血浆、红细胞和组织中硒谷胱甘肽过氧酶的测定方法及健康成人的测定值

在Paglia法的基础上建立了血浆和组织中硒谷胱甘肽过氧酶的测定方法。对测定红细胞中硒谷胱甘肽过氧酶加以改进,制备红细胞压积液。以Hicn法测定Hb的含量,方法简单,重复性好。同时观察了不同的温度和时间对酶活性的影响。本文还测定了健康成人血浆和红细胞硒谷胱甘肽过氧酶值。

锡矿尘对大鼠体内谷胱苷肽过氧酶活性的影响

将锡矿尘经气管注入大鼠肺内后,观察到大鼠肺组织及血中谷胱苷肽过氧酶(GSH-px)活性显著高于对照组;染锡矿尘动物饮绿茶后,体内GSH-px活性显著低于单纯染锡矿尘组。结果提示,脂质过氧化可能参与了锡矿尘损伤肺组织的机理,绿茶对锡矿尘诱导的脂质过氧化有一定抑制作用。

非特异性过氧合酶发酵优化及在H_(2)O_(2)检测中的应用

非特异性过氧合酶(unspecific peroxygenase,UPO)能够利用过氧化氢(H_(2)O_(2))催化多种氧化反应,在工业中具有很大的应用潜力。针对Aae UPO在毕赤酵母中表达量低以及发酵工艺不清的问题,通过摇瓶发酵优化以及正交试验确定发酵培养基条件,并进一步通过5 L发酵罐进行放大。结果表明,毕赤酵母摇瓶水平高效表达Aae UPO的基本发酵条件:甲醇浓度1.00%、培养基初始pH5.5、蛋白胨浓度1.5%、酵母粉浓度1.5%,最优发酵条件下粗酶液酶活达到18.2 U/mL。在摇瓶水平发酵试验的基础上进行5 L发酵罐放大试验,优化后以接种量10%、诱导温度30℃、流加甲醇作为最终工艺条件。最终得到的细胞湿重244 g/L,最高酶活为25.1 U/mL,相较于初期未优化酶活提升了91.6%。将Aae UPO用于H_(2)O_(2)检测,Aae UPO对于H_(2)O_(2)具有较好的检测性能,检测限达到5μmol/L,抗干扰性能强。

苯系物对仿刺参肠、呼吸树谷胱甘肽过氧化物酶基因表达的影响

选择我国黄、渤海重要底栖生物—仿刺参幼参为受试生物,采用实时定量PCR方法,检测6种苯系物（苯、甲苯、乙基苯、邻—二甲苯、间—二甲苯、对—二甲苯）对仿刺参肠、呼吸树两种组织中谷胱甘肽过氧化物酶基因相对表达量的影响。结果表明,6种苯系物造成仿刺参呼吸树、肠组织中谷胱甘肽过氧化物酶基因相对表达量显著变化,并具有显著的剂量—效应关系。其中,苯、邻—二甲苯、对—二甲苯导致呼吸树中谷胱甘肽过氧化物酶基因mRNA表达极显著下调,下调倍数为2.6~41.7;甲苯、间—二甲苯导致呼吸树中谷胱甘肽过氧化物酶基因mRNA表达极显著上调,上调倍数为2.6~86.4。邻—二甲苯、间—二甲苯、对—二甲苯处理组肠谷胱甘肽过氧化物酶基因mRNA表达极显著下调,下调倍数为1.2~38.5。6种苯系物对仿刺参具有氧化胁迫作用。

栉孔扇贝血淋巴中酚氧化酶和髓过氧物酶活性

用电镜细胞化学和分光光度技术对栉孔扇贝血淋巴中的酚氧化酶（ＰＯ）和髓过氧物酶（ＭＰＯ）进行了研究。结果表明：细胞质中直径分别为３００～４３０ｎｍ和１３０～２００ｎｍ的大、小２种颗粒呈ＰＯ强阳性；次级溶酶体和小颗粒呈ＭＰＯ强阳性。生化测定，血清中存在ＰＯ和ＭＰＯ活性，血细胞仅有ＭＰＯ活性。以ＴＭＢ为底物测得血清中不依赖卤素的ＭＰＯ活力为１０７．２Ｕ，以二乙醇胺为底物测得血清中依赖卤素的ＭＰＯ活力为５３．６Ｕ。血清中ＰＯ和ＭＰＯ的最适ｐＨ分别为６．０和６．５，最适温度分别为４５℃和３５℃。

