大鼠肾缺血再灌注损伤肝内过氧化酶I、过氧化氢酶、细胞外超氧化物歧化酶的表达变化

摘要目的：观察大鼠。肾缺血再灌注损伤模型肝的功能、形态、氧化应激水平以及抗氧化酶过氧化酶I（PrxI）、过氧化氢酶（CAT）、细胞外超氧化物歧化酶（EC-SOD）的表达变化，探讨肾缺血再灌注损伤对肝的影响及PrxI、CAT、EC-SOD的抗氧化作用。方法：通过无损伤动脉夹钳夹。肾动脉法建立肾缺血再灌注损伤模型。再灌注24h后取血、肝和肾。血清ALT活性采用速率法测定，血清SCr含量采用苦味酸法测定；血清BUN含量采用酶耦联速率法测定。采用H—E染色观察肝、肾的形态学改变。肝组织MDA含量采用硫代巴比妥酸比色法测定；肝组织H2O2含量采用分光光度法测定。抗氧化酶PrxI、CAT、EC-SODmRNA表达水平采用RT-PCR的方法测定，其蛋白水平的表达变化采用免疫印迹测定。结果：肾缺血再灌注损伤组大鼠血清SCr含量、BUN含量和ALT活性均高于对照组；H—E染色结果显示模型组大鼠肾组织、肝组织形态结构均明显受损。肝组织内的MDA含量和Hzoz含量明显高于对照组，PrxI、CAT、EC-SOD的mRNA和蛋白表达水平与对照组相比也明显升高。结论：肾缺血再灌注损伤可导致肝遭受过氧化损伤，形态结构和功能受损，PrxI、CAT、EC-SOD在此过程中可能发挥了抗氧化应激作用，对肝具有保护功能。

谷胱甘肽过氧化酶4在胃肠道肿瘤中的作用与治疗

胃肠道肿瘤发病率逐年上升,其病死率在我国癌症中位居前列,严重危害国民健康。只有提前预防加有效治疗双管齐下,才能更好地降低癌症负担。铁死亡是一种铁依赖的,区别于细胞凋亡、坏死、自噬的细胞程序性死亡方式。近几年,肿瘤耐药性的增加引起了学者对诱导癌细胞铁死亡的兴趣,因为铁死亡固有的生理功能之一就是肿瘤抑制。铁死亡受到氧化系统和抗氧化系统的平衡调节,谷胱甘肽过氧化酶4(glutathione peroxidase 4,GPX4)是抗氧化系统的核心因子之一,在多种恶性肿瘤中异常表达,与肿瘤的不良生物学行为相关。在胃肠道肿瘤中,GPX4表达异常,并参与肿瘤的发生发展、治疗和耐药。作为胃肠道肿瘤中许多分子的作用靶点(例如小分子化合物、miRNA和纳米反应器等),GPX4在多个水平上受到调节,并参与调控多种复杂的信号通路。以GPX4为靶点的策略有望成为治疗胃肠道肿瘤的新途径。本文就GPX4在胃肠道肿瘤中的国内外研究进展进行综述,阐明其分子调控机制和目前的药物研究进展,为胃肠道肿瘤的研究及防治提供新的思路。

谷胱甘肽过氧化酶4及铁蛋白重链1在甲状腺乳头状癌组织中的表达

目的探讨甲状腺乳头状癌(PTC)组织中谷胱甘肽过氧化酶4(GPX-4)和铁蛋白重链1(FTH-1)的表达情况,分析二者在PTC发生发展中的生物学意义。方法采集2019年6月至2023年8月合肥市第三人民医院40例PTC病人的手术切除标本,分别为癌组织和癌旁组织。应用免疫组织化学染色检测PTC组织和癌旁组织中GPX-4和FTH-1的表达情况,然后利用SPSS 22.0软件进行统计分析。结果GPX-4在PTC组织与癌旁组织中的阳性表达率分别为80.00%(32/40)和15.00%(6/40),GPX-4在癌组织中的阳性表达率显著高于癌旁组织,差异有统计学意义(χ^(2)=18.38,P<0.001)。同样,FTH-1在PTC组织和癌旁组织中的阳性表达率分别为72.50%(29/40)和10.00%(4/40),FTH-1在癌组织中的阳性表达率也显著高于癌旁组织,差异有统计学意义(χ^(2)=18.58,P<0.001)。GPX-4和FTH-1在PTC组织中的表达与PTC的TNM分期及淋巴结转移具有相关性(P<0.05)。结论GPX-4和FTH-1在PTC组织中均呈阳性高表达,与PTC的TNM分期和淋巴结转移有关,提示其与PTC的发生发展密切相关,二者检测可作为评估PTC临床预后的辅助指标,也为PTC的分子靶向治疗提供新的方向。

