论过氧化麦角甾醇衍生物通过调控Wnt/β-catenin信号通路抑制乳腺癌细胞的迁移和侵袭

探究过氧化麦角甾醇衍生物(EP-3P)对人乳腺癌MDA-MB-231细胞迁移和侵袭的影响及机制。方法采用细胞划痕法、Transwell小室法检测细胞迁移和侵袭能力;蛋白免疫印迹法检测蛋白的表达水平。结果 与对照组比较,不同浓度的EP-3P显著降低β-catenin和Cyclin D1的表达水平,显著增加糖原合成激酶-3β(GSK-3β)表达水平(P<0.05,P<0.01)。与对照组比较,20 μmol/L的EP-3P组显著降低细胞迁移、侵袭数、β-catenin表达水平(P<0.01);与EP-3P组比较,EP-3P+BML284组抑制细胞迁移和侵袭的作用显著减弱(P<0.05);β-catenin的表达水平显著升高(P<0.05)。结论 EP-3P可能通过调控Wnt/β-catenin信号通路抑制MDA-MB-231细胞的迁移和侵袭。

过氧化麦角甾醇衍生物对人三阴性乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的研究过氧化麦角甾醇衍生物EP-3P对人三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖、迁移和侵袭的影响,为乳腺癌治疗相关药物的开发提供参考。方法采用MTT法检测0(空白对照)、1.25、2.5、5、10、20、40μmol/L EP-3P作用于MDA-MB-231细胞24、48、72 h后细胞的增殖情况。以0(空白对照)、5、10、20μmol/L EP-3P作用于MDA-MB-231细胞24 h后,分别采用细胞划痕法、Transwell小室法检测细胞迁移和侵袭能力,采用流式细胞术分别测定细胞凋亡和周期分布情况,并采用Western blot法检测细胞中B淋巴细胞瘤2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、胱天蛋白酶3(caspase-3)、活化的caspase-3(cleaved-caspase-3)、细胞色素C(Cyt-C)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、MMP-9蛋白的表达水平。结果与空白对照比较,2.5、5、10、20、40μmol/L EP-3P均可显著升高细胞的增殖抑制率(P<0.05或P<0.01),且呈浓度和时间依赖趋势。10、20μmol/L EP-3P作用24 h后,均可显著降低/减少细胞迁移愈合率和侵袭细胞数(P<0.01),将细胞周期阻滞于G_(2)/M期(P<0.05或P<0.01),显著升高细胞的凋亡率(P<0.05),并且可显著上调细胞中Bax、Cyt-C、cleaved-caspase-3蛋白表达和下调细胞中Bcl-2、caspase-3、MMP-2、MMP-9蛋白表达(P<0.01)。结论EP-3P可通过线粒体介导的内源性caspase途径抑制人乳腺癌细胞MDA-MB-231的增殖、迁移和侵袭,并可诱导细胞发生凋亡。

香菇中麦角甾醇的提取纯化、表征及其抗氧化活性

为建立一种香菇中麦角甾醇检测的三波长分光光度法,通过单因素试验和响应面试验获得最佳提取条件,并利用溶剂提取法、重结晶法及制备型高效液相法纯化香菇麦角甾醇,对其进行表征及抗氧化活性研究。结果表明,三波长分光光度法可以有效消除杂质和其他背景因素带来的影响,精确测定香菇中麦角甾醇的含量。香菇麦角甾醇的最佳提取条件为超声时间90 min、料液比1∶59(g/mL)、提取温度69℃,麦角甾醇含量的预测值为3.868 78 mg/g,实测值为3.781 4 mg/g。纯化后单体麦角甾醇的纯度可达96%以上,清除DPPH自由基、ABTS+自由基的半数抑制浓度IC_(50)分别为(0.72±0.06)、(0.17±0.01)mg/mL。所建立的方法重复性、稳定性、精密度良好,是一种快速准确测定香菇麦角甾醇的检测方法,且纯化的麦角甾醇具有良好的抗氧化活性。

麦角甾醇衍生物通过抑制NF-κB通路诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡

目的探讨麦角甾醇衍生物(ED)对人宫颈癌HeLa细胞凋亡的影响及其可能机制。方法采用MTT法测定ED对人宫颈癌HeLa细胞增殖的影响,流式细胞检测ED对HeLa细胞周期的影响,Hoechst 33258染色测定ED对HeLa细胞凋亡的影响,免疫荧光分析ED对HeLa细胞NF-κB p65复合物的细胞内定位的影响,Western blot检测ED对HeLa细胞NF-κB信号通路相关蛋白表达的影响。结果 ED对HeLa细胞的IC50值为(9.1±1.64)μg·m L^(-1),可使HeLa细胞周期阻滞于S期,诱导HeLa细胞凋亡,抑制HeLa细胞中NF-κB的活化和核转位,减少NF-κB依赖的Bcl-2、Survivin、COX-2和VEGF蛋白的表达。结论ED可能通过抑制NF-κB信号通路活化,减少Bcl-2、Survivin、COX-2和VEGF蛋白的表达,诱导宫颈癌HeLa细胞凋亡。

