辽细辛挥发油提取方法对比及其定性分析

采用水蒸气蒸馏法和超声辅助提取法对本溪桓仁县的辽细辛挥发油进行提取,通过气质联用(GC-MS)分析对所提取的挥发油进行定性分析。结果表明,两种方法所提取的挥发油性状、收率和成分略有差异,水蒸气蒸馏法提取的辽细辛挥发油为黄绿色,收率为2.2%,共鉴定出15种成分。超声辅助提取法提取的辽细辛挥发油为黄色,收率为2.8%,共鉴定出13种成分。两种方法提取的共有化学成分有甲基丁香酚、黄樟醚、肉桂醛、3,4,5-三甲氧基甲苯、1,2,3-三甲氧基-5-甲基苯、肉豆蔻醚、正十五烷、3,4-(亚甲基二氧)苯丙酮、卡枯醇等9种成分。

浅谈辽细辛栽培及初加工技术

通过对辽宁新宾县中药材辽细辛种植、初加工进行调查,提出中药材种植、产地加工的相关建议。

RP-HPLC法同时测定辽细辛中L-细辛脂素、L-芝麻脂素和卡枯醇

目的建立同时测定辽细辛中3种非挥发性成分的高效液相色谱方法,为该药材提供质量控制方法。方法以醋酸乙酯为溶剂,对辽细辛药材粉末进行超声提取;采用RP-HPLC法对辽细辛中的L-细辛脂素、L-芝麻脂素和卡枯醇进行同时定量测定。Diamonsil C18色谱柱(250mm×4.6mm,5μm),流动相为乙腈-水(50∶50);体积流量为1.0mL/min;检测波长为240nm;进样量为10μL;外标法定量。结果L-细辛脂素、L-芝麻脂素和卡枯醇分别在3.50～35.0μg/mL(r=0.9997),1.52～76.0μg/mL(r=0.9992)和0.38～7.60μg/mL(r=0.9999)呈良好线性关系,回收率分别为99.7%(RSD=2.7%)、96.7%(RSD=1.9%)和97.7%(RSD=1.5%)。结论该方法简便快速,结果准确,重现性好,可用于辽细辛药材的质量控制。

辽细辛地下部分的化学成分(Ⅱ)

目的对辽细辛地下部分进行化学成分研究。方法采用反复硅胶柱色谱法分离纯化,通过理化性质和谱学分析鉴定化合物结构。结果分离得到6个化合物,分别鉴定为马兜铃酰胺Ⅰ(aristololactamⅠ,1)、7-甲氧基马兜铃酰胺(7-methoxy-aristololactam,2)、马兜铃酸Ⅳa(aristolochicacidⅣa,3)、对羟基苯甲酸(p-hydroxybenzoic acid,4)、5,7-二-O-β-D-吡喃葡萄糖基柚皮素(5,7-di-O-β-D-glucpyranosyl-narigenin,5)、2,6-二甲氧基-4-甲基苯基-1-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(2,6-dime-thoxy-4-methylphenyl-1-O-β-D-glucopyranoside,6)。结论化合物4、6为细辛属内首次分离得到,化合物2、5为从该植物中首次分离得到。

HPLC法测定辽细辛不同药用部位马兜铃酸IVA的含量

目的建立辽细辛不同药用部位中马兜铃酸IVA的含量测定方法。方法采用HPLC法。色谱柱为Shiseido C18柱(250 mm×4.6 mm5,μm),流动相为甲醇-水-冰醋酸(体积比55∶44∶1),检测波长为252 nm,流速为1.0 mL.min-1。结果马兜铃酸IVA质量浓度在4.720～47.20 mg.L-1内线性关系良好(r=0.999 6,n=6),辽细辛根、根茎和叶中马兜铃酸IVA的平均回收率分别为99.6%9、9.4%9、8.9%(n=6),RSD均小于2.8%。结论方法简便、快速、准确,可为辽细辛不同部位的质量控制提供参考依据。

辽细辛精油对淡色库蚊的杀伤作用

采用浸渍法和三角瓶法,测定了辽细辛精油对淡色库蚊幼虫的毒杀作用,对蚊成虫的熏蒸、触杀作用。结果表明,辽细辛精油对淡色库蚊幼虫有较强的毒杀作用,24h的LC50为25.047mg/L,LC90为31.994mg/L;对成虫有较好的熏蒸作用,LC50和LC90分别为69.354mg/L和140.33mg/L,KT50和KT90分别为19.329min和52.848min。