川芎嗪对脑缺血再灌注小鼠脑损伤及NADPH氧化酶表达的影响

目的研究川芎嗪对脑缺血再灌注小鼠大脑氧化应激损伤的保护作用和还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(nicotinamide adenine dinucleotide phosphate,NADPH)氧化酶表达的影响。方法采用线栓法建立大脑中动脉闭塞/再灌注模型。造模后对小鼠进行Longa神经功能评分;采用HE和氯化三苯基四氮唑染色法(triphenyltetrazolium chloride staining,TTC)分别观察脑组织的病理改变和梗死情况;检测脑组织中超氧化物歧化酶(total antioxidative capacity,T-AOC)、过氧化物酶(superoxide dismutase,SOD)、乳酸脱氢酶(malondialdehyde,MDA)、过氧化氢(hydrogen peroxide,H_(2)O_(2))和髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)的变化,Western blot检测NADPH氧化酶活化蛋白p47抗体(NADPH oxidase activated protein p47 antibody,P47phox)和NADPH氧化酶(NADPH oxidase,Nox)4蛋白的表达,免疫组化检测肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α的表达。结果川芎嗪能显著减轻脑缺血再灌注小鼠的脑组织损伤、缩小脑梗死体积,升高脑缺血再灌注小鼠脑组织中T-AOC、SOD水平而降低MDA、H_(2)O_(2)和MPO的含量(P<0.05),同时降低其脑组织中P47phox、Nox4和TNF-α的蛋白表达(P<0.05)。结论川芎嗪对脑缺血再灌注小鼠大脑损伤具有明显的保护作用,其机制与降低NADPH氧化酶的表达进而抑制氧化应激及减轻炎症反应有关。

固定化辣根过氧化酶的壳聚糖/二氧化硅杂化膜的制备及表征

利用生物相容性良好的天然高分子聚合物壳聚糖(CS)与四乙氧基硅烷(TEOS)通过原位溶胶-凝胶法制备壳聚糖／二氧化硅有机无机杂化复合膜,用杂化膜对辣根过氧化酶进行固定,用红外光谱法、扫描电镜法对膜进行了表征。以金电极和固定化酶膜构建过氧化氢生物传感器,并用循环伏安法和计时电流法对传感器的特性进行了研究。结果表明,用于研制固定化酶生物传感器时,杂化膜不仅对底物的响应时间快(小于10s),而且能较好地保持酶的催化活性。求得酶促催化反应的表观米氏常数为0.87mmol／L。

恒定磁场对老龄小鼠脑、心、肾脂褐素及心、肾、胸腺抗氧化酶含量的影响

目的 :研究恒定磁场对老龄小鼠脑、心、肾组织脂褐素 (L PF)及心、肾、胸腺组织谷胱甘肽过氧化物酶 (GSH - Px)含量的影响。方法 :将 2 0只雌性老龄小鼠随机分为实验组 (n=10 )与对照组 (n=10 )。把实验组老龄小鼠放入磁场强度为 2 0 0 m T的铁箱中 ,每日曝磁 1h,连续 30 d。结果 :实验组老龄小鼠脑组织脂褐素含量 [(0 .16 0± 0 .0 2 4 )μg· g- 1 ]较对照组 [(0 .30 4± 0 .0 6 1)μg· g- 1 ]比较差异有显著性 (P<0 .0 5 ) ;心、肾组织脂褐素含量 [(0 .0 82± 0 .0 0 9)及 (0 .32 9± 0 .0 2 4 )μg· g- 1 ]与对照组 [(0 .0 92± 0 .0 11)及 (0 .382±0 .0 33)μg· g- 1 ]比较 ,差异无显著性 (P>0 .0 5 )。实验组心、肾及胸腺 GSH- Px活性 [(9.6 3± 1.5 2 )、 (30 .6 8±4 .5 0 )及 (96 .72± 10 .94 ) NU· m L- 1 ]较对照组 [(7.6 3± 1.4 8)、 (2 4 .0 9± 4 .4 9)及 (85 .6 8± 7.12 ) NU· m L- 1 ]明显升高 (P<0 .0 5及 P<0 .0 1)。结论 :磁场强度 2 0 0 m T的恒定磁场有降低老龄小鼠器官组织中脂褐素含量、抵抗自由基及提高抗氧化酶活性的作用。

