GLS1通过激活Nrf2/HO-1轴抑制过氧化氢诱导的ARPE-19细胞氧化应激、自噬与凋亡

目的探究GLS1对过氧化氢诱导的ARPE-19细胞氧化应激、自噬与凋亡的影响及机制。方法ARPE-19细胞分为对照组、H_(2)O_(2)组、H_(2)O_(2)+Vector组、H_(2)O_(2)+GLS1组,对照组细胞不做任何处理,H_(2)O_(2)组细胞用200μmol/L H_(2)O_(2)诱导48h,H_(2)O_(2)+Vector组和H_(2)O_(2)+GLS1组细胞转染Vector和GLS1质粒后用200μmol/L H_(2)O_(2)诱导48 h,比色法测定各组细胞SOD、GSH和MDA浓度,透射电镜观察各组细胞自噬小体,流式细胞术检测各组细胞凋亡水平,Western blot检测各组细胞Nrf2、HO-1、LC3-Ⅱ、p62的表达。结果与对照组比较,H_(2)O_(2)组ARPE-19细胞SOD、GSH表达显著下降,MDA显著增加,自噬小体数目显著增加,细胞凋亡显著增加,LC3-Ⅱ表达显著上调,P62、抗核因子红系2相关因子2(nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2)、血红素氧合酶1(heme Oxygenase-1,HO-1)表达显著下调。与H_(2)O_(2)+Vector组比较,H_(2)O_(2)+GLS1组细胞SOD、GSH表达显著增加,MDA显著降低,自噬小体数目显著减少,细胞凋亡显著减少,LC3-Ⅱ表达显著下调,P62、Nrf2、HO-1表达显著上调。结论GLS1可抑制H_(2)O_(2)诱导的ARPE-19细胞氧化应激、自噬与凋亡,其机制为激活Nrf2/HO-1信号通路。

基于AMPK/mTOR通路探讨注射用益气复脉对TBHP诱导H9c2细胞损伤的保护作用

目的:探讨注射用益气复脉(YQFM)通过AMPK/mTOR信号通路调控自噬减轻叔丁基过氧化氢(TBHP)所致H9c2心肌细胞损伤的机制。方法:体外培养H9c2心肌细胞,分为正常对照组、TBHP组、TBHP+YQFM组。CCK-8法检测各组H9c2心肌细胞存活率;免疫荧光检测细胞自噬情况;免疫印迹法检测各组细胞自噬相关蛋白LC3Ⅱ/LC3Ⅰ及AMPK/mTOR通路相关蛋白表达。结果:用2、4、8、16 g/L的YQFM预处理后,可显著恢复TBHP诱导的H9c2细胞损伤;免疫荧光染色结果显示,与正常对照组相比,TBHP组细胞LC3荧光强度显著升高(P<0.01);与TBHP组相比,TBHP+YQFM组LC3荧光强度降低,其中2 g/L YQFM组具有显著性(P<0.05)。Western blot检测结果显示:TBHP组p-AMPK/AMPK、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ表达显著增加,p-mTOR/mTOR比率显著降低;YQFM预处理使自噬相关蛋白p-AMPK/AMPK、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比率明显降低,4 g/L YQFM组p-mTOR/mTOR比率明显升高。结论:注射用益气复脉能有效拮抗TBHP引起的H9c2细胞损伤,其机制与通过AMPK/mTOR信号通路调控自噬途径有关。

冷藏期家蚕滞育卵和即时浸酸卵的H_2O_2含量及过氧化氢酶基因表达的变化

将产下后48h的家蚕滞育卵和即时浸酸卵进行低温(5℃)冷藏处理30d以上,滞育卵孵化率显著上升,而即时浸酸卵孵化率显著下降。为了探讨低温处理对滞育卵和即时浸酸卵的孵化产生不同影响的分子机制,测定了冷藏期间2种卵中的H2O2含量、过氧化氢酶(CAT)基因mRNA转录水平和CAT活性变化。结果表明:2种卵在冷藏期间随着卵中的H2O2含量显著增加,CAT基因mRNA转录水平也上调;虽然冷藏后的10～70d,2种卵中的H2O2含量、CAT基因mRNA转录水平及CAT活性都显著上升,但滞育卵的H2O2含量仍显著高于即时浸酸卵,而CAT基因mRNA转录水平和CAT活性则显著低于即时浸酸卵。即时浸酸卵在冷藏过程中H2O2含量显著增加,可能造成了对胚胎的氧化伤害,从而降低其孵化率。然而,滞育卵在冷藏过程中的CAT基因mRNA转录水平及CAT活性相对较低,H2O2相对较高,胚胎却未受到氧化伤害,推测低温处理可能诱导了滞育卵中其它抗氧化反应。