辽细辛地下部分化学成分的分离与鉴定

目的对辽细辛地下部分进行化学成分研究。方法采用反复硅胶色谱法分离纯化,通过理化性质和NMR谱学数据鉴定其化学结构。结果从辽细辛地下部分分离得到7个化合物,分别鉴定为卡枯醇(kakuol,1)、2-甲氧基-4,5-亚甲二氧基苯丙酮(2-methoxy-4,5-methylene-dioxypropi-ophenone,2)、(-)-芝麻脂素((-)-sesamin,3)、(-)-细辛脂素((-)-asarinin,4)、pluviatilol(5)、5-羟甲基糠醛(5-hydroxymethylfurfural,6)、正丁基-吡喃果糖苷(n-butylfructopyranoside,7)。结论化合物6、7为首次从细辛属中分离得到,化合物2、5为首次从该植物中分离得到。

辽细辛根及根茎化学成分的分离与鉴定

目的研究辽细辛干燥根及根茎的化学成分。方法运用硅胶柱色谱、Sephadex LH-20柱色谱、制备HPLC等分离手段进行化学成分的分离纯化,并通过波谱分析技术鉴定其化学结构。结果从辽细辛根及根茎中分离得到16个化合物,分别鉴定为1-O-对香豆酰基-β-D-木糖基-(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖苷(1-O-p-coumaroyl-β-D-xylopyranosyl-(1→6)-β-D-glucopyraboside,1)、1-O-阿魏酰基-β-D-木糖基-(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖苷(1-O-feruloyl-β-D-xylopyranosyl-(1→6)-β-D-glucopyraboside,2)、4,2',4',6'-四羟基查耳酮-2',4'-二-O-β-D-吡喃葡萄糖(4,2',4',6'-tetrahydroxy-chalcone-2',4'-di-O-β-D-glucopyraboside,3)、柚皮素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(naringenin-7-O-β-D-glucopyranoside,4)、8-去甲氧基-马兜铃内酰胺N-β-D-吡喃葡萄糖苷(8-desmethoxy-aristolactam-N-β-Dglucopyranoside,5)、(R)-(+)-5-(2,3-二羟丙基)-1,3-亚甲二氧基苯((R)-(+)-5-(2,3-dihydroxypropyl)-1,3-benzodioxole,6)、3-甲基-6-羟基-8-甲氧基-3,4-二氢异香豆素(3-methyl-6-hydroxy-8-methoxy-3,4-dihydroisocoumarin,7)、(+)-7'-甲氧基落叶松树脂醇((+)-7'-methoxylariciresinol,8)、肉豆蔻醚(myristicin,9)、黄樟醚(safrole,10)、(-)细辛脂素((-)-asarinin,11)、5,7-二-O-β-D-吡喃葡萄糖基柚皮素(5,7-di-O-β-D-glucopy-ranosyl-2(S)-naringenin,12)、甲基丁香酚(methyleugenol,13)、卡枯醇(kakuol,14)、2-甲氧基-4,5-亚甲二氧基苯丙酮(2-methoxyl-4,5-methylene-dioxypropiophenone,15)和β-谷甾醇(β-sitosterol,16)。结论化合物6、7和8为首次从细辛属植物中分离得到,化合物3和5为首次从辽细辛植物中分离得到。

不同产地和采收期辽细辛挥发油的含量测定

目的对不同产地和采收期的辽细辛进行挥发油的含量测定,探讨其主要成分甲基丁香酚的含量。方法按《中华人民共和国药典》2000版一部附录XD挥发油测定法对11个产地和某产地五到十月采收的辽细辛进行了挥发油含量测定,用气相色谱法对甲基丁香酚进行了分析。结果黑龙江(Y8)和桓仁2号(Y10)的辽细辛中挥发油及甲基丁香酚的含量较高,质量较好。九月采收的辽细辛中挥发油和甲基丁香酚的含量均为最高,辽细辛的最佳采收期应为九月。结论应将挥发油含量高,主要有效成分甲基丁香酚含量高作为评价辽细辛药材质量和确定其最佳采收期的合理依据。