槐种子发育过程中子叶细胞显微结构的变化和过氧化物酶同工酶变化的动态

槐（SophorajaponicaL．）种子发育过程中，子叶细胞大量合成和积累储藏物质，光镜和电镜下用组织化学方法观察到开花后30d，叶肉细胞高度液泡化，其中分布着大量的质体、粗面内质网、一些线粒体和小脂体。淀粉粒开始积累。开花后60d，淀粉粒和脂体不断长大，数量明显增多，液泡中蛋白体开始形成。从花后90d开始，液泡中有大量蛋白体形成且不断长大，有些蛋白体变得不规则形。至种子成熟期，叶肉细胞几乎完全被蛋白体及脂体所填充。淀粉粒及大多数细胞器消失。基于上述观察，还对种子发育过程中子叶细胞过氧化物酶活力及同工酶港的变化进行了观察和分析。

硒对辐射所致过氧化脂质含量及谷胱甘肽过氧化物酶活性的影响

以肝、脾组织中过氧化脂质(LPO)含量及谷胱甘肽过氧化物酶(GSHL-Px)活性为指标探讨硒的辐射防护效应。实验结果表明:BALB/C纯系雄性小鼠经3Gy ^(60)Co γ射线照射后3天,肝、脾组织LPO生成量比未照射者均显著增多,而GSH-Px活性却都显著降低;但于照射前连续7天每日经口灌胃亚硒酸钠溶液0.2ml(含硒12.5μg)的实验组动物,肝、脾组织LPO含量均明显少于照射对照组,而GSH-Px活性都显著高于照射对照组,结果提示,通过降低LPO含量和增加GSH-Px活性,硒对小鼠可能有辐射防护作用。

石蜡切片中的组织内源性过氧化物酶活性及消除方法

体内许多组织细胞内存在过氧化物酶活性,从而导致辣根过氧化物酶标记免疫组化染色出现假阳性结果。为此,组织切片在染色前需采用阻断措施,以消除内源性过氧化物酶的活性。

环氧化酶-2和血管内皮生长因子与甲状腺癌颈淋巴转移的关系

目的探讨环氧化酶-2(COX-2)和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)与甲状腺乳头状癌颈淋巴转移的相关性。方法采用免疫组织化学方法对79例甲状腺乳头状癌患者肿瘤组织的COX-2和VEGF蛋白表达进行检测,其中伴有颈淋巴结转移(N+)的甲状腺乳头状癌患者46例,不伴颈淋巴结转移(N-)患者33例。结果颈淋巴结转移组(Ⅰ～Ⅱ期)甲状腺乳头状癌原发灶标本COX-2和VEGF的表达阳性率分别为81.6%和86.8%,不伴颈淋巴结转移组甲状腺乳头状癌原发灶标本COX-2和VEGF的表达阳性率分别为54.5%和66.7%,两组之间差异有统计学意义(P<0.05)。在颈淋巴结转移组中,原发灶组织COX-2和VEGF的表达具有相关性(P<0.05)。结论COX-2在甲状腺乳头状癌颈淋巴结转移中起着重要作用,其作用可能通过调控VEGF途径来实现。

植物的乙醇酸氧化酶

乙醇酸氧化酶存在于植物细胞过氧物酶体中,是一种黄素蛋白,以FMN为辅基,含8个亚基。催化乙醇酸氧化为乙醛酸和乙醛酸氧化为草酸。受光活化。硫化钠和氰化物促进其活性:巯基抑制剂、α-羟基磺酸类、α-羟基丁炔酸抑制其活性。多种代谢物对其活性有调节作用。为光呼吸的关键酶之一,其活性随植物发育、矿质营养及感病而发生变化。

