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迁移和侵袭抑制蛋白(MIIP)荧光素酶报告基因稳定共表达HCT116^(MIIP-Luc)结肠癌细胞系的建立
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作者 熊欣 颜广 +3 位作者 王秦豪 茹懿 严奉奇 李霞 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第2期136-140,共5页
目的建立迁移和侵袭抑制蛋白(MIIP)荧光素酶报告基因稳定过表达的结肠癌HCT116细胞系,为MIIP基因的在体功能研究提供细胞模型。方法将MIIP基因插入慢病毒载体p LEX-MCS-HA中获得重组慢病毒载体p LEX-MCS-HA-MIIP。利用该重组载体p LEX-M... 目的建立迁移和侵袭抑制蛋白(MIIP)荧光素酶报告基因稳定过表达的结肠癌HCT116细胞系,为MIIP基因的在体功能研究提供细胞模型。方法将MIIP基因插入慢病毒载体p LEX-MCS-HA中获得重组慢病毒载体p LEX-MCS-HA-MIIP。利用该重组载体p LEX-MCS-HA-MIIP及包装载体VSVG、△8.9,共转染HEK293T细胞,包装表达MIIP的慢病毒,将其感染HCT116细胞后,采用适宜浓度的嘌呤霉素筛选,建立MIIP稳定过表达的HCT116细胞。利用表达荧光素酶报告基因的慢病毒进行二次感染,建立MIIP和荧光素酶报告基因稳定共表达的HCT116MIIP-Luc细胞和仅表达荧光素酶报告基因的HCT116Luc细胞。利用实时荧光定量PCR检测MIIP的mRNA水平,Western blot法检测MIIP蛋白水平,小动物活体成像技术观察HCT116MIIP-Luc细胞和HCT116Luc细胞的荧光强弱。结果成功建立了MIIP荧光素酶报告基因稳定共表达的HCT116MIIP-Luc细胞和仅表达荧光素酶报告基因的HCT116Luc细胞,在HCT116MIIP-Luc细胞中实现了MIIP过表达,生物发光成像结果显示HCT116MIIP-Luc细胞和HCT116Luc细胞均可产生较强的荧光。结论分别建立了可传代的MIIP过表达及荧光素酶报告基因稳定共表达的结肠癌HCT116细胞株。 展开更多
关键词 结肠癌 迁移侵袭抑制蛋白(miip) 荧光素酶报告基因 慢病毒感染
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迁移侵袭抑制蛋白MIIP与肿瘤的研究进展
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作者 陈琴 黄守国 《海南医学》 CAS 2019年第2期259-264,共6页
迁移侵袭抑制蛋白(MIIP)基因是近年来新发现的一种抑癌基因,与多种人类肿瘤发生进展关系密切。它主要通过与胰岛素样生长因子结合蛋白2 (IGFBP2)、组蛋白去乙酰化酶6(HDAC6)结合调控肿瘤细胞的迁移、侵袭。本文主要围绕MIIP与肿瘤的关系... 迁移侵袭抑制蛋白(MIIP)基因是近年来新发现的一种抑癌基因,与多种人类肿瘤发生进展关系密切。它主要通过与胰岛素样生长因子结合蛋白2 (IGFBP2)、组蛋白去乙酰化酶6(HDAC6)结合调控肿瘤细胞的迁移、侵袭。本文主要围绕MIIP与肿瘤的关系,及其作用机制进行归纳总结。目的在全面了解MIIP对肿瘤影响的基础上,为抗肿瘤治疗提供新思路辅助临床治疗。 展开更多
关键词 迁移侵袭抑制蛋白 抑癌基因 肿瘤 迁移 侵袭
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Wnt蛋白生成抑制剂2对非小细胞肺癌细胞迁移与侵袭能力的影响 被引量:1
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作者 张静 滕宇 +2 位作者 赵晓婷 江妹 岳文涛 《癌变.畸变.突变》 CAS CSCD 2017年第4期245-250,共6页
目的:探讨Wnt蛋白生成抑制剂2(the inhibitor of Wnt production 2,IWP2)对非小细胞肺癌细胞迁移与侵袭能力的影响。方法:体外培养非小细胞肺癌H1299和95C细胞,分为对照组(无血清培养基)及实验组(应用10μmol/L IWP2处理24或48 h)。采... 目的:探讨Wnt蛋白生成抑制剂2(the inhibitor of Wnt production 2,IWP2)对非小细胞肺癌细胞迁移与侵袭能力的影响。方法:体外培养非小细胞肺癌H1299和95C细胞,分为对照组(无血清培养基)及实验组(应用10μmol/L IWP2处理24或48 h)。采用划痕实验和未铺Matrigel胶的Transwell迁移实验检测IWP2对细胞迁移能力的影响;铺有Matrigel胶的Transwell侵袭实验检测IWP2对细胞侵袭能力的影响;Western blot实验检测IWP2对非小细胞肺癌细胞中β-catenin及上皮间充质转化(EMT)相关蛋白ZEB1、Snail表达的影响。结果:划痕实验结果显示,经10μmol/L IWP2处理24 h后,与对照组比较,实验组H1299和95C细胞的划痕愈合面积均明显降低(P<0.01);在Transwell迁移实验中,实验组过膜细胞数明显降低(P<0.01);Transwell侵袭实验结果显示,实验组细胞表现出更低的侵袭能力(P<0.01)。Western blot结果表明,H1299和95C细胞在经IWP2作用后,与对照组比较,β-catenin的表达水平分别降低41.3%和36.1%(P均<0.01);IWP2也抑制了EMT相关蛋白ZEB1、Snail的表达,与对照组比较,实验组H1299和95C细胞中,ZEB1的表达水平分别降低51.8%和40.9%,Snail表达水平分别降低43.2%和30.7%,差异均具有统计学意义(P均<0.01)。结论:IWP2抑制β-catenin的表达并抑制非小细胞肺癌细胞发生EMT,从而降低细胞的迁移与侵袭能力。 展开更多