多壁碳纳米管负载Fe3O4磁性纳米粒子表面吸附增强过氧化酶的催化活性

采用共沉淀法制备了Fe_3O_4磁性纳米粒子,将其负载于氨基吡啶修饰多壁碳纳米管(MWCNT-AP)上,得到具有良好的分散性和超顺磁性的Fe_3O_4/MWCNT-AP复合物.通过傅里叶变换红外(FT-IR)光谱、X射线衍射(XRD)和磁滞回线测量等方法对Fe_3O_4/MWCNT-AP复合物进行了表征.扫描电镜(TEM)结果表明:Fe_3O_4磁性纳米粒子集中于碳纳米管MWCNT-AP的端部,形成的复合物在极性溶剂中具有良好的分散性和超顺磁性;辣根过氧化酶(HRP)可通过物理作用吸附于Fe_3O_4/JMWCNT-AP复合物表面.酸性条件下(pH 4.0),Fe_3O_4/MWCNT-AP复合物使HRP的最大反应速率(V_(max))提高了3倍.

苯并(a)芘和芘对梭鱼肝脏谷胱甘肽过氧化酶活性的影响

在实验生态条件下 ,浓度范围0.1～50μg/L的苯并(a)芘和芘的短期暴露造成梭鱼肝脏GPx活性先抑制后诱导的效应。相同的污染物 ,高浓度组对GPx活性的抑制大于低浓度组 ,出现GPx活性诱导的时间早于低浓度组 ;相同浓度下 ,苯并(a)芘对GPx活的作用大于芘 ,这间接反映了苯并(a)芘和芘的毒性大小。这些结果说明梭鱼肝脏GPx活性与苯并(a)芘和芘暴露有一定的相关性 。

用髓过氧化酶法定量测定心肌组织中的中性白细胞

中性白细胞中存在有髓过氧化酶(Myeloperoxidase enzyme,MPO),每个细胞所含酶的量是一定的,约占细胞干重的5%。该酶具有使过氧化氢还原的能力,利用这一特点可以分析酶的活力从而定量测定中性白细胞的数目。

基于纳米氧化铝/壳聚糖无机-有机复合纳米材料的辣根过氧化酶生物传感器

以纳米氧化铝／壳聚糖无机-有机生物复合膜为基质吸附纳米金-HRP，构建了新型酶传感器，将其用于H2O2的电化学检测。运用循环伏安法（CV）研究了该传感器的性能，并对实验条件进行了优化。在优化实验条件下，传感器对H2O2在0．3～270μmol/L浓度范围内与电流呈线性关系，检出限为0．1μmol／L。除高浓度的抗坏血酸有轻微干扰外，其他可能的共存物质如葡萄糖和各种氨基酸，以及生物相关的常见阴、阳离子对检测H2O2无明显干扰。酶促催化反应的表观米氏常数为0．13mmol／L。该传感器的稳定性和重复性良好，用于测定医用消毒水中H2O2的含量，结果满意。该生物传感器具有快速、简单、成本低等优点，可推广应用到其它酶生物传感器的构建。

一种敏感的辣根过氧化物酶反应法:葡萄糖氧化酶-二氨基联苯胺-硫酸镍铵法

神经系统束路追踪法或免疫组化法的最后步骤,常常需要用辣根过氧化物酶的呈色来显示。显示辣根过氧化物酶最常用的色素为二氨基联苯胺,其呈色产物为棕色,稳定,而且电子密度高,适于作光镜和电镜研究。但该法不够敏感,不能显示低浓度的过氧化物酶是其缺点。我们用葡萄糖氧化酶和葡萄糖代替双氧水供氧,并用镍盐增强二氨基联苯胺的呈色强度,得出一种黑色反应产物,比棕色产物的二氨基联苯胺原法及其他二氨基联苯胺法均敏感。能显示免疫反应阳性的细微结构,对显示阳性反应的纤维和终末效果极佳。并可与二氨基联苯胺原法或其他法合用作免疫组化双标记或免疫组化与束路追踪双标记。

