聚乙二醇-过氧化氢酶在小鼠心肌肥厚和损伤中的保护作用

目的观察聚乙二醇-过氧化氢酶在异丙肾上腺素所致小鼠心肌肥厚和损伤中的保护作用。方法以异丙肾上腺素建立C57BL/6小鼠心肌肥厚和心肌损伤的模型,通过二氢乙啶染色、蛋白质印迹法、实时定量逆转录聚合酶链反应、Masson Trichrome染色等实验,检测聚乙二醇-过氧化氢酶在异丙肾上腺素所致小鼠心肌肥厚和损伤模型中对氧自由基生成、细胞凋亡、心肌纤维化、超氧化物歧化酶1(SOD-1)表达的影响。结果小鼠异丙肾上腺素皮下注射后,发生心肌肥厚和缺血损伤,心肌组织氧自由基生成明显升高,SOD-1的表达明显降低,心肌细胞凋亡增加,发生心肌纤维化,与对照组对比差异有统计学意义(均为P<0.01);与异丙肾上腺素处理组比较,聚乙二醇-过氧化氢酶(30 000 U.kg-1.d-1)预处理组心肌肥厚改善,氧自由基生成明显降低,SOD-1水平明显提高,细胞凋亡减少,心肌纤维化降低,差异有统计学意义(均为P<0.05)。结论抗氧化剂聚乙二醇-过氧化氢酶可以有效进入心肌组织,抑制氧自由基生成、减少心肌细胞凋亡和心肌纤维化,对异丙肾上腺素诱导的小鼠心肌肥厚和损伤具有保护作用。

过氧化氢对肺动脉内皮细胞环氧合酶-2表达的影响及CaMKⅡ的作用

目的:探讨过氧化氢(H2O2)对肺动脉内皮细胞环氧合酶-2(COX-2)表达的影响及钙-钙调蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)在其中的作用。方法:采用活细胞计数法(CCK-8法)检测H2O2处理肺动脉内皮细胞后的细胞活性,采用RT-PCR检测COX-2 mRNA的表达水平,采用Western blotting检测COX-2蛋白质的表达水平。结果:H2O2增强COX-2表达,呈浓度和时间依赖性。100μmol/L H2O2处理肺动脉内皮细胞4 h,COX-2 mRNA和蛋白质表达水平明显高于正常对照组,COX-2 mRNA水平为正常对照组的256.01%±22.36%(P<0.05),蛋白质水平为正常对照组的216.65%±21.52%(P<0.05)。CaMKⅡ特异性抑制剂KN-93能抑制H2O2的这一效应。结论:H2O2可增强肺动脉内皮细胞COX-2基因的表达,CaMKⅡ是H2O2增强肺动脉内皮细胞COX-2基因表达的途径之一。

过氧化氢和11,12-环氧二十碳三烯酸对内皮依赖性超极化因子介导的脑基底动脉舒张作用的影响

目的:探讨过氧化氢(H2O2)和11,12-环氧二十碳三烯酸(11,12-EET)在内皮依赖性超极化因子(endothelium-dependent hyperpolarizing factor,EDHF)介导的基底动脉舒张中的作用。方法:采用离体血管舒缩功能测定实验,检测乙酰胆碱(ACh)、H2O2、11,12-EET及过氧化氢酶(CAT)等对大鼠离体脑基底动脉血管环的舒张作用。结果:在30 mmol/L的KCl预收缩的大鼠脑基底动脉环上,ACh可产生浓度依赖性的舒张作用;血管用NO合酶抑制剂(L-NAME,3×10-5mol/L)和前列环素(PGI2)合酶抑制剂(In-do,10-5mol/L)预处理后,ACh对基底动脉仍存在部分舒张作用,即非NO和非PGI2介导的舒张。应用L-NAME和Indo后,11,12-EET对大鼠基底动脉无明显的舒张作用,H2O2仅有轻微舒张作用,CAT对ACh介导的非NO和非PGI2反应没有影响。结论:在大鼠基底动脉中ACh介导的EDHF反应即非NO和非PGI2介导的舒张中不涉及H2O2和11,12-EET。