关键词 Wnt蛋白生成抑制剂2 非小细胞肺癌 迁移 侵袭 Β-CATENIN
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蟾毒灵通过基质金属蛋白酶抑制人结肠癌细胞HCT116的侵袭和迁移 被引量:1
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作者 董倩倩 张俊萍 《中医研究》 2020年第3期76-79,I0001,共5页
目的:研究蟾毒灵对人结肠癌细胞HCT116侵袭和迁移能力的作用并对其分子机制进行探讨。方法:将人结肠癌HCT116按对照组(野生型细胞)、蟾毒灵处理组(0.125,0.25,0.5,1,2μmol/L)和顺铂(DDP)组分组,采用CCK-8法检测蟾毒灵对人结肠癌细胞HCT... 目的:研究蟾毒灵对人结肠癌细胞HCT116侵袭和迁移能力的作用并对其分子机制进行探讨。方法:将人结肠癌HCT116按对照组(野生型细胞)、蟾毒灵处理组(0.125,0.25,0.5,1,2μmol/L)和顺铂(DDP)组分组,采用CCK-8法检测蟾毒灵对人结肠癌细胞HCT116增殖的抑制作用,采用细胞侵袭小室法(Transwell)法检测蟾毒灵对HCT116细胞侵袭和迁移能力的影响,采用蛋白质免疫印迹法(Western-blot)检测经蟾毒灵处理HCT116细胞24 h后基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinases-2,MMP-2)和基质金属蛋白酶抑制因子-2(tissue inhibitors of metalloproteinases-2,TIMP-2)的蛋白表达情况,采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测蟾毒灵处理的HCT116中MMP-2、TIMP-2的mRNA表达情况。结果:①CCK-8实验结果显示,蟾毒灵(0.125,0.25,0.5,1,2μmol/L)能显著抑制结肠癌细胞HCT116的增殖(P<0.05),并呈时间和剂量依赖性。②Transwell实验结果表明,与对照组对比,蟾毒灵(0.25,0.5,1μmol/L)对结肠癌细胞HCT116的侵袭和迁移能力具有不同程度的抑制作用(P<0.01)。③Western-blot实验结果表明,与对照组对比,蟾毒灵能够明显下调MMP-2,上调TIMP-2蛋白的表达水平,并呈一定的量效关系(P<0.01)。④RT-PCR结果显示,与对照组对比,蟾毒灵能够显著下调MMP-2 mRNA,并上调TIMP-2mRNA的表达。结论:蟾毒灵能明显抑制结肠癌细胞HCT116的侵袭和迁移,其机制可能与上调TIMP-2的表达,下调MMP-2的表达水平有关。 展开更多
关键词 蟾毒灵 结肠癌 侵袭 迁移 基质金属蛋白酶-2 基质金属蛋白抑制因子-2 实验研究
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迁移侵袭抑制蛋白对人脐静脉内皮细胞生物学行为的作用
5
作者 高玉婧 马锐 +3 位作者 芦晓红 徐荣荣 陈捷珲 裴秀英 《内科理论与实践》 2019年第6期371-375,共5页
目的:研究迁移侵袭抑制蛋白(migration and invasion inhibitory protein,MIIP)对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)增殖能力、迁移侵袭能力等生物学行为的影响。方法:采用瞬时转染的方式在HUVEC中过表达... 目的:研究迁移侵袭抑制蛋白(migration and invasion inhibitory protein,MIIP)对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)增殖能力、迁移侵袭能力等生物学行为的影响。方法:采用瞬时转染的方式在HUVEC中过表达MIIP,经蛋白质印迹(Western-blot)实验鉴定MIIP和VEGFR2的表达水平;采用5-乙炔基-2-脱氧尿苷(5-ethyny-2’-deoxyuridine,EdU)法检测MIIP对HUVEC增殖能力的影响,采用划痕愈合实验和穿透小室实验检测MIIP对HUVEC迁移侵袭能力的影响,采用小管形成实验检测HUVEC体外成管能力的变化,采用基质胶栓实验观察MIIP对HUVEC体内血管新生能力的影响。结果:通过瞬时转染可使MIIP在HUVEC中的表达上调2.8倍。与空载体转染的细胞相比,过表达MIIP的HUVEC的划痕愈合能力减弱;空载体转染组及MIIP过表达组的HUVEC在迁移实验中的穿膜细胞数分别为(350±24)个和(167±29)个(P<0.01),在侵袭实验中的穿膜细胞数分别为(434±12)个和(286±8)个。在体外小管形成实验中形成的小管数分别为(27±4)个和(13±2)个。EdU阳性标记的细胞比例在2组分别为63%±4%和61%±2%。基质胶栓实验显示,过表达MIIP后,HUVEC的体内血管新生能力下降。蛋白质印迹结果显示,MIIP能够下调HUVEC中血管内皮细胞生长因子受体2(vascular endothelial growth factor receptor 2,VEGFR2)的表达。结论:MIIP能够抑制HUVEC的迁移侵袭能力、体外成管能力及体内血管新生能力。 展开更多
关键词 迁移侵袭抑制蛋白 人脐静脉内皮细胞 血管新生 肿瘤
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PRMT7抑制前列腺癌细胞体外迁移和侵袭的研究
6
作者 胡平 何燕燕 +2 位作者 孙馨悦 王建军 陈平 《同济大学学报(医学版)》 CAS 2023年第2期166-172,共7页