香菇中麦角甾醇提取、表征及抗氧化、降胆固醇特性

采用超声辅助皂化法提取香菇(Lentinula edodes)子实体麦角甾醇,通过单因素实验和正交实验优化提取条件,对麦角甾醇纯化产物表征、光稳定性进行分析,并测定其对羟基、DPPH自由基清除率和降胆固醇活性。结果表明:麦角甾醇最佳提取条件为料液比1∶40 (g:mL)、0.04 g·mL^(-1) KOH、超声温度70℃、超声时间70 min,在此条件下麦角甾醇得率为(0.81±0.02)%,麦角甾醇纯化产物纯度为(86.18±3.49)%。与白炽光比较,紫外光照射麦角甾醇纯化产物的存留率显著降低。在实验范围内,1 mg·mL^(-1)麦角甾醇纯化产物对羟基、DPPH自由基清除率较高,清除羟基、DPPH自由基的IC50分别为(12.96±1.36)、(6.68±0.98) mg·mL^(-1)。麦角甾醇纯化产物显著降低胆固醇在胶束中的溶解度。研究结果可为香菇麦角甾醇的利用提供参考。

桦褶孔菌中麦角甾醇类化学成分及其抗氧化活性研究

对桦褶孔菌子实体的化学成分及其抗氧化活性进行研究。采用多种柱色谱技术对其甲醇提取物进行分离纯化,使用波谱分析技术鉴定6种麦甾醇类化合物的结构。其中,化合物麦角甾-7,22-二烯-6β-甲氧基-3β, 5α-二醇、3β, 5α-dihydroxy-(22E, 24R)-ergosta-7, 22-dien-6-one、3β, 5α,9α-trihydroxyergosta-7, 22-dien-6-one首次从桦褶孔菌中分离得到。利用DPPH自由基清除模型,对6种化合物进行抗氧化活性评价。结果表明:化合物的浓度在400μg/mL时,对DPPH自由基的清除率均低于10%,虽不能全面地评价其抗氧化活性,但具有一定的指导意义。本研究对桦褶孔菌的化学成分进行研究,为进一步对其资源的开发利用提供参考依据。

胆固醇氧化衍生物在动脉粥样硬化中的研究进展

胆固醇氧化衍生物多达上百种。具有代表性质的胆固醇氧化衍生物主要有7-酮基胆固醇、7-酮基胆甾醇-9-羧基壬酸酯、25-羟基胆固醇、7β-羟基胆固醇、3β,5α,6β-三羟基胆固烷等化合物,这些衍生物广泛存在于胆固醇膳食、高胆固醇血症的血浆、动脉组织、人动脉粥样硬化斑块、斑块内的泡沫细胞、以及氧化型低密度脂蛋白中。大量实验表明胆固醇氧化衍生物对动脉粥样硬化形成有关因素(炎症、氧化应激、凋亡)具有促进作用。提示,胆固醇氧化衍生物在动脉粥样硬化的发生和发展中具有重要的作用。

麦角甾醇过氧化物的抑菌活性研究

利用色谱和光谱技术从猴头菌(Hericium erinaceum)干燥子实体中分离并鉴定出麦角甾醇过氧化物,并对该化合物进行抑菌活性筛选实验。结果表明,麦角甾醇过氧化物在1 mg/mL浓度下对金黄色葡萄球菌、苏云金芽孢杆菌、枯草杆菌和大肠杆菌等5种细菌有显著的抑制效果。

