两种报告基因在达摩凤蝶细胞克隆株RIRI-PaDe-2-C6中的表达

[目的]前期研究中,项目组从达摩凤蝶细胞系RIRI-Pa De-2中分离培养出单细胞克隆株RIRI-Pa De-2-C6,通过感染野生型苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒(Ac MNPV)发现克隆株RIRI-Pa De-2-C6对病毒敏感性高于原细胞系RIRI-Pa De-2。本研究将对达摩凤蝶单细胞克隆株RIRI-Pa De-2-C6的生物学特性和外源蛋白表达特性进行研究,并与原细胞系RIRI-Pa De-2进行比较,评价其用于外源蛋白表达的可行性。[方法]使用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统构建重组β-半乳糖苷酶杆状病毒(Ac MNPV-Gal)和重组分泌型碱性磷酸酶杆状病毒(Ac MNPV-SEAP),分别侵染RIRI-Pa De-2和RIRI-Pa De-2-C6。在感染后的24、48、72、96、120、144、168 h检测2种重组蛋白的表达量,并对2个细胞系的形态学、生长曲线、倍增时间及核型进行分析和比较。[结果]表明:RIRI-Pa De-2和RIRI-Pa De-2-C6均可表达β-半乳糖苷酶(β-Gal)和分泌型碱性磷酸酶(SEAP),单细胞克隆株RIRI-Pa De-2-C6对重组β-Gal的表达水平显著高于原细胞系RIRI-Pa De-2(P<0.05),在接种Ac MNPV-Gal后96 h表达量达到最高。RIRI-Pa De-2-C6对重组SEAP的表达水平与RIRI-Pa De-2无显著差异(P>0.05)。显微观察发现,RIRI-Pa De-2-C6的细胞类型全部为梭形,比原细胞系RIRI-Pa De-2的细胞组成更加单一。RIRI-Pa De-2-C6的群体倍增时间为94.94 h,比原细胞系RIRI-Pa De-2的倍增时间(67.42 h)长。核型分析显示,RIRI-Pa De-2-C6的染色体数量呈正态分布,数目为21 82条,与RIRIPa De-2的染色体数目分布范围(48 97条)存在显著差异(P<0.05)。[结论]通过单细胞克隆方法获得的克隆株RIRI-Pa De-2-C6无论在外源蛋白表达以及基础生物学特性方面均有别于原细胞系RIRI-Pa De-2。