目的 研究PRMT7对前列腺癌细胞迁移和侵袭的影响及机制探究。方法 使用R软件从TCGA和GTEx数据库中获得正常前列腺和前列腺癌组织中PRMT7的转录组数据。Western印迹法检测细胞中PRMT7的蛋白水平。通过细胞划痕实验、Transwell迁移实验和T... 目的 研究PRMT7对前列腺癌细胞迁移和侵袭的影响及机制探究。方法 使用R软件从TCGA和GTEx数据库中获得正常前列腺和前列腺癌组织中PRMT7的转录组数据。Western印迹法检测细胞中PRMT7的蛋白水平。通过细胞划痕实验、Transwell迁移实验和Transwell侵袭实验评估细胞的迁移和侵袭。使用转录组测序分析和无标记定量蛋白质测序分析评估转录物和蛋白质水平。使用siRNA技术敲低KISS1R的表达。结果 TCGA和GTEx数据库显示PRMT7在前列腺癌组织的表达低于正常前列腺组织。PRMT7在前列腺癌细胞系中表达低于正常前列腺上皮细胞。细胞划痕实验、Transwell迁移和Transwell侵袭实验结果表明,PRMT7抑制前列腺癌细胞LNCaP和PC3的迁移和侵袭。全基因组转录组、蛋白质组测序分析以及Western印迹法结果显示,转移抑制基因KISS1R在转录和翻译水平均被PRMT7上调,敲除KISS1R可拯救肿瘤抑制表型。结论 本研究揭示了PRMT7在前列腺癌细胞中的抗肿瘤作用,进一步证明了KISS1R是PRMT7调控肿瘤细胞迁移和侵袭的下游效应分子,PRMT7可能是临床治疗前列腺癌的有效靶点。 展开更多
关键词 前列腺癌 蛋白质精氨酸甲基转移酶7 迁移 侵袭 KiSS-1转移抑制受体
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组蛋白甲基转移酶NSD3对肾癌细胞增殖、侵袭及迁移的影响
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作者 韩勖 罗凤宝 马旭怡 《临床与病理杂志》 CAS 2023年第12期2063-2070,共8页
目的:组蛋白甲基转移酶——variegation,zeste增强子和trithorax域3的核受体抑制剂(nuclear receptor suppressor of variegation,enhancer of zeste,and trithorax domain-containing 3,NSD3)在肾癌中的生物学作用还不清楚。本研究旨... 目的:组蛋白甲基转移酶——variegation,zeste增强子和trithorax域3的核受体抑制剂(nuclear receptor suppressor of variegation,enhancer of zeste,and trithorax domain-containing 3,NSD3)在肾癌中的生物学作用还不清楚。本研究旨在探讨NSD3在肾癌组织和细胞中的表达,以及其对肾癌细胞增殖、侵袭及迁移的影响和潜在的分子机制。方法:下载高通量基因表达综合(Gene Expression Omnibus,GEO)数据库中的基因芯片数据,对其进行二次分析,比较NSD3 mRNA在正常肾组织与肾癌组织中的表达差异。采用实时聚合酶链反应和蛋白质印迹法检测NSD3在正常肾小管上皮HK-2细胞与肾癌786-O细胞中的表达以及NSD3小干扰RNAs(small interfering RNAs,siRNAs)在肾癌786-O细胞中的敲减效率。通过细胞计数试剂盒8(cell counting kit-8,CCK-8)实验、Transwell侵袭实验、Transwell迁移实验检测下调NSD3对肾癌786-O细胞增殖、侵袭及迁移的影响。通过蛋白质印迹法检测细胞外信号调节蛋白激酶1/2(extracellular signal-regulated protein kinases 1/2,ERK1/2)信号通路的激活、基质金属蛋白酶(matrix metallopeptidase,MMP)2和MMP9的表达水平。结果:与正常肾组织和细胞相比,NSD3在肾癌组织和细胞中的表达水平均升高(均P<0.05)。转染siRNAs下调NSD3表达能够减弱肾癌786-O细胞的增殖、侵袭与迁移能力(均P<0.05);同时抑制ERK1/2信号通路激活,并降低MMP2和MMP9蛋白表达(均P<0.05)。结论:NSD3可能通过调控ERK1/2信号通路促进肾癌细胞增殖、侵袭及迁移。 展开更多
关键词 蛋白甲基转移酶 variegation zeste增强子和trithorax域3的核受体抑制 肾癌 增殖 侵袭 迁移
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MIIP对膀胱癌T24细胞增殖和迁移侵袭能力的抑制作用及其机制 被引量:3
8
作者 严奉奇 王秦豪 +7 位作者 茹懿 马柳疆 陶光晶 张梅 张耀 药立波 李霞 武国军 《现代肿瘤医学》 CAS 2016年第7期1021-1025,共5页
目的:探讨迁移侵袭抑制蛋白(migration invasion inhibitory protein,MIIP)对膀胱癌T24细胞增殖和迁移侵袭能力的影响及作用机制。方法:设计并合成MIIP过表达质粒,并利用脂质体转染方法上调T24细胞系中MIIP的表达。Western blot及实时... 目的:探讨迁移侵袭抑制蛋白(migration invasion inhibitory protein,MIIP)对膀胱癌T24细胞增殖和迁移侵袭能力的影响及作用机制。方法:设计并合成MIIP过表达质粒,并利用脂质体转染方法上调T24细胞系中MIIP的表达。Western blot及实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测过表达MIIP的效果,四甲基偶氮唑蓝法(MTT)及平板克隆法观察MIIP过表达对T24细胞增殖能力的影响,划痕及Transwell实验检验MIIP过表达对T24细胞迁移侵袭能力的影响。Western blot及Real-time PCR检测过表达MIIP后其上皮间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)过程相关标志物钙黏蛋白E(E-cadherin)、钙连蛋白N(Ncadherin)、转录因子Snail蛋白和mRNA变化情况。结果:过表达质粒能有效上调T24细胞系中MIIP蛋白及mRNA的表达,上调MIIP表达后T24细胞增殖能力明显下降,克隆形成能力下降,迁移侵袭能力减弱;上调MIIP表达后E-cadherin表达增加,N-cadherin及转录因子Snail表达减少。结论:过表达MIIP可能通过降解转录因子Snail,从而抑制EMT进程降低膀胱癌T24细胞的增殖及迁移侵袭能力。 展开更多
