过敏毒素C3a及白细胞介素-32在慢性阻塞性肺疾病气道炎症中的作用

目的探讨过敏毒素C3a及白细胞介素-32(IL-32)在慢性阻塞性肺疾病(COPD)气道炎症中的作用。方法纳入COPD稳定期患者30例,COPD急性加重期(AECOPD)患者30例,健康对照者10例。收集受试者痰液及静脉血,应用实时荧光定量逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测痰细胞裂解液及静脉血细胞裂解液中C3和IL-32 mRNA的表达,应用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测痰上清液及静脉血清中C3a和IL-32蛋白的表达,分析C3a与IL-32、IL-32与COPD患者肺功能损伤的相关性。结果 AECOPD患者痰细胞裂解液及静脉血细胞裂解液中C3和IL-32 mRNA水平显著升高,痰上清液及静脉血清中C3a和IL-32蛋白水平显著升高。AECOPD患者静脉血清中IL-32蛋白浓度与C3a蛋白浓度呈显著正相关,IL-32蛋白浓度与1 s用力呼气容积(FEV1)占预计值百分比(FEV1%预计值)及FEV1/用力肺活量(FVC)呈显著负相关。结论 C3a通过诱导IL-32促进COPD气道炎症,加重肺功能损害,这将为COPD的诊断和治疗提供有效的靶位。

过敏毒素C3a在健康人气道上皮间质转化中的作用研究

目的观察过敏毒素C3a在正常人气道上皮间质转化(EMT)中的作用及其相关分子机制。方法培养正常人气道上皮细胞BEAS-2B,分为对照组,重组人(rhC3a)刺激组,rhC3a+C3a受体拮抗剂(C3aRA)的拮抗组,通过显微镜观察细胞形态学变化情况;四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖能力;ELISA检测细胞上清液中转化生长因子-β1(TGF-β1)的蛋白表达情况;RT-PCR检测C3a受体(C3aR)和EMT相关指标mRNA变化情况;Western blot检测C3aR、Smad2/3、p38-MAPK蛋白表达情况。结果 30、50nmol/L rhC3a刺激组细胞形态由正常鹅卵石样变为梭形,加入1μmol/L C3aRA拮抗组细胞形态较对照组比较无明显改变。50nmol/L rhC3a刺激组的细胞增殖较对照组降低(P=0.047);30nmol/L rhC3a刺激组中TGF-β1蛋白水平较对照组升高(P<0.05),C3aR mRNA及蛋白水平较对照组均升高(P<0.05),p-Smad2/3、p-p38-MAPK蛋白水平较对照组升高(P<0.05),加入1μmol/L C3aRA可以降低以上指标表达(P<0.05)。30nmol/L rhC3a刺激组中α-平滑肌肌动蛋白、N-钙黏蛋白mRNA表达上调,E-钙黏蛋白mRNA表达下降,加入1μmol/L C3aRA可以拮抗这一过程(P<0.05)。结论过敏毒素C3a通过结合C3aR,诱导正常人气道上皮细胞发生EMT,其机制可能是通过激活Smad2/3、p38-MAPK通路来参与。