辣根过氧化酶在纳米银修饰玻碳电极上的直接电化学研究

通过自组装依次将纳米银粒子和辣根过氧化酶(HRP)固定到巯基乙胺(Cys)修饰的玻碳电极上,制备了HRP/Ag/Cys膜修饰电极.用交流阻抗技术表征了电极的自组装过程.用循环伏安法和计时电流法考察了HRP与电极之间的直接电化学行为及酶对过氧化氢电催化特性.电极响应对过氧化氢有良好的电催化还原性质,性能稳定,响应时间小于5 s.

辣根过氧化酶催化H_2O_2氧化邻苯二胺反应产物的循环伏安法研究

用辣根过氧化物酶催化H2O2氧化邻苯二胺制备了酶促反应产物。经高效液相色谱法、紫外 可见光谱法和红外光谱法测定分析,产物为 2, 3 -二氨基吩嗪。用金圆盘电极循环伏安法和金超微盘电极循环伏安法对 2, 3- 二氨基吩嗪在B R缓冲溶液中的电还原性质进行了研究,求得电极反应电子转移数和参与电极反应H+的反应级数均为 2。2,3- 二氨基吩嗪在电极上经历了H+eH+e的两步一电子过程,生成产物 2, 3 -二氨基- 5, 10 -二氢吩嗪。

微过氧化酶-11在聚赖氨酸修饰银电极上的电化学及电催化

发现利用吸附在粗糙Ag电极上的聚赖氨酸(Ply),以静电作用方式固定微过氧化酶-11(MP-11)来制备MP-11/Ply/Ag修饰电极,不但方法简单,而且制得的修饰电极对O2的还原有高的电催化活性和好的稳定性.另外还发现MP-11分子中血红素的第六配体被配位能力较强的配体,如咪唑取代时,其本身的氧化还原电位负移,对O2还原的电催化活性降低.

硒源对肉鸡肉质和组织硒含量及血液谷胱甘肽过氧化酶活性的影响

将240只7日龄AA肉鸡随机分为4组,每组3个重复。对照组饲喂基础日粮,试验组日粮在基础日粮基础上分别添加0.15 mg/kg的亚硒酸钠、酵母硒和蛋氨酸硒,研究硒源对肉鸡生产性能、鸡肉品质、硒在组织的分布和血浆GSH-PX活性的影响。结果表明:(1)与对照组相比,亚硒酸钠组、酵母硒组和蛋氨酸硒组肉鸡日增重、日采食量和料肉比差异均不显著(P>0.05);(2)亚硒酸钠组、酵母硒组和蛋氨酸硒组,肉色、肌肉pH值、水分、肌间脂肪、剪切力差异均不显著(P>0.05);酵母硒组和蛋氨酸硒组,肌肉滴水损失均显著降低(P<0.05);(3)酵母硒组和蛋氨酸硒组血浆、肝脏、肌肉硒含量和GSH-PX活性均比对照组和亚硒酸钠组显著提高(P<0.05)。

辣根过氧化酶在纳米金/氧化锌球腔微电极阵列上的直接电化学研究

利用Langmuir-Blodgett技术和溶胶-凝胶（sol-gel）法在氧化铟锡（ITO）电极表面制备了有序的纳米金/氧化锌（nano-Au/ZnO）球腔阵列,并采用扫描电镜表征了nano-Au/ZnO球腔阵列的形貌。该阵列的循环伏安曲线具有微电极特性。将辣根过氧化酶（HRP）直接固定于nano-Au/ZnO球腔微电极阵列表面的ZnO球腔内,制备了过氧化氢生物传感器。采用循环伏安法研究了HRP在该阵列上的直接电化学。在pH7.0的缓冲溶液中,其循环伏安曲线于-0.145 V和-0.230 V处出现了1对稳定的准可逆氧化-还原峰,式量电位（E0′）为-0.188 V,表明固定于传感器表面ZnO球腔内的HRP保持了良好的电化学活性,其直接电子转移速率常数为2.95 s-1。ZnO的亲水性和特有的球腔阵列结构不仅为保持HRP的生物电化学活性提供了适宜的微环境,也为固定HRP提供了大的比表面积,从而增大了HRP的负载量。制备的生物传感器对H2O2有较好的电催化作用,并在6.67×10-6~1.31×10-3mol/L范围内与响应电流呈良好的线性关系,检出限为7.3×10-7mol/L,米氏常数为0.411 mmol/L。