关键词 膀胱癌 迁移侵袭抑制蛋白 上皮间充质转化 迁移侵袭
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迁移侵袭抑制蛋白在肾细胞癌及癌旁肾组织中的表达 被引量:1
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作者 陶光晶 严奉奇 +4 位作者 马柳疆 李霞 许秀丽 袁建林 武国军 《现代肿瘤医学》 CAS 2016年第4期600-603,共4页
目的:探讨迁移侵袭抑制蛋白(migration and invasion inhibitor protein,MIIP)在肾细胞癌及癌旁正常肾组织中的表达及临床意义。方法:收集临床确诊肾细胞癌病理组织84例,包含癌组织及癌旁正常肾组织,进行石蜡包埋切片和免疫组织化学SP... 目的:探讨迁移侵袭抑制蛋白(migration and invasion inhibitor protein,MIIP)在肾细胞癌及癌旁正常肾组织中的表达及临床意义。方法:收集临床确诊肾细胞癌病理组织84例,包含癌组织及癌旁正常肾组织,进行石蜡包埋切片和免疫组织化学SP法染色,观察分析MIIP在肾细胞癌及癌旁正常肾组织中的表达情况。结果:MIIP在肾细胞癌组织中的阳性表达率为30.95%,在癌旁正常肾组织中的阳性表达率为85.71%(P<0.05),差异具有统计学意义;肾细胞癌临床分期中MIIP阳性表达率分别为Ⅰ期54.55%,Ⅱ期40.54%和Ⅲ期13.89%,Ⅲ期分别与Ⅰ期、Ⅱ期相比较阳性表达率差异有统计学意义,Ⅰ期与Ⅱ期比较阳性表达率差异无统计学意义。结论:MIIP在肾细胞癌组织中的表达量较癌旁正常肾组织减少,其程度与肿瘤的恶性程度及侵袭迁移有关。 展开更多
关键词 迁移侵袭抑制蛋白 肾细胞癌 免疫组织化学 表达研究
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细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂2B反义RNA1靶向微小RNA-339-5p对乳腺癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响 被引量:1
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作者 陈倩倩 张英丽 +1 位作者 李阳 唐音 《安徽医药》 CAS 2022年第7期1390-1394,共5页
目的 探讨长链非编码RNA细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂2B反义RNA1(lncRNA CDKN2B-AS1)对乳腺癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响及分子机制。方法 收集南阳市中心医院2017年1月2019年1月收治的37例乳腺癌患者的癌组织及癌旁组织。将MDA-MB-45... 目的 探讨长链非编码RNA细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂2B反义RNA1(lncRNA CDKN2B-AS1)对乳腺癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响及分子机制。方法 收集南阳市中心医院2017年1月2019年1月收治的37例乳腺癌患者的癌组织及癌旁组织。将MDA-MB-453细胞分为CDKN2B-AS1阴性对照(si-NC组)、CDKN2B-AS1小分子干扰RNA(si-CDKN2B-AS1组)、CDKN2B-AS1小分子干扰RNA+miR-339-5p阴性对照(si-CDKN2B-AS1+anti-miR-NC组)以及CDKN2B-AS1小分子干扰RNA+miR-339-5p特异性寡核苷酸抑制剂(si-CDKN2B-AS1+anti-miR-339-5p组)。采用RT-qPCR法对CDKN2B-AS1及微小RNA-339-5p(miR-339-5p)表达水平进行检测;细胞周期及增殖活性检测分别采用流式细胞术及MTT实验;采用Transwell小室技术对细胞迁移和侵袭进行检测;采用Western blotting法对增殖标记蛋白细胞增殖核抗原-67(Ki67)、细胞周期依赖性蛋白激酶抑制因子1A(P21)、上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)、神经型钙黏蛋白(N-cadherin)蛋白表达进行检测;荧光素酶报告实验检测CDKN2BAS1对miR-339-5p的靶向调控。结果 在乳腺癌组织中CDKN2B-AS1表达水平上调[(2.23±0.08)比(1.00±0.06)](P<0.05)。抑制CDKN2B-AS1可增加G0期细胞比例[(43.29±3.76)%比(30.25±3.01)%]、P21表达水平升高,S期细胞比例[(21.91±3.10)%比(34.19±3.32)%]、细胞存活率[(53.02±5.38)%比(100.00±7.12)%]、迁移、侵袭数以及Ki67、E-cadherin、N-cadherin蛋白表达水平降低(P<0.05)。CDKN2B-AS1靶向调控miR-339-5p,抑制miR-339-5p逆转抑制CDKN2B-AS1对MDA-MB-453细胞增殖、迁移、侵袭的作用。结论 抑制CDKN2B-AS可抑制乳腺癌MDA-MB-453细胞增殖、迁移、侵袭,且靶向调控miR-339-5p表达。 展开更多