过敏毒素受体(C3aR)在db/db糖尿病肾病小鼠肾脏中的表达及病理意义分析

利用半定量RT-PCR、免疫组化和Western blotting的方法,同时从mRNA水平和蛋白质水平对过敏毒素受体(C3aR)在不同病理阶段的2型糖尿病肾病模型小鼠——db/db小鼠肾脏中的表达情况进行了较为系统的分析.结果发现:a.在糖尿病前的db/db小鼠(4周龄的db/db小鼠),C3aR与作为正常对照的db/m小鼠相比没有明显差异.随着肥胖的加剧,高血糖、蛋白尿的发生和发展,C3aR在db/db小鼠肾脏中的表达显著升高.b.免疫组化分析显示,C3aR广泛地表达于db/m和db/db小鼠肾脏的皮质和髓质,分布于肾脏的上皮细胞中(包括肾小管上皮细胞、肾小球中的脏层上皮细胞(足细胞)和壁层上皮细胞).从部位来看,皮髓交界处的肾小管中C3aR表达量明显要比其他部位的多.在肾小球,C3aR特异地存在于足细胞部位.在db/m小鼠,不同周龄小鼠肾脏中C3aR的表达量并没有明显变化,但在db/db小鼠,从8周龄开始,分布在db/db小鼠肾小管上皮细胞和小球足细胞中的C3aR均随小鼠周龄的增加而增加,至少在时间上,与小鼠糖尿病肾病的发生发展相关,其中尤以足细胞中和皮髓交界处肾小管上皮细胞中的变化最为明显.c.在糖尿病肾病小鼠中高表达C3aR的肾小管上皮细胞常有空泡变性的情况.上述工作印证了先前对2型糖尿病肾病患者肾小球基因表达谱的分析结果,更加明确了C3aR与糖尿病肾病的相关性,同时揭示了C3aR在正常小鼠和糖尿病肾病小鼠肾脏中的表达、分布和变化规律,有利于进一步揭示C3aR的功能及其在糖尿病肾病发生、发展过程中的可能作用,探讨糖尿病肾病的分子机制。

血液净化材料在体外静态接触血浆时血浆中C3a des Arg生成的研究

用放射免疫分析法研究了五种血液净化材料 :磺化聚醚砜 ,聚醚砜 ,聚砜 ,聚甲基丙烯酸甲酯和醋酸纤维素与人血浆在 37℃温育 30、6 0、90、12 0min后 ,血浆中补体C3激活产物C3adesArg的生成情况。结果发现 :醋酸纤维素、聚甲基丙烯酸甲酯、聚醚砜、聚砜在与血浆温育后 ,血浆中C3adesArg的浓度依次降低 ;以醋酸纤维素激活补体C3的情况最严重 ;磺化聚醚砜的最低 ,并且磺化度越大 ,C3adesArg的浓度越小。说明聚醚砜材料作为血液净化材料有较优异的补体相容性 ,并且通过磺化可大大提高聚醚砜的补体相容性。放免分析法检测材料激活补体C3是一种方便可靠的检测手段 ,可作为开发生物材料时对有应用前景的生物材料的筛选和评价。

香烟烟雾提取物诱导呼吸道上皮细胞间质性转化的实验研究

目的探讨香烟烟雾提取物(CSE)在呼吸道上皮细胞间质性转化(EMT)中的作用,为进一步研究香烟烟雾提取物在慢性阻塞性肺疾病(COPD)气道重构发生机制提供新的线索。方法用不同浓度(0%、0.5%、1.0%、2.5%、5.0%,其中浓度0作为对照组)的CSE刺激呼吸道上皮细胞BEAS-2B72h,逆转录PCR检测E钙粘蛋白(E-cad)、N钙粘蛋白(N-cad)mRNA表达情况,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞培养上清液中TGF-β1浓度;用2.5%CSE刺激BEAS-2B细胞不同时长(0、12、24、48h,其中时间0h作为对照),倒置显微镜下观察细胞形态变化,逆转录PCR检测E-cad、N-cad、补体C3mRNA表达情况,ELISA法检测细胞培养上清液中TGF-β1、过敏毒素C3a浓度。结果在不同浓度的CSE刺激BEAS-2B细胞72h后,CSE各浓度刺激组较对照组E-cad mRNA表达下调,N-cad mRNA表达增加,且呈浓度依赖性(P<0.05);ELISA法检测细胞培养上清液中TGF-β1水平,CSE各浓度刺激组较对照组增加(P<0.05);2.5%CSE在不同时间点作用BEAS-2B细胞,刺激组细胞呈梭形改变,CSE各时间段刺激组较对照组E-cad mRNA表达减少,补体C3、N-cad mRNA表达增加,且呈时间依赖性(P<0.05),CSE各时间段刺激组细胞培养上清液中TGF-β1、C3a水平较对照组增加(P<0.05)。结论 CSE可诱导正常的呼吸道上皮细胞BEAS-2B发生EMT,补体C3激活可能参与此过程。