靶向TLR4的siRNA慢病毒感染减少过氧化氢诱导的心肌H9C2细胞凋亡及氧化损伤

目的:研究沉默TLR4对过氧化氢(H_2O_2)诱导的心肌H9C2细胞凋亡及氧化损伤的影响。方法:用H_2O_2处理心肌H9C2细胞,qRT-PCR和Western blot检测细胞中Toll样受体4(TLR4) mRNA和蛋白水平。用siRNA TLR4慢病毒感染心肌H9C2细胞,H_2O_2诱导以后,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测细胞中凋亡蛋白Bcl-2相关X蛋白(Bax)和剪切型Caspase-3(Cleaved Caspase-3)水平,硫代巴比妥酸法检测细胞中丙二醛(MDA)水平,黄嘌呤氧化法检测细胞中超氧化物歧化酶(SOD)活性,二硝基苯肼显色法检测上清中乳酸脱氢酶(LDH)含量,二氯二氢荧光素-乙酰乙酸酯(DCFH-DA)法检测活性氧(ROS)水平,ELISA法检测培养液上清中TNF-α、IL-6水平。结果:H_2O_2诱导处理以后的心肌H9C2细胞中TLR4mRNA和蛋白水平均明显高于未经诱导的心肌H9C2细胞(P<0. 05)。siRNA TLR4慢病毒感染后可以降低心肌H9C2细胞中TLR4 mRNA和蛋白水平。H_2O_2诱导后的心肌H9C2细胞凋亡率升高,Bax和Cleaved Caspase-3蛋白水平升高,细胞中SOD活性降低,MDA水平升高,ROS水平也升高,同时细胞培养液中LDH水平升高,细胞分泌的TNF-α、IL-6增多,与未经诱导的心肌H9C2细胞比较,差异有统计学意义(P<0. 05)。敲低TLR4后的心肌H9C2细胞经H_2O_2诱导处理以后,细胞凋亡率降低,细胞中Bax和Cleaved Caspase-3蛋白水平降低,细胞中SOD活性升高,MDA水平降低,ROS水平也降低,同时细胞培养液中LDH水平降低,细胞分泌的TNF-α、IL-6减少,与单纯经H_2O_2诱导处理的心肌H9C2细胞比较,差异有统计学意义(P<0. 05)。结论:沉默TLR4减弱H_2O_2诱导的心肌H9C2细胞凋亡及氧化损伤,减少细胞中ROS的聚集,减少心肌H9C2细胞分泌炎症因子。

钛盐光度法测定O_3/H_2O_2高级氧化系统中的过氧化氢

采用钛盐光度法测定O3/H2O2系统中的/H2O2,考察了pH值、O3/H2O2摩尔比、钛盐用量和显色时间的影响,确定了最佳的测定条件;通过加标回收率实验和对比实验,证明了该方法的可靠性。结果表明,pH值为3.0、λ=385nm、草酸钛钾浓度2.5mmol.L-1和显色时间8min条件下,H2O2浓度0~45mg.L-1范围内与吸光度线性关系良好,且O3/H2O2的摩尔比对H2O2的测定无影响;对纯水＋H2O2＋O3和纯水＋H2O2体系中投加阿特拉津,H2O2加标回收率均在95%~105%以内;钛盐法和高锰酸钾法测定纯水体系中H2O2结果基本一致,而O3/H2O2体系中高锰酸钾法测定值偏高,说明钛盐法可以用于测定O3/H2O2高级氧化体系中的H2O2浓度的变化。

