氮(NO)的含量、细胞内活性氧(ROS)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、黄嘌呤氧化酶(XOD)、髓过氧化物酶(MPO)的活性和丙二醛(MDA)的含量。【结果】PRV的TCID50为10-8.25/0.1 mL;与BC组相比,PRV组上清中NO水平在4、8 h时极显著降低(P<0.01),在12、24 h时极显著升高(P<0.01),细胞内ROS在4 h时显著降低(P<0.05),8~24 h时显著或极显著升高(P<0.05;P<0.01),iNOS和XOD活性在8~24 h时显著或极显著升高(P<0.05;P<0.01),MPO活性在4~24 h时显著升高(P<0.05),MDA含量在4 h时显著降低(P<0.05),12~24 h时显著升高(P<0.05)。与PRV组相比,FNB2组NO含量在4~8 h时显著或极显著升高(P<0.05;P<0.01),在12 h时显著降低(P<0.05),FNB3组在24 h时极显著升高(P<0.01);细胞内ROS水平在4 h时极显著升高(P<0.01),8~24 h时极显著降低(P<0.01);FNB1组iNOS活性在4 h时显著升高(P<0.05),3个FNB组iNOS活性在8~24 h时显著或极显著升高(P<0.05;P<0.01),MPO和XOD活性在4~24 h时显著或极显著降低(P<0.05;P<0.01),MDA含量在4 h时升高,8 h时FNB2、FNB3组MDA含量显著降低(P<0.05),24 h时FNB1、FNB2组MDA含量显著降低(P<0.05)。【结论】FNB可以通过干预氧化应激相关因子的分泌调节细胞氧化应激水平,维持氧化与抗氧化的平衡,结果可为辣蓼黄酮正丁醇部位的开发应用提供理论依据。

微波辐射预处理提取花叶滇苦菜总黄酮工艺及其乙酸乙酯萃取物的抑菌活性研究

为了探讨微波辐射预处理提取花叶滇苦菜总黄酮的工艺优化及其总黄酮提取液乙酸乙酯萃取物的抑菌活性,在单因素实验基础上,采用正交试验定总黄酮提取最佳工艺;参照CLSI标准测定乙酸乙酯萃取物对铜绿假单胞菌(ATCC9027)、铜绿假单胞菌耐药菌(PA1)、金黄色葡萄球(ATCC29213)、金黄色葡萄球菌耐药菌(SA1)、大肠杆菌(ATCC25922)等5种细菌的抑菌活性。结果表明,花叶滇苦菜地上部分总黄酮提取的最佳工艺为:微波辐射时间为120 s,微波功率为350 W,乙醇浓度为60%,水浴温度70℃,料液比1∶40 g/m L,水浴时间为60 min,此时,黄酮得率为38.328 mg/g。地下部分总黄酮提取的最佳工艺为:微波辐射时间为90 s,微波辐射功率为490 W,乙醇浓度为70%,料液比1∶30 g/m L,水浴温度为80℃,水浴时间为90 min,其黄酮得率为7.232 mg/g。乙酸乙酯萃取物具备一定抑菌活性,对金黄色葡萄球菌耐药菌的MIC分别为4(地上部分)和8 mg/m L(地下部分)。当浓度低于16 mg/m L时,对铜绿假单胞菌、铜绿假单胞菌耐药菌和大肠杆菌均无抑制作用。微波辐射预处理对花叶滇苦菜总黄酮的提取具有指导意义,总黄酮提取液乙酸乙酯萃取物对金黄色葡萄球菌具有一定的抑制作用。

超声波-双水相法提取辣蓼中总黄酮的工艺优化

本试验以福建武夷山采集的辣蓼为原料,采用超声波-乙醇/硫酸铵双水相法提取辣蓼中总黄酮。利用单因素试验及Box-Behnken响应面设计对提取工艺进行优化。得到辣蓼中总黄酮的最佳提取工艺条件为:乙醇浓度42%,硫酸铵含量10 g/40 mL,超声时间80 min,料液比1:40,超声温度60℃。在此工艺条件下,辣蓼中总黄酮提取率为2.923%,与预测值接近。该方法对辣蓼中总黄酮具有良好的提取效果,可为辣蓼中黄酮类化合物在食品、医药、兽药等领域的深度利用提供新的参考。

响应面法优化辣蓼黄酮的提取工艺

试验旨在优化辣蓼黄酮的提取工艺。以辣蓼为试验材料,通过单因素试验考察液料比、乙醇含量、超声时间、超声温度对总黄酮含量的影响;确定影响总黄酮含量的主要因素和最佳范围后,以液料比、乙醇含量和超声时间为考察因素,以辣蓼黄酮含量为评价指标,通过响应面法优化辣蓼黄酮的提取工艺。结果显示,液料比、乙醇含量和超声时间是影响辣蓼黄酮含量的主要因素,当液料比20 mL/g、乙醇含量60%、超声时间40 min时,黄酮含量最高,分别是18.93%、18.07%和18.06%。液料比、乙醇含量和超声时间对辣蓼黄酮含量的影响大小依次是液料比>乙醇含量>超声时间,其中液料比和乙醇含量对辣蓼黄酮含量的影响达到极显著水平,超声时间不显著;液料比和超声时间之间交互作用对辣蓼黄酮含量影响最明显。验证试验结果显示,辣蓼黄酮最优提取工艺为液料比21 mL/g、乙醇含量62%、超声时间39 min,在此条件下黄酮的平均含量为19.108%。