1-[2-苄氧基-2-(2,4-二氟苯基)乙基]-1H-1,2,4-三唑衍生物的合成及杀菌活性

以抗真菌药物益康唑为先导化合物,设计合成了17个1-((2-取代苄基)氧基)-2-(2,4-二氟苯基)乙基)-1H-1,2,4-三唑类目标化合物,其中14个为首次报道,其结构均经1H NMR、13C NMR和HRMS确认。采用菌丝生长速率法测定了目标化合物对7种植物病原菌的抑制效果,并对毒力较高的化合物进行了其对水稻纹枯病和小麦条锈病的盆栽和田间药效试验,而且测定了其对水稻纹枯病菌麦角甾醇生物合成的抑制作用。结果表明:大多数目标化合物对测试病原菌菌丝生长有较强的抑制作用,尤其对水稻纹枯病菌和番茄早疫病菌的抑制作用最好,其中对水稻纹枯病菌的EC50值均低于3μmol/L,明显高于对照药剂苯醚甲环唑和益康唑;化合物4a、4b、4c、4g、4i和4l对番茄早疫病菌的EC50值均低于10μmol/L。在浓度为250μmol/L时,化合物4b和4i对小麦条锈病的盆栽防效均超过70%,在有效剂量为240 g/hm^2时,化合物4b对小麦条锈病的田间防效达到81.93%。而且,化合物4b和4i在100μmol/L时可有效抑制水稻纹枯病菌麦角甾醇的生物合成,抑制效果在80%左右。

麦角甾醇生物合成途径中的抗真菌药作用靶酶

麦角甾醇是真菌细胞膜的重要结构组成成分 ,在真菌生活中起重要作用。一些不同类型的化合物通过作用于真菌麦角甾醇生物合成途径中不同环节的酶 ,干扰真菌麦角甾醇生物合成 ,发挥抗真菌作用。在麦角甾醇生物合成途径中 ,目前已知与抗真菌药作用有关的靶酶分别有羊毛甾醇 C- 14α去甲基化酶、角鲨烯环氧化酶、Δ7,8异构酶和Δ1 4 还原酶等 ,他们的结构和功能不同 。

核素掺入研究布替萘芬对真菌麦角甾醇生物合成的影响

目的研究抗真菌药物布替萘芬对真菌麦角甾醇生物合成的影响。方法通过真菌活细胞[1-^(14)C]乙酸钠掺入和离细胞液[2-^(14)C]甲羟戊酸掺入实验,考察布替萘芬对真菌麦角甾醇生物合成的影响。结果布替萘芬能使真菌中麦角甾醇的合成减少,而增加角鲨烯的含量,两种方法测得布替萘芬对真菌细胞麦角甾醇生物合成的IC_(50)分别为136.19 nmol/L和203.15 nmol/L。结论布替萘芬为角鲨烯环氧化酶抑制剂,核素掺入法能定量考察布替萘芬对角鲨烯环氧化酶的抑制活性,且效果优于薄层色谱扫描法。

傣药“担宾浩”中过氧化麦角甾醇的分离和鉴定研究

首次对傣药“担宾浩”一稻珊座孢 Corallocytostroma oryzae Yu et Zhang进行系统的化学成分分离和鉴定研究,通过碳谱和氢谱信号用二维谱技术及文献报道的有关数据比较指定了其主要成分为过氧化麦角甾醇.

抑制麦角甾醇生物合成的杀菌剂

近十几年来,陆续出现了一些新内吸杀菌剂,它们共同的作用机制都是对病原菌体内麦角甾醇生物合成有抑制作用,因此称为“麦角甾醇生物合成抑制剂”(Ergogterol biosynthesis inhibitors),简称EBIs。在已商品化的品种中,这类杀菌剂有多种不同的化学结构,如果说在化学上有什么共同点的话。

松橄榄中的麦角甾醇类过氧化物

从松橄榄（Ｃｒｙｐｔｏｐｏｒｕｓｖｏｌｖａｔｕｓ）子实体中首次分离到４个麦角甾醇类化合物，其中３个是过氧化物；这些化合物的碳谱和氢谱信号通过二维谱技术及与文献报道的有关数据比较得到了指定，另外还提出了它们的一个可能的生源途径。

内生真菌MG-9的主物质麦角甾醇的分离鉴定及抗氧化活性分析

从疏花水柏枝中的一株内生真菌MG-9的粗提物中重结晶出一种主物质,采用NMR、MS等现代波谱学技术鉴定这种主物质为麦角甾醇.以LDH(乳酸脱氢酶)、SOD(超氧化物歧化酶)、caspase 3、caspase 9的酶活表达情况为指标,研究了MG-9主物质对神经细胞SH-SY5Y的毒害作用及抗氧化保护作用机理.结果表明:麦角甾醇在6.25-25μg/mL时对神经细胞SH-SY5Y毒性的量效关系不明显,而在6.25μg/mL时对神经细胞SH-SY5Y的氧化损伤保护具有更好的效果,将神经细胞SH-SY5Y在H_2O_2(800μmol/L)胁迫下的相对存活率提高了74.5%.并且麦角甾醇可通过抑制凋亡蛋白caspase 3的活性来达到对神经细胞SH-SY5Y的抗氧化保护作用.