SiW_(11)O_(39)Fe(Ⅲ)(H_2O)^(5-)的电化学性质及电催化还原过氧化氢

用循环伏安和交流阻抗等方法详细研究了SiW11O39Fe(Ⅲ)(H2O)5-(SiW11Fe)的电化学性质和对H2O2还原的间接电催化作用,并与PW11O39Fe(Ⅲ)(H2O)4-(PW11Fe)进行了比较,同时提出了电催化反应的机理。实验结果表明,与PW11Fe类似,SiW11Fe在酸性水溶液中也有3对还原氧化伏安响应,分别归属于Fe(Ⅲ)/Fe(Ⅱ)电对和W-O骨架的还原氧化反应。但SiW11Fe的3对还原氧化波的峰电位与PW11Fe相比明显负移,且均受溶液pH的影响。SiW11Fe中Fe(Ⅲ)/Fe(Ⅱ)电对传递电子的可逆性比PW11Fe的差,但同样对H2O2的还原具有明显的电催化作用,并受溶液pH的影响。随着溶液pH的增加,Fe波和W-O骨架波的还原氧化峰电位均负移,Fe波对H2O2还原的电催化活性降低甚至被完全抑制,相反,第一个W-O骨架波对H2O2的还原却有明显的电催化作用。

金银花提取物对脂多糖诱导H9c2心肌细胞的炎症、氧化损伤和凋亡的作用机制

本研究旨在探究金银花提取物对脂多糖诱导下H9c2心肌细胞炎症、氧化损伤和凋亡的作用机制。方法 使用H9c2心肌细胞作为研究对象,分为对照组、脂多糖诱导组和金银花提取物处理组。然后通过对炎症相关因子表达水平、氧化损伤标志物和凋亡相关因子表达水平的检测结果对细胞的炎症反应、氧化损伤和凋亡情况进行进一步的评估。结果 与脂多糖诱导组相比,金银花提取物处理组显示出明显的抑制炎症反应、减轻氧化损伤和凋亡的作用。金银花提取物处理组中炎症相关因子表达水平显著降低,氧化损伤标志物水平较低,并且凋亡相关因子表达水平明显减少。结论 金银花提取物对脂多糖诱导的H9c2心肌细胞具有抗炎、抗氧化和抗凋亡的作用。通过研究结果可以得出,金银花提取物可能成为预防和治疗心肌细胞炎症、氧化损伤以及凋亡相关疾病的潜在药物。

清心开窍方含药脑脊液对过氧化氢(H_2O_2)所致PC12细胞损伤的保护作用

目的:从细胞水平研究清心开窍方含药脑脊液对过氧化氢(H2O2)损伤的PC12细胞的保护作用,为该方剂的临床应用提供依据。方法:SD大鼠灌胃给予清心开窍方水煎液(7.9 g.kg-1),每日2次,连续3.5 d,制备清心开窍方含药脑脊液。采用PC12细胞和终浓度200μmol.L-1的过氧化氢共培养,造成神经细胞损伤模型。RT-PCR方法检测Bax mRNA、Bcl-2 mRNA、Caspase-3 mRNA表达水平,MTT法检测清心开窍方含药脑脊液对PC12细胞活性的影响。结果:清心开窍方含药脑脊液组PC12细胞活性明显高于模型组,清心开窍方含药脑脊液组PC12细胞活性明显高于模型组,Bax mRNA、Caspase-3 mRNA表达水平降低,Bcl-2 mRNA表达增高,与模型组比较,差异显著(P<0.05～0.01)。结论:清心开窍方对H2O2损伤的PC12细胞有明显的保护作用。

过氧化氢诱导PC12细胞损伤的模型的建立

目的建立不同浓度的H2O2诱导PC12细胞凋亡的模型,研究组织缺血、自由基损伤的机制。方法分别以不同浓度的H2O2处理PC12细胞12h,用噻唑蓝(MTT)比色法和流式细胞术检测处理后细胞的生长活力和凋亡情况。结果以0浓度组作为对照,100、300nmol/L的H2O2处理的PC12细胞生存率分别为(76±7.69)%、(39±7.08)%(P<0.01);0、100、300nmol/L的H2O2处理的PC12细胞后凋亡率分别为2.47%、6.00%和55.54%。结论建立了以0、100、300nmol/L的H2O2诱导PC12细胞凋亡的模型。

