大豆球蛋白G5A3亚基加工破坏表位的初步定位

大豆球蛋白是重要的大豆过敏原,为探究大豆球蛋白G5亚基中A3酸性多肽链的破坏表位,对A3亚基的基因进行重叠分段并设计合成引物、构建克隆载体后进行双酶切,与T7 vector arms连接构建重组噬菌体并表达目的蛋白;制作热处理及超高压联合热处理破坏抗原表位的特异性抗体,用间接竞争ELISA法检测不同肽段的抗原性高低及加工破坏表位。结果表明,A3链与其3个分段基因的长度分别为:960、420、450、450 bp,与预期片段大小相符;经间接竞争ELISA法检测后,片段1抗原性最高,通过阴性对照,超高压联合热处理对该亚基的破坏效果优于单独热处理试验,其中对片段1的破坏效果最好。因此,超高压联合热处理的方法对蛋白抗原性破坏效果显著,且对片段1破坏最强。