辽细辛地上部分化学成分的分离与鉴定

目的对辽细辛（Asarum heterotropides Fr Schmidt. var. mandshuricum（Maxim.）Kitag.）地上部分的化学成分进行研究。方法采用硅胶柱色谱等方法进行分离纯化，根据理化性质和NMR波谱数据进行结构鉴定。结果分离得到6个化合物，分别鉴定为（10bS） 8,9-dihydroxy-1,5,6,10b-tetrahydro-2H-pyrrolo[2,1-a]isoquinolin-3-one（1）、尼古丁酸（nicotinic acid，2）、5-羟甲基糠酸（5-hydroxymethyl-furoic acid ，3）、琥珀酸（succinic acid，4）、山奈酚（kaempferol，5）、山奈酚3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（kaempferol-3-O-β-D-glucopyranoside，6）。结论化合物1～3为首次从细辛属植物中分离得到，化合物5为首次从辽细辛中分离得到。

辽细辛挥发油化学成分的研究

本文报道了对辽细辛挥发油化学成分进行提取、分离和鉴定的结果。测得辽细辛挥发油的含量为2.5％;用GC/MS法鉴定了25种化合物;并用峰面积归一化法通过HP59970C化学工作站数据处理系统测得各化学成分在挥发油中的百分含量。

辽细辛地上部分化学成分的分离与鉴定(2)

目的对辽细辛[Asarum heterotropidesFr.Schmidt var.mandshuricum(Maxim.)Kitaga.]地上部分的化学成分进行研究。方法采用硅胶柱色谱等方法进行分离纯化,根据理化性质和NMR波谱数据进行结构鉴定。结果分离得到7个化合物,分别鉴定为(3S)7,8-dihydroxy-3-methyl-1H-2-Benzopyran-4(3H)-one(1)、5-oxymaltol(2)、吲哚-3-甲酸甲酯(1H-indole-3-carboxylic acid,methylester,3)、3,4-亚甲二氧基-苯甲酸(3,4-methylenedioxy-benzoic acid,4)、4-octenedioic acid,2,7-dim-ethyl(5)、槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(quercetin-3-O-β-D-glucopyranoside,6)、山柰酚-3,7-二-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(kaempferol-3,7-di-O-β-D-glucopyranoside,7)。结论化合物1-5为从细辛属植物中首次分离得到,化合物6、7为从该种植物首次中分离得到。

辽细辛提取物对拟盘多毛孢菌的离体抑制作用

采用生长速率法和孢子萌发法测定了辽细辛根的不同溶剂(石油醚、氯仿、乙酸乙酯、乙醇)粗提取物和精油对引起牡丹叶斑病的拟盘多毛孢菌菌丝生长和孢子萌发的作用。结果表明,细辛不同溶剂提取物和精油对拟盘多毛孢菌的菌丝生长和孢子萌发均有一定的抑制作用,且对孢子萌发的抑制效果好于对其菌丝生长的抑制效果;石油醚提取物和精油的抑菌效果较好,对菌丝生长的EC50分别为94.91 mg/L和120.44 mg/L,对孢子萌发的EC50分别为132.64 mg/L和110.66 mg/L。说明细辛所含的主要抑菌活性成分易被极性小的有机溶剂所提取,细辛精油中也含有抑菌活性物质。

辽细辛果实中马兜铃酸A的含量测定

目的比较辽细辛果实中不同部位和不同产地辽细辛果实与种子中马兜铃酸A的含量。方法采用HPLC法对辽细辛果实中不同部位和不同产地辽细辛种子进行马兜铃酸A的含量测定。结果辽细辛果实各部位以及各产地的辽细辛种子中均含有马兜铃酸A,辽细辛果实以种子中的马兜铃酸A含量最高,测定的各产地辽细辛种子以吉林省富江乡和清原县北三家乡产辽细辛种子中马兜铃酸A含量最低。结论辽细辛果实各部位中均含有马兜铃酸A,其中以种子中的含量为最高,不同产地的辽细辛种子中马兜铃酸A的含量不同。

超临界CO_2和微波辅助萃取辽细辛挥发油

通过超临界CO2萃取辽细辛挥发油均匀设计实验和微波诱导萃取的正交实验比较,考察了影响提取的主要因素,得到了最佳萃取工艺. 超临界CO2萃取最佳工艺条件为:压力16 MPa,温度32oC,CO2流量20 kg/h和时间80 min,得率为3.78%;微波萃取最佳工艺条件为:辐射功率720 W,辐射时间50 s,溶剂用量300 ml,洗涤溶剂用量30 ml,得率为5.46%. 水蒸馏法提取率为1.62%. 结果表明,超临界CO2和水蒸馏法萃取辽细辛挥发油品质最好;微波萃取收率最高,但品质较差.