硫辛酸麦角甾醇酯的制备及抗氧化作用

为改善麦角甾醇的溶解性,通过化学法在常温条件下制备硫辛酸麦角甾醇酯,并研究硫辛酸麦角甾醇酯在油中的抗氧化性。通过单因素试验,确定反应的最佳工艺条件为:以DMAP/EDC/Et_3N为催化剂,麦角甾醇浓度80 mmol/L,硫辛酸:麦角甾醇:DMAP:EDC:Et_3N摩尔比2. 0:1. 0:0. 2:1. 2:1. 5,溶剂二氯甲烷,反应温度25℃,反应时间20h;该条件下最终酯化率可达到91%以上。麦角甾醇硫辛酯在油中的溶解度约为麦角甾醇的2倍,抗氧化效果约为麦角甾醇的1. 5倍。

过氧化麦角甾醇分子的密度泛函理论研究

采用密度泛函理论(DFT)方法,在B3LYP/6-311+G(2d,p)水平上对过氧化麦角甾醇进行了计算研究。优化得到了过氧化麦角甾醇分子的结构,给出了分子的键长、键角、二面角等参数,并对其进行了1HNMR光谱、IR光谱、UV-Vis光谱理论模拟和自然电荷分析。自然电荷计算表明,羟基O和H原子很可能是关键的活性中心。理论计算结果与实验值符合的很好。

艾纳香中抗炎活性成分虚拟筛选及麦角甾醇过氧化物对NF-κB信号通路的影响

目的探讨艾纳香中靶向TLR_(4)信号通路关键蛋白的抗炎活性成分及作用机制。方法本研究以TLR_(4)信号通路关键蛋白为靶点对艾纳香的化合物进行筛选,并通过MTT、ELISA、Western blot、亚细胞结构定位等方法检测了从艾纳香中筛选出的麦角甾醇过氧化物(ergosterol peroxide,EP)对细胞活性、LPS致细胞炎性因子分泌和NF-κB相关蛋白表达的影响。结果艾纳香中EP、β-谷甾醇、16-贝壳杉烯、胡萝卜甾醇、木犀草素、金丝桃苷、芫花素等具有较好的对接打分;2.3×10^(-5)-9.3×10^(-5)mol·L^(-1)的EP能抑制LPS致RAW264.7细胞TLR信号通路下游蛋白IκB的降解和磷酸化以及NF-κB p65磷酸化,进一步抑制NF-κB p65的入核,从而抑制细胞因子IL-6、IL-1β的分泌。结论通过分子对接技术筛选和抗炎活性检测明确了艾纳香中抗炎物质,并阐明以EP为活性物质的抗炎作用及机制。

高速逆流色谱法用于纵条纹炭角菌中过氧麦角甾醇的分离纯化

过氧麦角甾醇生物活性多样,具有较大开发价值,但传统柱色谱分离手段步骤多效率低,本文建立了高速逆流色谱从纵条纹炭角菌中高效快速制备过氧麦角甾醇的方法。通过高效薄层色谱和高效液相色谱测定分配系数,再利用高速逆流色谱考查了多个溶剂体系的分离效果,确定最佳溶剂体系为:正己烷-乙酸乙酯-乙醇-水(体积比为3∶1∶2∶0.8)。以上相为固定相,下相为流动相,转速为800 r/min(正转),流速为2 m L/min,检测波长为220 nm。制备所得过氧麦角甾醇经13C-NMR和1H-NMR鉴定,并经高效液相色谱分析纯度达到96.05%(峰面积归一化法)。经DPPH体外抗氧化活性测试,发现该化合物在0.2 mg/m L时,对DPPH自由基清除为28.36%,远低于阳性对照抗坏血酸(93.41%),且量价关系也不明显,表明其DPPH自由基清除能力较弱。该方法制备过氧麦角甾醇简便、快速,所得产物纯度高,可用于纵条纹炭角菌中该化合物的分离。

胶陀螺中麦角甾醇的结构修饰及抗结核作用的研究

目的研究麦角甾醇及类似物7-脱氢胆甾醇氧化后的抗结核作用。方法从胶陀螺中分离得到麦角甾醇,对其氧化得到麦角甾醇过氧化物;并对麦角甾醇类似物7-脱氢胆甾醇进行氧化得7-脱氢胆甾醇过氧化物;用MTT法检测其氧化产物的抗结核活性。结果麦角甾醇过氧化物及其类似物的过氧化物当浓度分别超过20,50μg/m l时有抗结核活性。结论麦角甾醇过氧化物及7-脱氢胆甾醇过氧化物具有一定的抗结核活性。