关键词 乳腺肿瘤 细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂2B反义RNA1 微小RNA-339-5p(miR-339-5p) 增殖 迁移 侵袭
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迁移侵袭抑制蛋白在肿瘤发生发展中的作用及其临床意义 被引量:4
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作者 王超 孙燕 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2018年第3期146-151,共6页
迁移侵袭抑制蛋白(migration and invasion inhibitory protein,MIIP)能够与胰岛素样生长因子结合蛋白2(insulin-like growth factor binding protein 2,IGFBP2)、组蛋白去乙酰化酶6(histone deacetylase 6,HDAC6)、p21活化激酶1、表皮... 迁移侵袭抑制蛋白(migration and invasion inhibitory protein,MIIP)能够与胰岛素样生长因子结合蛋白2(insulin-like growth factor binding protein 2,IGFBP2)、组蛋白去乙酰化酶6(histone deacetylase 6,HDAC6)、p21活化激酶1、表皮生长因子受体、细胞分裂周期20(cell division cycle 20,cdc20)、拓扑异构酶等相互作用,抑制细胞增殖和迁移侵袭,进而抑制多种肿瘤的发生发展。最近的研究显示,MIIP还与病毒感染、细胞免疫有关。鉴于MIIP的作用涉及到多条肿瘤相关的信号通路及肿瘤治疗靶点,MIIP逐渐成为研究的热点。本文主要围绕MIIP的分子特征、功能和在多种肿瘤中的临床意义及作用机制进行综述。 展开更多
关键词 迁移侵袭抑制蛋白 抑癌基因 有丝分裂 细胞迁移 基因组不稳定
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shRNA干扰半胱氨酸蛋白酶抑制剂C抑制非小细胞肺癌A549细胞侵袭和迁移
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作者 刘仕强 范丽丹 +1 位作者 汪华 陈旭 《肿瘤防治研究》 CAS CSCD 2018年第12期954-958,共5页
目的研究半胱氨酸蛋白酶抑制剂C(cystatin C, Cys C)表达对NSCLC A549细胞的生长、侵袭和转移的作用及其潜在的分子机制。方法采用短发夹RNA(sh-RNA)干扰沉默Cys C表达,构建sh-Cys C载体,并转染人肺腺癌A549细胞中,筛选sh-Cys C稳转子。... 目的研究半胱氨酸蛋白酶抑制剂C(cystatin C, Cys C)表达对NSCLC A549细胞的生长、侵袭和转移的作用及其潜在的分子机制。方法采用短发夹RNA(sh-RNA)干扰沉默Cys C表达,构建sh-Cys C载体,并转染人肺腺癌A549细胞中,筛选sh-Cys C稳转子。用CCK-8法检测细胞增殖;划痕实验检测细胞迁移;Transwell实验检测细胞侵袭。此外,还采用Western blot检测侵袭和迁移关键蛋白表达的变化。结果 shRNA干扰Cys C,明显下调Cys C的表达;与对照组相比,发现shRNA介导的Cys C沉默显著抑制A549细胞体外增殖、迁移和侵袭。此外,还发现Cys C的下调可以显著抑制基质金属蛋白酶(MMP9、MMP14)和血管内皮生长因子(VEGF)的表达。结论 shRNA干扰半胱氨酸蛋白酶抑制剂C,明显下调Cys C的表达,Cys C的下调可抑制非小细胞肺癌A549细胞的侵袭和迁移。 展开更多
关键词 半胱氨酸蛋白抑制 迁移 侵袭 非小细胞癌
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丝氨酸蛋白酶抑制剂在肿瘤细胞迁移中的作用 被引量:7
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作者 魏玲 程小艳 +4 位作者 李宝明 汪雨 高丽娟 王成彬 伦永志 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第12期1518-1523,共6页
肿瘤细胞的转移(Migration)与侵袭(Invasion)是恶性肿瘤扩散的关键步骤,在这一过程中,一种丝氨酸蛋白酶:尿激酶型纤溶酶原激活因子(uP A)能够对基质金属蛋白酶(MMPs)进行剪切进而诱导其活化。活化的MMPs能够水解细胞外基质(ECM)实现肿... 肿瘤细胞的转移(Migration)与侵袭(Invasion)是恶性肿瘤扩散的关键步骤,在这一过程中,一种丝氨酸蛋白酶:尿激酶型纤溶酶原激活因子(uP A)能够对基质金属蛋白酶(MMPs)进行剪切进而诱导其活化。活化的MMPs能够水解细胞外基质(ECM)实现肿瘤细胞的转移与侵袭作用。uP A是肿瘤细胞转移与侵袭的调控枢纽,发现和筛选其抑制剂在恶性肿瘤诊疗,特别是预防恶性肿瘤转移与复发中具有重要意义。人体内源性丝氨酸蛋白酶抑制剂Serpins具有明确的抑制恶性肿瘤相关丝氨酸蛋白酶的活性,是潜在的抗肿瘤治疗药物。为更好地研究与开发Serpins相关药物,本研究系统总结了人体内与恶性肿瘤转移及侵袭相关的7种Serpins的研究现状,并对最新的研究进展进行介绍。 展开更多
关键词 丝氨酸蛋白抑制 肿瘤细胞 迁移侵袭
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I2PP2A在神经母细胞瘤组织中的表达及其降表达后SH-SY5Y细胞迁移、侵袭能力观察