过氧化氢预处理对抗氧化应激诱导的PC12细胞凋亡(英文)

氧化应激可明显地诱导细胞凋亡。本研究旨在探讨H2O2。预处理能否对H2O2诱导的PC12细胞凋亡产生保护作用及ATP 敏感性K+(ATP-sensitive potassium,KATP)通道在其中的作用。采用PI染色流式细胞仪(flow cytometry,FCM)检测PC12细胞凋亡。结果表明,经10 μmol/L H2O2预处理90 min的PC12细胞,分别在20、30、50和100 μmol/L H2O2作用24 h后,其细胞凋亡率明显下降,与未经H2O2预处理的PC12细胞相比,差异极显著(P<0.01),表明H2O2预处理对H2O2诱导PC12细胞凋亡具有保护作用。用10μmol/L的KATP通道激动剂pinacidil(Pin)可显著减少30和50μmol/L H2O2诱导的PC12细胞凋亡,10 μmol/L的KATP通道拮抗剂glybenclamide(Gly)则可显著地抑制甚至取消KATP通道激动剂Pin对H2O2诱导PC12细胞凋亡的保护作用,但并不影响H2O2预处理对H2O2诱导PC12细胞凋亡的保护作用;然而,当联合应用H2O2预处理与Pin时,对PC12 细胞凋亡的保护作用明显大于各自的抗凋亡作用。提示KATP通道开放不仅对H2O2诱导PC12细胞凋亡具有保护作用,而且与H2O2预处理一起产生抗PC12细胞凋亡的协同作用,但KATP通道开放可能不参与H2O2预处理的适应性保护作用。

开心散抑制过氧化氢诱导的PC12细胞凋亡的机制

目的:研究开心散(Kaixin San,KXS)对过氧化氢(H2O2)诱导的PC12细胞凋亡的影响,并探讨其抗凋亡的机制。方法:以过氧化氢诱导的PC12细胞凋亡为模型,采用MTT比色法,琼脂糖凝胶电泳分析,荧光染色观察及流式细胞技术,考察KXS对凋亡的保护作用;采用比色法测定caspase活性、Western blot技术检测胞浆中细胞色素C水平,RT-PCR技术分析Bcl-2和Bax mRNA的表达,考察KXS抗凋亡的机制。结果:KXS可以有效地改善H2O2诱导的PC12细胞的凋亡,抑制caspase-3、caspase-9的活性,降低胞浆中细胞色素C的水平,增加Bcl-2mRNA的表达,减少BaxmRNA的表达,从而导致Bcl-2/Bax比值的增加。结论:KXS可能通过线粒体途径抑制H2O2诱导的PC12细胞的凋亡。

Ca^(2+)-CaM对过氧化氢诱导玉米幼苗耐冷性的影响

H2 O2 预处理可提高玉米幼苗的耐冷性及其体内钙调素 (CaM )活性。阻断胞内Ca2 + 库的动员 (钌红处理 )、降低细胞中Ca2 + 水平 (EGTA处理 )及抑制CaM活性 (TFP和CPZ处理 )均可完全消除H2 O2 诱导的玉米幼苗的耐冷性。阻止胞外Ca2 + 跨膜进入胞内 (La3 + 处理 )并不抑制、甚至还能轻微地提高H2 O2 诱导的耐冷性。高Ca2 + (2 0mmol·L-1)处理削弱H2 O2诱导的耐冷性。这些结果表明 ,CaM及胞内Ca2 + 库在H2 O2 诱导的玉米幼苗耐冷性的形成过程中起重要作用 ,而质外体中高浓度Ca2 + 和跨膜进入胞内会削弱H2 O2