氨基吡啶修饰碳纳米管的制备及其与辣根过氧化酶的相互作用

用重铬酸钾氧化法获得了表面羧基化的碳纳米管(MWCNT-COOH),进一步通过酰胺化反应合成了2-氨基吡啶修饰的碳纳米管(MWCNT-AP).利用傅里叶变换红外(FT-IR)光谱、核磁共振氢谱(1HNMR)、X射线光电子能谱(XPS)等对合成的碳纳米管进行了表征.透射电镜(TEM)结果表明MWCNT-COOH在乙醇等极性溶剂中易于簇集,而MWCNT-AP溶液具有良好的分散性和稳定性.辣根过氧化酶(HRP)可通过物理作用吸附于MWCNT-AP和MWCNT-COOH表面,负载量分别为187.5和153.0μg·mg-1.HRP被吸附后,其Soret带明显红移,说明HRP与MWCNT-AP或MWCNT-COOH的结合位点位于血红素辅基的附近.圆二色谱结果表明MWCNT-AP对HRP的二级结构也有一定影响.酶动力学实验结果表明MWCNT-AP能有效地吸附HRP及其底物3,3′,5,5′-四甲基联苯胺(TMB),并使HRP的酶催化反应最大速率(vmax)显著提高.

乳过氧化酶体系的抗菌活性

乳过氧化酶体系的抗菌活性ＡｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌＡｃｔｉｖｉｔｙｏｆｔｈｅＬａｃｔｏｐｅｒｏｘｉｄａｓｅＳｙｓｔｅｍ宋焕禄ＳｏｎｇＨｕａｎｌｕ马力远ＭａＬｉＹｕａｎ（北京轻工业学院生物化工教研室北京１０００３７）（ＢｅｉＪｉｎｇＬｉｇｈｔＩｎｄｕｓ...

仿生硅化固定化葡萄糖氧化酶与辣根过氧化酶研究

采用分步法将仿生硅化与脂质体技术相结合,模拟细胞微结构,以卵磷脂为原料,制备脂质体微囊,以胺类为诱导剂,在其表面硅化形成氧化硅壳层,实现对葡萄糖氧化酶(GOx)与辣根过氧化酶(HRP)双酶固定。研究了超声时间、诱导剂PDADMA用量、硅前驱体水解液(TMOS)用量、Triton X-100浓度等因素对固定化酶活性影响。结果表明,在200μL PDADMA、0.7 m L TMOS、超声50 min制得的固定化酶活性最高,能迅速硅化形成直径200 nm左右的球形微囊。在此优化条件下制备的固定化酶经重复使用7次,依然达到初始催化酶活的61.46%,经一个月冷藏后酶活仍能达到最初的74.1%。可见,经过固定化,双酶系统的稳定性得到了显著提高。

妊娠期糖尿病与血硒水平及谷胱甘肽过氧化酶活性的研究

目的研究血硒水平及谷胱甘肽过氧化酶(GSH-Px)与妊娠期糖尿病(GDM)发生的关系。方法选择2011年1月至2012年12月就诊于该院的孕妇共1 360例,其中68例为GDM患者(观察组),另随机抽取非GDM孕妇113例作为对照组,对比两组患者血清中的血硒水平及GSH-Px活性。结果对照组血硒水平及GSH-Px活性均高于观察组,对照组与观察组血硒水平分别为(3.07±0.51)、(2.06±0.41)mmol/L,GSH-Px活性分别为(197.23±18.73)、(151.35±19.67)U,两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论血硒水平及抗过氧化酶活性降低可能是GDM的发病原因之一。