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作者 冯琼 傅品 +2 位作者 马俊铮 朱礼欧 李开济 《山东医药》 CAS 2023年第11期24-27,共4页
目的探讨蛋白磷酸酶2A抑制剂2(I2PP2A)在神经母细胞瘤组织中的表达变化及其降表达对SH-SY5Y细胞迁移和侵袭能力的影响。方法采用免疫组化法检测66例份神经母细胞瘤组织及配对的20例份癌旁正常组织中的I2PP2A蛋白表达,并分析不同临床病... 目的探讨蛋白磷酸酶2A抑制剂2(I2PP2A)在神经母细胞瘤组织中的表达变化及其降表达对SH-SY5Y细胞迁移和侵袭能力的影响。方法采用免疫组化法检测66例份神经母细胞瘤组织及配对的20例份癌旁正常组织中的I2PP2A蛋白表达,并分析不同临床病理参数患儿的I2PP2A蛋白表达情况。将对数生长期的人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y分为空白组(正常培养不转染)、阴性对照组(转染无义随机干扰序列质粒)、沉默组(转染I2PP2A的shRNA干扰质粒),采用Western blotting法检测三组细胞I2PP2A及基质金属蛋白酶2(MMP-2)蛋白表达,细胞划痕实验及Transwell侵袭实验分别观察细胞迁移和侵袭能力。结果神经母细胞瘤组织中I2PP2A高表达41例份(62.1%),癌旁组织为7例份(35.0%),二者比较P<0.05。不同性别、年龄、核分裂—核碎裂指数(MKI)及分化程度的神经母细胞瘤患儿癌组织I2PP2A蛋白高表达率比较均无统计学差异(P均>0.05);危险度为中危+高危的患儿癌组织I2PP2A高表达率高于低危患儿,临床分期为Ⅲ期+Ⅳ期的患儿癌组织I2PP2A高表达率高于Ⅰ期+Ⅱ期+4S期患儿(P均<0.05)。与空白组、阴性对照组比较,沉默组细胞I2PP2A、MMP-2蛋白相对表达量及划痕愈合率、穿膜细胞数均降低(P均<0.05),空白组、阴性对照组细胞上述指标比较均无统计学差异(P均>0.05)。结论神经母细胞瘤组织中I2PP2A蛋白呈高表达,并与患儿危险度和临床分期密切相关;降表达I2PP2A会减弱SH-SY5Y细胞的迁移和侵袭能力,其机制可能与调控MMP-2表达有关。 展开更多
关键词 蛋白磷酸酶2A抑制剂2 基质金属蛋白酶2 细胞迁移 细胞侵袭 神经母细胞瘤
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小分子干扰RNA沉默鸟嘌呤核苷酸解离抑制因子2基因表达对胰腺癌细胞迁移侵袭的影响
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作者 郭科 黄频 +2 位作者 王刚 张伯 刘秋华 《当代医学》 2022年第34期1-6,共6页
目的探讨小分子干扰RNA(siRNA)沉默鸟嘌呤核苷酸解离抑制因子2(RhoGDI2)基因表达对胰腺癌细胞迁移侵袭的影响。方法选取2016年1月至2019年12月于张家港市第一人民医院进行手术的60例患者的胰腺癌肿瘤组织标本作为研究对象。应用Western ... 目的探讨小分子干扰RNA(siRNA)沉默鸟嘌呤核苷酸解离抑制因子2(RhoGDI2)基因表达对胰腺癌细胞迁移侵袭的影响。方法选取2016年1月至2019年12月于张家港市第一人民医院进行手术的60例患者的胰腺癌肿瘤组织标本作为研究对象。应用Western blot检测RhoGDI2在人胰腺癌细胞株CFPAC-1、HPAF-Ⅱ、MIA PaCa-2、PANC-1、SW1990中的表达,利用siRNA沉默CFPAC-1细胞中RhoGDI2的表达,细胞划痕实验和Transwell实验检测细胞体外迁移能力和侵袭能力,Western blot检测P21蛋白激活激酶1(Pak1)表达情况,免疫组织化学染色检测胰腺癌组织标本中RhoGDI2和Pak1的表达情况。结果Western blot检测结果显示,RhoGDI2蛋白在胰腺癌细胞株中呈不同程度的表达水平,表达水平由高到低的细胞顺序依次为CFPAC-1、SW1990、PANC-1、HPAF-Ⅱ、MIA PaCa-2。WT、si-NC及si-RhoGDI2组细胞的RhoGDI2蛋白表达量分别为(1.25±0.09)、(1.19±0.11)、(0.38±0.07);转染si-RhoGDI2后RhoGDI2蛋白的表达显著下降,3组蛋白表达比较差异有统计学意义(P<0.05)。WT、si-NC及si-RhoGDI2组胰腺癌细胞的48 h划痕迁移率分别为(62.33±5.29)%、(62.27±3.37)%、(17.60±6.16)%,3组比较差异有统计学意义(P<0.05)。WT、si-NC及si-RhoGDI2组胰腺癌细胞的48 h划痕迁移率分别为(62.33±5.29)%、(62.27±3.37)%、(17.60±6.16)%,3组比较差异有统计学意义(P<0.05)。WT、si-NC及si-RhoGDI2组胰腺癌细胞穿膜细胞数分别为(132.3±10.3)、(120.7±16.5)、(24.3±9.5)个,3组比较差异有统计学意义(P<0.05)。WT、si-NC及si-RhoGDI2组细胞的Pak1蛋白表达量分别为(0.82±0.06)、(0.73±0.07)、(0.23±0.03),3组蛋白表达量比较差异有统计学意义(P<0.05)。免疫组织化学染色检测结果显示,RhoGDI2阳性47例,阳性率为78.3%,Pak1阳性45例,阳性率为75.0%。Spearman等级相关分析结果显示,RhoGDI2与Pak1的表达水平呈正相关(r>0,P<0.05)。结论沉默RhoGDI2基因表达能够抑制胰腺癌细胞的迁移和侵袭,RhoGDI2可能在胰腺癌发生发展过程中具有重要作用。 展开更多
关键词 胰腺癌 鸟嘌呤核苷酸解离抑制因子2 迁移 侵袭 P21蛋白激活激酶1
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CST1调节Notch信号通路对非小细胞肺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响 被引量:1