HPLC法测定种子经处理后种植的辽细辛中马兜铃酸A的含量

目的比较不同种子处理方法对辽细辛中马兜铃酸A的含量的影响。方法采用不同方法对同一批辽细辛种子进行处理并种植,采收2年生不同月份的辽细辛植株进行马兜铃酸A的含量测定;采用Diamonsil(钻石)C18色谱柱(200 mm×4.6 mm,5μm),以0.05 mol.L-1磷酸二氢钠水溶液-乙腈(体积比为60∶40)为流动相,流速为1.0 mL.min-1,柱温为30℃,检测波长为390 nm,进样量为10μL,外标法计算含量。结果种植2年后的辽细辛药材各部位中均含有马兜铃酸A且地上部分含量明显高于地下部分,其含量逐渐减少,到8、9月份已趋于稳定。结论采用水超声处理辽细辛种子的方法可以除去细辛中的部分马兜铃酸,但不能完全除去,为细辛中的马兜铃酸的去除提供了参考依据。

不同产地辽细辛中马兜铃酸的痕量检测

目的:比较不同产地不同部位辽细辛中马兜铃酸的痕量。方法:采用高效液相色谱法对不同产地不同部位的辽细辛进行了痕量检查。结果:地上部分不含或较少含马兜铃酸,而地下部分大多含有马兜铃酸。结论:不同产地、不同药用部位的辽细辛中马兜铃酸的含量不同。

活体条件下辽细辛精油对灰葡萄孢菌细胞壁降解酶活性的影响

以辽细辛精油为材料,以黄瓜灰霉病菌即灰葡萄孢菌为靶标,在活体条件下,利用紫外可见分光光度计,采用比色法,研究了辽细辛精油对灰葡萄孢菌细胞壁降解酶活性的影响。结果表明:辽细辛精油对胞外PMTE酶、果胶总酶、胞外C1酶和蛋白酶表现为激活作用,对PMG酶和胞内C1酶则表现为先激活后抑制再激活作用,对胞内PMTE酶主要表现为抑制作用;对Cx酶表现为完全的抑制作用,且酶活抑制率与精油浓度成正比。说明Cx酶可能是辽细辛精油的作用位点之一,对Cx酶的抑制作用可能是辽细辛精油对灰葡萄孢菌的抑菌机制之一。

辽细辛精油对黄瓜灰霉病菌菌丝体细胞膜通透性的影响

以辽细辛精油为材料,以黄瓜灰霉病菌为靶标,采用干菌丝和鲜菌丝两种处理方法,测定了辽细辛精油对黄瓜灰霉病菌菌丝体电导率的影响,结果表明,无论是干菌丝还是鲜菌丝,精油处理后灰霉病菌菌丝体的电导率均随着精油处理浓度的加大而提高、随处理时间的延长而提高。说明辽细辛精油对黄瓜灰霉病菌菌丝体细胞膜的通透性具有一定影响,可引起细胞膜的伤害,造成膜功能的紊乱。结果还表明,采用鲜菌丝处理法、处理时间为12～24 h时,测定结果比较理想。该结果为进一步研究辽细辛精油的抑菌机理奠定了基础。

不同产地辽细辛质量比较

目的:比较不同产地中药材辽细辛的质量。方法:用水蒸气蒸馏法提取并测定挥发油的含量,GC-MS法测定挥发油中甲基丁香酚、黄樟醚和榄香脂素的相对含量,HPLC测定马兜铃酸A的含量,原子分光仪等测定药材中无机元素的含量,并用SPSS统计分析系统进行聚类分析。结果:化学试验测定与聚类分析的结果基本一致,5个产地的辽细辛药材聚为3类。结论:应把挥发性成分(挥发油总量、甲基丁香酚、榄香脂素)、有益的无机元素含量高,毒副作用成分黄樟醚、马兜铃酸A和重金属元素含量低作为评价中药材辽细辛质量的依据。将化学试验与聚类分析相结合,使结果分析更为快速、准确。