过氧化氢酶在Blakeslea trispora抵抗氧胁迫中的保护作用

我们发现过氧化氢酶在三孢布拉氏霉菌抵抗氧胁迫(H2O2)中具有一定的保护作用,从而引发菌体合成大量β-胡萝卜素和番茄红素。当发酵培养24h时加入20μmol/L的H2O2,产生的β-胡萝卜素比对照提高了59.4%;当培养36h时加入75μmol/L的H2O2,产生的番茄红素比对照提高了77.7%;在菌体积累这两种类胡萝卜素的同时,过氧化氢酶的活性显著降低,说明过氧化氢酶因猝灭H2O2而大量消耗,同时引发菌体合成较多的β-胡萝卜素和番茄红素,以猝灭氧自由基对机体造成的损伤。这一现象说明在氧胁迫条件下,过氧化氢酶作为信号因子激发菌体合成类胡萝卜素,从而保护菌体正常生长和代谢。

生物组织中过氧化氢酶活性的测定

测定作为人类主要食物来源的动植物组织中的过氧化氢酶的活性,具有一定实际意义。现知过氧化氢酶的测定方法有分光光度法、测压法、氧电极法等多种,本人根据过氧化氢酶的作用原理,使用量气装置设计了一种较方便易行的测定方法。现介绍如下:

炭载微过氧化物酶-11电极对O_2和H_2O_2还原的电催化性能

通过平衡吸附法将微过氧化物酶 -1 1 (MP-1 1 )沉积到活性炭上制成 MP-1 1 /C催化剂 ,利用循环伏安法、线性扫描法和旋转圆盘电极技术研究了该催化剂对 O2 和 H2 O2 的电催化还原 .结果表明 ,MP-1 1 /C对 O2和 H2 O2 的电化学还原均具有较好的催化活性 ,并且氧的还原机理与溶液 p H值有关 。

酶-氧电极测定固体食品中H_2O_2方法的研究

目的建立测定固体样品中过氧化氢的方法.方法利用过氧化氢酶可专一分解H2O2为氧与水,氧电极对溶解氧具有高度选择性的原理,用磷酸盐缓冲液对样品中的过氧化氢进行提取,用N2将溶液中原来溶存的O2充分置换后,加入过氧化氢酶,用溶氧仪定量检测由过氧化氢酶分解H2O2产生的溶解氧,从而间接计算出样品中H2O2的含量.结果该方法检测的线性范围为0.5～7.5μg/ml,r＞0.999,检出限为0.13μg/ml.2个浓度H2O2的平均回收率分别为90.59%～93.88%,相对标准差＜10%.结论经过对补钙产品、莲子等干果及豆腐丝、虾皮等食品的检测,方法简便、易行.

5-脂氧酶/绿荧光蛋白转染评价PC12细胞损伤后5-脂氧酶核膜移位

目的:通过绿荧光蛋白(green fluorescence protein,GFP)/5-脂氧酶(5-lipoxygenase,5-LOX)稳定转染PC12细胞,以可视化方法观察5-LOX在不同损伤后的变化。方法:将带有5-LOX基因的pEGFP-C2质粒及pEGFP-C2质粒(对照),稳定转染至PC12细胞;在缺糖缺氧(oxygen-glucose deprivation,OGD)、H2O2和NMDA处理后,荧光显微镜下观察GFP/5-LOX在细胞内的定位;同时,以免疫细胞化学方法观察野生型5-LOX分布及其变化。结果:转染GFP/5-LOX的细胞内,GFP/5-LOX主要均匀表达于细胞核内;仅转染GFP的细胞GFP表达于胞核和胞浆。OGD和H2O2处理后,分别有50.6%和57.7%细胞的GFP/5-LOX移位到核膜;NMDA处理或仅转染GFP的细胞,未见核膜移位现象。野生型5-LOX分布在细胞核和细胞浆内,3种损伤处理均诱导核膜移位。结论:稳定转染GFP/5-LOX的PC12细胞,GFP/5-LOX主要分布在细胞核;不同损伤处理诱导的5-LOX核膜移位,有不同的特点。

蚯蚓过氧化氨酶的纯化及性质

赤子爱胜蚓（Ｅｉｓｅｎｉａｆｏｅｌｉｄｅ）组织匀浆抽提液经硫酸铵盐析、透析浓缩后，用大柱制备电泳纯化得到两个过氧化氢酶，均为糖蛋白，Ｍｒ分别为３９００００、４０００００。用氧电极法测得后者的表观Ｋｍ值为１４３ｍＭ，最适ｐＨ值８．０左右。ＮａＮ３、ＫＣＮ及某些金属离子如Ｃｕ（Ⅱ）、Ｃｄ（Ⅱ）、Ｚｎ（Ⅱ）、Ｎｉ（Ⅱ）等抑制酶活性；Ｐｂ（Ⅱ）、Ｆｅ（Ⅲ）有激活作用。在直隶环毛蚓（Ｐｈｅｒｅｔｉｍａｔｓｃｈｉｌｉｅｎｓｉｓ）体内实验中，Ｚｎ（Ⅱ）显著提高过氧化氢酶的总活力；Ｃｄ（Ⅱ）、Ｎｉ（Ⅱ）先是降低、随后提高酶总活力。