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作者 刘瑜 杨华清 +1 位作者 赵彬 杜丽 《临床肿瘤学杂志》 CAS 2023年第1期8-15,共8页
目的 探讨半胱氨酸蛋白酶抑制剂(CST1)调控Notch信号通路影响非小细胞肺癌(NSCLC)细胞增殖、迁移和侵袭生物学行为的潜在机制。方法 通过GEPIA分析癌症基因图谱(TCGA)数据库中NSCLC组织的CST1水平。采用实时荧光定量PCR(qPCR)检测NSCLC... 目的 探讨半胱氨酸蛋白酶抑制剂(CST1)调控Notch信号通路影响非小细胞肺癌(NSCLC)细胞增殖、迁移和侵袭生物学行为的潜在机制。方法 通过GEPIA分析癌症基因图谱(TCGA)数据库中NSCLC组织的CST1水平。采用实时荧光定量PCR(qPCR)检测NSCLC细胞的CST1水平。向A549细胞转染靶向CST1的小干扰RNA序列si-CST来评估CST1对A549细胞生物学行为的影响,后续在转染si-CST基础上给予Notch通路激活剂(VPA-d4)处理来评估CST1调控Notch信号通路对A549细胞生物学行为的影响,单独给予Notch通路抑制剂(IMR-1)处理来验证Notch信号通路对A549细胞生物学行为的促进作用。CCK-8、划痕实验和Transwell小室实验检测细胞增殖、迁移和侵袭情况。qPCR和Western blotting检测Notch1、发状分裂相关增强子1(Hes1)和基质金属蛋白酶9(MMP-9)的水平。结果 CST1在NSCLC组中的水平高于正常组织(P<0.05),且其在H1299、H460、H1975、SPC-A1、H1650和A549细胞中的水平高于BEAS-2B细胞(P<0.05)。A549细胞转染si-CST或经IMR-1处理后的增殖活力、划痕愈合率和穿膜数量较对照组细胞降低且伴有Notch1和Hes1的表达下调(P<0.05);A549细胞经si-CST和VPA-d4联合处理后的增殖活力、划痕愈合率和穿膜数量较单独转染si-CST的细胞增多且伴有Notch1、Hes1和MMP-9的表达上调(P<0.05)。结论 CST1在NSCLC组织和细胞中上调且可能通过激活Notch信号通路在NSCLC中发挥促癌作用,其有望成为NSCLC治疗的新型生物标志物和潜在治疗靶点。 展开更多
关键词 非小细胞肺癌 半胱氨酸蛋白抑制 增殖 侵袭迁移 NOTCH信号
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GPS2对肝癌细胞系MHCC-97H增殖、迁移与侵袭的调控作用 被引量:1
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作者 刘爱霞 张浩 +2 位作者 孙杰 杨丽华 赵晓涛 《基础医学与临床》 2023年第12期1784-1791,共8页
目的探索G蛋白通路抑制因子2(G protein pathway suppressor 2,GPS2)对肝癌细胞增殖、迁移与侵袭的调控作用及分子机制。方法在肝细胞癌(HCC)细胞系MHCC-97H中,使用定量PCR或Western blot检测HCC细胞中GPS2等的表达水平;在HCC细胞中进... 目的探索G蛋白通路抑制因子2(G protein pathway suppressor 2,GPS2)对肝癌细胞增殖、迁移与侵袭的调控作用及分子机制。方法在肝细胞癌(HCC)细胞系MHCC-97H中,使用定量PCR或Western blot检测HCC细胞中GPS2等的表达水平;在HCC细胞中进行转染,分别使用GPS2的表达载体、GPS2基因的shRNA慢病毒载体在HCC细胞中对GPS2进行过表达或者敲低;同时采用克隆形成实验、划痕实验以及Transwell实验等检测GPS2对HCC细胞增殖、迁移与侵袭的影响。结果在HCC细胞中,过表达GPS2能够抑制HCC细胞系MHCC-97H的增殖、迁移与侵袭,而敲低GPS2能够上调其增殖、迁移与侵袭(P<0.05)。进一步,在MHCC-97H细胞中过表达GPS2能够抑制EGFR、MMP1、MMP3以及MMP9等细胞增殖、迁移与侵袭相关因子的表达水平,而敲低GPS2的表达则能够上调这些因子的表达水平(P<0.05)。结论GPS2是新型HCC调控因子,能够抑制HCC细胞系的增殖、迁移与侵袭。 展开更多
关键词 肝细胞癌 G蛋白通路抑制因子2(GPS2) 细胞增殖 迁移侵袭
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EIF4A1在胃癌组织中表达及其抑制剂对人胃癌细胞株增殖、存活、侵袭、迁移能力影响观察 被引量:3
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作者 韦尉元 陈建思 +3 位作者 覃宇周 莫显伟 严林海 肖强 《山东医药》 CAS 2018年第39期9-12,共4页
目的观察真核翻译起始因子4A1(EIF4A1)在胃癌组织中的表达变化;另观察EIF4A1抑制剂(Silvestrol)对人胃癌细胞株SGC-7901增殖、存活、侵袭、迁移能力影响,并分析其可能机制。方法淋巴结转移阳性、阴性胃癌组织及匹配癌旁正常组织各20例份... 目的观察真核翻译起始因子4A1(EIF4A1)在胃癌组织中的表达变化;另观察EIF4A1抑制剂(Silvestrol)对人胃癌细胞株SGC-7901增殖、存活、侵袭、迁移能力影响,并分析其可能机制。方法淋巴结转移阳性、阴性胃癌组织及匹配癌旁正常组织各20例份,采用免疫组化法检测各组织EIF4A1。取对数生长期SGC-7901细胞并分为3组,药物组加含120μg/m L Silvestrol(在DMSO溶剂溶解)的细胞培养液100μL,模型组加含0. 5%DMSO的细胞培养液100μL,对照组加细胞培养液100μL; CCK-8法检测细胞增殖活性,CountessⅡFL细胞计数仪计数活细胞数,Transwell实验检测细胞侵袭能力,划痕实验检测细胞迁移能力,qRT-PCR法和Western blotting法分别检测EIF4A1和AKT mRNA、蛋白。结果与癌旁正常组织比较,淋巴结转移阳性胃癌组织中EIF4A1高表达例数多(P<0. 05)。各组OD值及活细胞数两两比较,P均> 0. 05;与模型组、对照组比较,药物组侵袭细胞数少,细胞迁移距离长,EIF4A1和AKT蛋白、mRNA表达降低(P均<0. 05)。结论淋巴结转移阳性胃癌组织中EIF4A1表达量高于癌旁正常组织; Silvestrol不影响SGC-7901细胞的增殖、存活能力,但可抑制细胞侵袭、迁移能力,其机制可能与Silvestrol调控AKT信号通路有关。 展开更多
