Native-PAGE染色法用于过氧化氢酶-3酶活性定量分析

通过定量比较过氧化氢酶-3(catalase-3,Cat-3)的酶活性与其蛋白量及mRNA的关系,确定Native-PAGE染色法能够直接反映出Cat-3蛋白含量,进而探究该方法用于定性和定量检测Cat-3活性的准确性。采用同源重组的方法进行cat-3基因敲除;通过大肠杆菌表达重组GST-Cat-3蛋白制备多克隆抗体;通过Western blotting检测、Northern杂交以及Native-PAGE染色法对粗糙脉孢菌Cat-3的酶活性进行定量分析。得到cat-3基因缺失突变体;获得特异性很高的Cat-3蛋白的多克隆抗体,并对H_2O_2胁迫处理和未处理的菌丝体中Cat-3表达量进行分析、比较。与Northern杂交和Western blotting检测相比,NativePAGE染色法能够非常准确地反映出Cat-3蛋白表达量的变化,因而该方法不但能够对粗糙脉孢菌Cat-3的酶活性进行定性分析,还能进行定量分析。