吩嗪甲酸硫酯对葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏的人红细胞某些生化指标的影响

为探讨葡萄糖 6 磷酸脱氢酶 (G6PD)缺乏的人红细胞在自由基作用下的变化情况 ,通过测定自由基作用前后G6PD缺乏人红细胞变形能力、高铁血红蛋白生成、过氧化氢酶活力、还原型谷胱甘肽 (GSH)、还原型三磷酸吡啶核苷 (NADPH)的浓度 ,并与正常红细胞比较。结果显示G6PD缺乏红细胞在氧自由基作用下变形能力、过氧化氢酶活力、GSH及NADPH水平与正常红细胞相比显著下降 (P <0 0 1) ,而高铁血红蛋白生成显著增加 (P <0 0 1) ,从而得出G6PD缺乏红细胞氧化易感性增强导致细胞损伤。

4-二茂铁甲酰氧基-2,2,6,6-四甲基哌啶氮氧自由基对活性氧的清除作用

目的研究一种新型稳定的4-二茂铁甲酰氧基-2,2,6,6-四甲基哌啶氮氧自由基(FC-TEMPO)对活性氧的清除作用。方法用氯化硝基四氮唑蓝(NBT)还原法研究FC-TEMPO对超氧阴离子自由基(O2.-)的清除能力;用流式细胞仪和分光光度法研究FC-TEMPO对95-D肺癌细胞内活性氧、超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)的影响,同时采用噻唑蓝(MTT)法测定该化合物对癌细胞活力的影响。结果FC-TEMPO在体外能有效清除O2.-阴离子,并抑制肺癌细胞的增殖;同时该化合物能使95-D肺癌细胞内的活性氧含量下降,SOD和CAT酶的活性上升。结论通过体外和癌细胞实验表明,FC-TEMPO具有良好的清除活性氧的能力,并可能通过这种方式杀伤癌细胞。

黄芪甲苷对过氧化氢诱导人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用

目的:研究黄芪甲苷(astragaloside IV,As IV)对过氧化氢(H2O2)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)保护作用并探讨其可能的作用机制。方法:在37℃,5%CO2,95%空气饱和湿度的培养箱内体外培养HUVECs,将细胞分为正常组,模型组(过氧化氢180μmol·L-1),黄芪甲苷不同剂量(25,50,100μmol·L-1)+过氧化氢(180μmol·L-1)组。MTT法测定各组细胞活力,二氢乙锭原位定性细胞内超氧阴离子含量,Western blot测定细胞内核因子(NF)-κB p65,NF-κB抑制蛋白α亚基(IκB-α),内皮型一氧化氮合酶(e NOS)蛋白表达,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测HUVECs外液肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)的含量。结果:与正常组比较,模型(H2O2)组细胞活力明显降低,细胞中超氧阴离子明显升高,NF-κ`B p65蛋白表达升高,IκB-α蛋白表达降低,e NOS蛋白表达升高,细胞上清液中TNF-α和IL-6的含量升高(P<0.01)。与模型(H2O2)组相比,黄芪甲苷不同剂量组表现为细胞活力明显升高,细胞中超氧阴离子含量减少,e NOS,p65蛋白表达有不同程度的降低,IκB-α的蛋白含量增加,细胞上清液中TNF-α和IL-6的含量降低,且呈浓度依赖性(P<0.05)。结论:黄芪甲苷能改善H2O2诱导的HUVECs的损伤,其机制可能是通过降低超氧阴离子量,抑制e NOS的解耦联,减少其产生超氧阴离子,从而减轻氧化应激,降低NF-κB和相关炎症因子表达。

β-七叶皂苷钠对大鼠脑缺血-再灌注损伤的保护作用(英文)