关键词 真核翻译起始因子4A1 真核翻译起始因子4A1抑制 胃癌 胃肿瘤 细胞增殖能力 细胞侵袭能力 细胞迁移能力 蛋白激酶B
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MIIP对肾癌细胞增殖、侵袭及迁移能力的影响 被引量:1
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作者 陶光晶 严奉奇 +3 位作者 马柳疆 李霞 袁建林 武国军 《现代肿瘤医学》 CAS 2016年第20期3180-3184,共5页
目的:利用质粒转染技术制备过表达迁移侵袭抑制蛋白(migration and invasion inhibitory protein,MIIP)的肾癌786-0/MIIP细胞系,观察MIIP对细胞增殖、侵袭及迁移能力的影响。方法:构建携带MIIP基因的质粒,通过脂质体质粒转染技术上调肾... 目的:利用质粒转染技术制备过表达迁移侵袭抑制蛋白(migration and invasion inhibitory protein,MIIP)的肾癌786-0/MIIP细胞系,观察MIIP对细胞增殖、侵袭及迁移能力的影响。方法:构建携带MIIP基因的质粒,通过脂质体质粒转染技术上调肾癌786-0细胞系MIIP基因表达。Western-blot、Real-time PCR检测转染效果;利用MTT实验检测MIIP对786-0细胞增殖能力的影响;Transwell实验、划痕实验检测MIIP对786-0细胞侵袭、迁移能力的影响。结果:Western-blot、Real-time PCR检测发现实验组786-0/MIIP细胞MIIP蛋白及mRNA表达量有效上调。MTT实验显示实验组786-0/MIIP细胞增殖能力明显减弱(P<0.01)。Transwell实验显示实验组786-0/MIIP细胞侵袭能力减弱,穿透小室细胞数明显减少(P<0.01)。细胞划痕实验显示实验组786-0/MIIP细胞迁移能力显著下降(P<0.01)。结论:通过质粒转染技术能够制备过表达MIIP的肾癌细胞系。转染成功的肾癌786-0/MIIP细胞系MIIP表达量增加,有效抑制了肾癌细胞的增殖、侵袭与迁移。 展开更多
关键词 迁移侵袭抑制蛋白 肾癌细胞 增殖 侵袭 迁移
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免疫抑制剂FK506对结直肠癌细胞增殖、侵袭、迁移能力的影响及作用机制研究 被引量:1
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作者 姜海波 李卫 +1 位作者 姜霞 裴永彬 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第20期2488-2493,共6页
目的:探讨免疫抑制剂FK506对结直肠癌细胞增殖、侵袭、迁移能力的影响及作用机制。方法:用不同浓度FK506(0、10、50、100、200、400μg/L)处理HCT116和SW480细胞,采用MTT测定其对肿瘤细胞的增殖抑制率。将HCT116和SW480细胞分为对照组(0... 目的:探讨免疫抑制剂FK506对结直肠癌细胞增殖、侵袭、迁移能力的影响及作用机制。方法:用不同浓度FK506(0、10、50、100、200、400μg/L)处理HCT116和SW480细胞,采用MTT测定其对肿瘤细胞的增殖抑制率。将HCT116和SW480细胞分为对照组(0μg/L FK506处理)、FK506组1(100μg/L FK506处理)和FK506组2(200μg/L FK506处理),采用流式细胞测定细胞周期,采用Transwell小室测定细胞侵袭、迁移能力,采用Western blot测定细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、基质金属蛋白酶2(MMP2)、MMP9蛋白水平。结果:HCT116和SW480细胞经不同浓度FK506处理后24 h,与对照组比较,FK506浓度≤50μg/L时对HCT116和SW480细胞增殖的抑制作用不明显(P>0.05),FK506浓度>50μg/L时对HCT116和SW480细胞增殖的抑制作用明显增加(P<0.05),且呈现剂量依赖性。与对照组比较,FK506组1和FK506组2 HCT116和SW480细胞G0/G1期升高(P<0.05),HCT116和SW480细胞G2/M期降低(P<0.05),侵袭细胞数和迁移细胞数减少(P<0.05),Cyclin D1、MMP2、MMP9蛋白水平降低(P<0.05);与FK506组1比较,FK506组2 HCT116和SW480细胞G0/G1期升高(P<0.05),HCT116和SW480细胞G2/M期降低(P<0.05),侵袭细胞数和迁移细胞数减少(P<0.05),Cyclin D1、MMP2、MMP9蛋白水平降低(P<0.05)。结论:免疫抑制剂FK506对结直肠癌细胞增殖、侵袭、迁移能力有抑制作用,且呈剂量依赖性,其机制可能与抑制Cyclin D1、MMP2、MMP9的表达有关。 展开更多
关键词 免疫抑制 FK506 结直肠癌 增殖 侵袭 迁移 细胞周期蛋白D1 基质金属蛋白酶2 基质金属蛋白酶9
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