辣蓼黄酮长循环纳米脂质体的制备

研究旨在优化辣蓼黄酮长循环纳米脂质体制备条件。试验首先以包封率为评价指标,筛选辣蓼黄酮长循环纳米脂质体制备方法。确定改良乙醇注入法后,采用单因素试验考察磷胆比、药脂比、生理盐水体积、超声时间、表面活性剂用量因素对包封率的影响;再通过Box-Behnken响应面法进行3因素3水平优化,选取磷胆比、药脂比、生理盐水体积等3个因素进一步优化;确定最佳的脂质体制备条件后,通过后插入法将DSPEMPEG 2000插入辣蓼黄酮纳米脂质体上,制成辣蓼黄酮长循环纳米脂质体并进行表征。结果显示,改良乙醇注入法制备辣蓼黄酮长循环纳米脂质体最优条件是:磷胆比(质量比)6.8∶1、药脂比(质量比)1∶10.3、生理盐水体积9.5 mL。选择摩尔比为5%的DSPE-MPEG 2000制备长循环纳米脂质体,在最优条件下制备的辣蓼黄酮长循环纳米脂质体平均包封率为(72.60±2.44)%,脂质体粒径为(80.93±0.30)nm,多分散性指数(PDI)为0.14±0.01,Zeta电位(-1.70±0.29)mV。

辣蓼黄酮正丁醇部分对脂多糖诱导内毒素血症小鼠的保护作用

为探讨辣蓼黄酮正丁醇部分(FNB)对内毒素血症小鼠炎性细胞因子的影响,采用酶解-超声偶联法提取辣蓼全草中的总黄酮,结合大孔树脂纯化富集获得辣蓼正丁醇部分黄酮,通过不同剂量的FNB作用于脂多糖(LPS)刺激所诱导的小鼠内毒素血症模型,测定丙二醛(MDA)、MPO、T-AOC、T-SOD、GSHPX、GSH、LZM、ACP及炎性细胞因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)、干扰素(IFN,IFN-α、IFN-γ)、白介素-2(IL-2)水平。结果表明,FNB能通过提升小鼠肝脏的抗氧化防御酶促体系的活性,减少LPS刺激所诱导的促炎因子TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8的释放,降低肺部TNF-α、IFN-α、IFN-γ以及IL-2mRNA的表达水平。说明一定浓度的FNB能减轻LPS诱导的内毒素血症对小鼠的损伤,改善生存率。

辣蓼黄酮正丁醇部分体外抗猪繁殖与呼吸综合征病毒的研究

为明确辣蓼黄酮正丁醇部分(n-butanol part of flavonoids from Polygonum hydropiper L.,FNB)体外抗猪繁殖与呼吸综合征病毒(PPRSV)的效果。本研究以Marc-145细胞和PPRSV弱毒疫苗毒株(TJM-F92)为对象,通过CCK-8法检测FNB对细胞的毒性作用,并检测先给药后接毒、先接毒后给药、药物与病毒同时作用这3种方式处理细胞后药物对病毒的抑制率。结果发现,FNB对细胞的最大安全浓度为500μg/mL,因此,选择25~500μg/mL浓度范围的FNB进行后续试验。各浓度的FNB处理病毒后,能不同程度的抑制PRRSV在细胞上的增殖,并呈现一定的剂量效应关系,药物的浓度越高,抗病毒效果越好。其中,先接毒后给药、药物与病毒同时作用这两种方式抗PRRSV效果显著,在25~500μg/mL浓度范围内细胞存活率分别为21.55%~65.23%和24.85%~73.60%。而先给药后接毒,不能有效降低病毒的感染力,在药物最高剂量(500μg/mL)时细胞存活率仅为7.00%,抗病毒效果不明显。FNB预先作用于Marc-145细胞虽未降低PRRSV感染细胞的能力,即药物对于PRRSV预防作用效果不理想,但是FNB对病毒感染细胞后呈现一定的作用,药物能够通过抑制病毒的合成、释放及直接杀灭病毒,进而能够有效抑制PRRSV在细胞上的增殖。本试验结果不仅为FNB在临床上治疗猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)提供参考依据,而且可以为辣蓼的深度开发和利用提供理论依据。

辣蓼草总黄酮的超声提取工艺研究

目的研究辣蓼草中总黄酮的提取工艺及各部位的总黄酮含量。方法采用正交实验设计,以总黄酮为指标,对乙醇浓度、料液比、超声提取时间、提取温度4种因素进行研究。结果辣蓼草采用60%乙醇为溶剂,料液比为1∶50,超声提取时间为30 min,超声提取温度为45℃的提取条件效率较优;根、茎、叶、果实、全草中的总黄酮含量分别为:0.58%,0.76%,1.80%,3.28%和1.34%。结论工艺操作简便,重现性强,可用于提取辣蓼草中的总黄酮。

辣蓼黄酮对脂多糖诱导下RAW264.7细胞活性氧及炎性因子分泌的影响

采用酶解-超声偶联法提取辣蓼全草中的总黄酮,并经过萃取分离结合大孔树脂纯化富集获得辣蓼乙酸乙酯部分黄酮(FEA)与辣蓼正丁醇部分黄酮(FNB),并通过MTT法测定药物安全浓度。采用不同剂量的FEA与FNB作用于脂多糖(LPS)刺激所诱导的RAW264.7细胞炎症体外模型,测定细胞内活性氧(ROS)、一氧化氮(NO)及炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10水平。结果表明,FEA与FNB能明显减少LPS诱导的ROS释放量;不同浓度的FEA与FNB可以抑制LPS诱导的RAW264.7细胞分泌NO水平的升高。FEA与FNB均能减少LPS刺激所诱导的促炎因子TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8释放,FEA能促进抗炎因子IL-10的生成。说明一定浓度的FEA和FNB具有显著的抗炎效果,且其抗炎作用的产生可能与抗氧化途径有关。