目的 研究 β 七叶皂苷对大鼠脑缺血 再灌注损伤的保护作用。 方法 线栓法制备大鼠大脑中动脉阻断(middlecerebralarteryocclusion ,MCAO)短暂局灶性脑缺血模型 ,缺血前给予 β 七叶皂苷钠 1 5 ,30 ,6 0mg·kg- 1 ,po ,7d ,末次给药 1h后制备MCAO模型 ,缺血 2h ,再灌注 2 4h ,评价神经功能状态、脑水肿和脑梗死范围 ,测定大脑缺血区及非缺血区皮层及海马中SOD ,GSH Px ,CAT和Na+ K+ ATPase的活性及MDA的含量。结果 β 七叶皂苷钠能显著改善脑缺血 再灌注后脑梗死体积 ,减轻脑水肿 ,改善神经功能症状 ,与模型组比较 ,具有显著性差异 (P <0 0 1 ) ;同时 β 七叶皂苷钠组的大鼠MCAO再灌注后 ,其脑内SOD ,GSH Px及ATPase的活性明显高于模型组 ,而MDA的含量明显低于模型组 ,均具显著性差异 (P <0 0 1或P <0 0 5 )。结论 β 七叶皂苷钠对大鼠局灶性脑缺血 再灌注损伤具有明显保护作用。

消退素D1通过抑制p38 MAPK活化上调H_2O_2诱导心肌细胞HO-1表达的实验研究

目的探讨消退素D1(RvD1)对H2O2诱导状态下H9C2心肌细胞血红素氧合酶-1(HO-1)的调节作用及相关的分子机制。方法将大鼠心肌H9C2细胞分为对照组、消退素D1+H2O2组(Resolvin D1+H2O2组)和H2O2组3组,在200μM的H2O2干预6小时后使用RT-PCR法和western blot法对各组H9C2心肌细胞HO-1mRNA和蛋白的表达水平进行检测;并使用western blot法对H9C2心肌细胞p38 MAPK磷酸化水平(Phospho-p38 MAPK/total p38MAPK比值)进行测量。结果与对照组比较,在H2O2干预6小时后H9C2心肌细胞HO-1mRNA和蛋白的表达水平明显降低,而p38 MAPK磷酸化水平均明显升高,差异均有统计学意义(均P<0.05);但H2O2组较Resolvin D1+H2O2组HO-1mRNA和蛋白表达的降低以及p38 MAPK磷酸化水平的增加更加显著,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论本研究结果表明,在过氧化氢诱导的H9C2心肌细胞氧化应激和损伤过程中消退素D1可能是通过抑制P38 MAPK的活化上调了HO-1的表达,对心肌细胞有保护作用。

丙泊酚与七氟烷对单肺通气患者HO-1、CAT水平的影响及肺保护作用

目的探究丙泊酚与七氟烷对单肺通气麻醉患者肺组织血红素氧合酶-1(HO-1)、血清过氧化氢酶(CAT)水平的影响及肺保护作用。方法前瞻性选取2019年2月至2020年12月在南京市第一医院行单肺通气麻醉术的患者67例作为研究对象。采用随机数字表法分为观察组(n=34)与对照组(n=33),对照组采用七氟烷诱导麻醉,观察组采用丙泊酚诱导麻醉。对比2组麻醉诱导前(T_(0))、气管插管后5 min(T_(1))、单肺通气后30 min(T_(2))、恢复双肺通气时(T_(3))、恢复双肺通气后15 min(T_(4))、手术结束时(T_(5))的肺功能指标[肺泡-动脉氧分压差(PA-aO_(2))、氧合指数(OI)、呼吸指数(RI)]和血清CAT水平、肺组织HO-1表达水平、肺氧合指数(PaO_(2)/FiO_(2))、临床相关指标情况。结果2组T_(1)、T_(2)、T_(3)、T_(4)时刻PA-aO_(2)水平均较T_(0)时刻增加,差异均有统计学意义(P<0.05);2组T_(1)、T_(2)、T_(3)时刻OI水平均较T_(0)时刻下降,T_(2)、T_(3)时刻观察组OI水平高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);观察组在T_(1)、T_(2)、T_(3)、T_(4)、T_(5)时刻RI水平均低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。2组T_(1)、T_(2)、T_(3)、T_(4)、T_(5)时刻血清CAT水平均较T_(0)时刻下降,观察组高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。观察组肺组织HO-1水平与PaO_(2)/FiO_(2)均高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。观察组睫毛反射消失时间为(80.45±24.34)min,明显长于对照组[(52.78±18.73)min],差异有统计学意义(P<0.05);2组呼叫睁眼时间、自主呼吸恢复时间、拔管时间相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论丙泊酚诱导单肺通气麻醉可上调肺组织HO-1表达、减轻机体氧化应激反应,从而起到肺保护作用。七氟烷诱导速度较快,且不影响术后恢复速度。