过氧化氢诱导人胎盘滋养细胞HTR-8/SVneo氧化应激模型的建立

目的通过研究不同浓度过氧化氢(H2O2)作用不同时间对人胎盘滋养细胞HTR-8/SVneo氧化应激水平的影响,确定建立滋养细胞氧化应激模型的条件。方法将HTR-8/SVneo用不同浓度(125、250、500μmol/L)H2O2分别处理不同时间(1、2、4、24h)后,采用CCK-8法检测细胞存活率;流式细胞术分析检测细胞内超氧化物阴离子水平以及细胞凋亡情况;紫外分光光度法检测细胞培养上清液中超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性以及乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)含量。结果随H2O2浓度增加及作用时间延长,HTR-8/SVneo细胞存活率逐渐下降,细胞内超氧化物阴离子含量及细胞凋亡率不断增加,细胞培养上清液中SOD活性逐渐降低、LDH含量不断升高。其中在250μmol/L H2O2作用4h条件下,SOD活性明显低于对照组(P<0.05),细胞内超氧化物阴离子水平及细胞凋亡率较对照组均显著增加(P<0.05),但LDH漏出量无明显增多(P>0.05),且该条件下细胞有较高的存活率(85.13%)。结论建立人胎盘滋养细胞HTR-8/SVneo氧化应激模型的最适条件为250μmol/L H2O2作用4h。

槲皮苷对过氧化氢诱导PC12细胞损伤的保护作用

目的探讨槲皮苷对H2O2所致的PC12细胞凋亡的保护作用及机制。方法 PC12细胞培养后,MTT检测细胞存活率的方法进行H2O2损伤模型的摸索和槲皮苷药物浓度的筛选,将PC12细胞分为对照组、模型组和不同剂量槲皮苷组。用400μmol H2O2刺激PC12神经元细胞使其发生凋亡复制阿尔茨海默病(AD)模型,MTT法检测PC12细胞存活率、硫辛酰胺脱氢酶催化的INT显色反应检测乳酸脱氢酶(LDH)释放量和DAPI荧光核染色观察细胞凋亡形态学改变,Western blot方法检测Cytc和caspase-3表达的变化。结果 400μmol H2O2诱导PC12细胞损伤明显,与模型组比较,槲皮苷组PC12细胞存活率显著提高(P<0.01),凋亡率显著下降(P<0.01),LDH释放量和凋亡相关蛋白Cytc和caspase-3的表达显著减少(P<0.01)。结论槲皮苷可抑制H2O2诱导的PC12细胞凋亡,其机制可能与抑制细胞凋亡线粒体途径中凋亡相关蛋白Cytc和caspase-3的表达有关。

青葙皂苷对过氧化氢诱导的H9c2心肌细胞凋亡的影响及机制研究

目的探讨青葙皂苷(CES)对H_(2)O_(2)诱导的H9c2心肌细胞损伤的保护作用。方法H9c2心肌细胞设置对照组、H_(2)O_(2)处理组、低剂量CES(25μg/mL)+H_(2)O_(2)处理组、中剂量CES(50μg/mL)+H_(2)O_(2)处理组、高剂量CES(100μg/mL)+H_(2)O_(2)处理组,噻唑蓝(MTT)检测CES对H_(2)O_(2)处理下的H9c2心肌细胞活力的影响,流式细胞术检测CES对H_(2)O_(2)诱导的心肌细胞凋亡及ROS产生的影响,并应用蛋白印记法(Western blot)检测凋亡信号通路相关蛋白的表达和核因子E2相关因子/抗氧化反应元素(Nrf2/ARE)信号通路相关蛋白表达变化。结果MTT检测结果显示,与对照组比较,H_(2)O_(2)处理组H9c2心肌细胞活力降低[(75.82±2.72)%比(100.89±3.48)%,P<0.05],而经低、中、高剂量CES处理的细胞活力较H_(2)O_(2)组明显提升[(80.64±2.52)%、(85.68±3.77)%、(91.43±3.74)%比(75.82±2.72)%,P<0.05];流式细胞检测结果表明,与对照组比较,H_(2)O_(2)处理组H9c2心肌细胞凋亡率明显上升[(26.43±3.79)%比(2.71±1.12)%,P<0.05],而经低、中、高剂量CES处理的细胞凋亡率较H_(2)O_(2)处理组明显降低[(20.63±2.71)%、(15.07±1.12)%、(8.57±2.59)%比(26.43±3.79)%,P<0.05];检测凋亡相关蛋白发现,与H_(2)O_(2)处理组比较,经低、中、高剂量CES处理的H9c2心肌细胞B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)表达增高,Bcl-2相关X蛋白(Bax)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-9剪切体(cleaved caspase-9)与含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3剪切体(cleaved caspase-3)表达降低;此外CES可降低H9c2心肌细胞内H_(2)O_(2)诱导的ROS产生量[(114.24±3.49)%、(109.05±2.48)%、(100.87±2.71)%比(122.91±3.86)%,P<0.05];CES可促进Nrf2核转位与血红素氧合酶1(HO-1)表达。结论CES可能通过激活Nrf2/ARE信号通路抑制H_(2)O_(2)诱导的H9c2心肌细胞损伤。

V_2O_5/ACO催化过氧化氢氧化苯乙烯的研究

以氧化改性活性炭为载体,用微波辐射法制备了系列钒氧化物/活性炭催化剂(V2O5/ACO).采用FT-IR、XRD对催化剂进行了光谱表征.考察了V2O5/ACO在苯乙烯过氧化氢选择氧化中的催化性能.其中,V2O5-30/ACO性能较佳.以丙酮为反应介质,当n(苯乙烯)∶n(H2O2)=1∶2.5,45℃反应5 h,苯乙烯转化完全,苯甲醛的选择性可达87.2%.V2O5-30/ACO经纯化后可再生,其催化性能基本保持不变.

过氧化氢对原代心肌细胞及H9c2细胞的损伤作用

目的:考察过氧化氢对H9c2心肌细胞及原代心肌细胞损伤作用的相似性。方法:选用H9c2心肌细胞与新生大鼠原代心肌细胞,应用MTT法测定不同浓度过氧化氢对H9c2心肌细胞及原代心肌细胞活性的影响,观察两株细胞对过氧化氢损伤的敏感性。结果:600～1 600μmol/L的过氧化氢对H9c2心肌细胞及原代心肌细胞所造成的氧化损伤均具有浓度依赖性,1 200μmol/L的过氧化氢使H9c2心肌细胞的存活率降低40%～60%(P<0.01),表现出与原代心肌细胞相似的H2O2损伤敏感性(P>0.05)。结论:H9c2心肌细胞与原代心肌细胞对过氧化氢氧化损伤具有相似的作用和浓度依赖性。

Bi_2Mo_3O_(12)在苯酚-过氧化氢羟基化反应中的催化性能

以硝酸铋和钼酸铵为原料,采用溶胶-凝胶法和微波加热技术制备了Bi2Mo3O12纳米微粒催化剂,使用XRD、TEM以及BET比表面测试等技术对催化剂进行了表征.研究了Bi2Mo3O12纳米微粒对苯酚-过氧化氢羟基化反应的催化活性,探讨了H2O2/phOH摩尔比、反应介质、反应温度以及反应体系pH等对苯酚羟基化反应活性的影响.实验结果表明:所制备的样品为白钨矿型纳米微粒,粒子的比表面积为68.8m2/g,粒径约为12nm.在所选定的反应条件下,苯酚的转化率达50.3%,苯二酚的产率为49.9%.

过氧化氢对人肝癌细胞株HepG_2增殖的促进作用

目的 :探讨低剂量过氧化氢 (H2 O2 )对人肝癌细胞株HepG2 的促增殖作用及该作用与NF κB和细胞周期的关系 .方法 :不同剂量H2 O2 直接作用于培养的HepG2 细胞 ;2 0 μmol/LNF κB抑制剂 (PDTC)预处理细胞 2h ,5 0 μmol/L的H2 O2 作用HepG2 细胞 ;5 0 μmol/LH2 O2 分别作用于G1,G2 /M ,S期细胞 ,MTT法测定细胞增殖活性 .结果 :5 0 μmol/L的H2 O2 具有明显的促进HepG2 细胞生长的作用 ,此作用可以被PDTC抑制 ;5 0 μmol/L的H2 O2 可以明显的促进G1期HepG2 细胞生长 .结论 :低剂量H2 O2 可诱导HepG2 细胞增殖 ,该过程可能包含依赖NF κB的信号途径的参与 ;H2 O2 诱导HepG2 细胞增殖在细胞周期的不同时相效应敏感性不同 ,主要诱导G1期细胞增殖 .