慢性心房纤颤犬心房组织中髓过氧物酶的变化

目的探讨慢性心房纤颤(房颤)犬心房组织中髓过氧物酶(MPO)的变化及其意义。方法健康杂种犬20条,随机分为房颤组(n=10)和对照组(n=10)。房颤组使用永久起搏器起搏24周,制备房颤犬模型;对照组不置入起搏器。取心房组织标本,分别采用ELISA法、同位素稀释气相色谱质谱法、Masson染色、明胶酶谱法测定MPO含量、3-氯酪氨酸含量、胶原容积分数(CVF)、基质金属蛋白酶-2和9(MMP-2、MMP-9)活性。结果房颤组心房肌组织MPO含量、3-氯酪氨酸含量、CVF、MMP-2和MMP-9活性较对照组显著升高(P<0.05)。MPO含量与CVF显著正相关(P<0.05)。结论 MPO可能是慢性房颤发生和维持的重要介质。

催化分光光度法快速测定血清过氧化氢酶活性

目的 :建立一种简单快速的血清过氧化氢酶活性分光光度测定方法。方法 :利用过氧化氢酶催化分解底物过氧化氢 ,剩余的过氧化氢与钼酸铵、碘化钾反应生成单质碘 ,后者与淀粉反应生成蓝色 ,其蓝色深浅与酶的活性成反比。结果 :底物过氧化氢浓度在 0 .0 2 5～ 10 0 μmol/ml范围内线性关系良好 ,γ为 0 .9995 ,检测限为 0 .0 2 5 μmol/ml。用本法测定 3 16例正常人血清 ,过氧化氢酶活性为 5 0 .78± 17.46KU /L。结论 :本方法灵敏度高 ,稳定性较好 ,简单快速 ,适用于血清过氧化氢酶活性的测定。

辣根过氧化物酶及其同工酶

过氧化物酶是一个古老的酶,远在1810年,Planche用辣根浸出液染蓝了愈创树脂。1822年Schonbein发现动植物体内含有某种物质,能使双氧水氧化一些有机物,他还认为对双氧水的激活和分解是通过存在于生物体内的同一个未知物质。直到1898年,Linossier才把它正式取名为过氧化物酶。

过氧物酶体多功能酶2中固醇载体蛋白2结构域的功能

过氧物酶体多功能酶 (包括Ⅰ型、Ⅱ型 ,简称MFE1、MFE2 )在哺乳类动物的脂类代谢中发挥其重要作用 .MFE1具有 2 烯酰CoA水合酶 1和 (3S) 羟脂酰CoA脱氢酶的活性 ,而MFE2具有 2 烯酰CoA水合酶 2和 (3R) 羟脂酰CoA脱氢酶的活性 ,两者均催化烯酰CoA在过氧物酶体β 氧化途径中的第 2步和第 3步反应 .MFE1与MFE2的氨基酸序列不具有任何同源性 ,并且它们的底物特异性也不相同 .比较哺乳类MFE1及酵母MFE2发现 ,哺乳类MFE2羧基末端带有由 12 5个残基组成的固醇载体蛋白 2 (简称SCP2 )结构域 ,其功能是未知的 .为了研究SCP2结构域在MFE2中的功能 ,将人MFE2、MFE2ΔSCP2 (删除MFE2中的SCP2 )、脱氢酶结构域、水合酶结构域以及SCP2结构域分别在E .coli中表达 ,并经纯化得到相应的重组蛋白 .通过测定 2 烯酰CoA水合酶 2和 (3R) 羟脂酰CoA脱氢酶对烯酰CoA的催化活性发现 ,带有SCP2结构域的重组蛋白的酶活力及催化效率高于删除SCP2的突变体蛋白 .实验结果表明 ,SCP2结构域可能通过增强MFE2与脂酰CoA的结合力 。

C_3植物过氧物酶体酶活性的比较

菠菜等9种C_3植物过氧物酶体中与光呼吸有关的酶活性的差异,不足以说明不同 C_3植物的光呼吸明显差异,它可能是参与光呼吸的酶组成不同效率的多酶体系所致,或者是由过氧物酶体以外的原因所引起。

非特异性过氧合酶GmaUPO的重组表达及生化表征

非特异性过氧合酶(Unspecific Peroxygenase,UPO)因在催化有机底物时具有独特的立体选择性和对映选择性而在工业生产中具有广阔的应用前景。本研究从纹缘盔孢伞(Galerina marginata)的基因组中发现了一个假定的非特异性过氧合酶基因(以下简称GmaUPO),通过全基因合成技术获得了GmaUPO的基因序列,并构建了GmaUPO诱导型表达的毕赤酵母X-33基因工程菌。在最佳的发酵条件下,发酵液酶活力达到6 U/L,重组GmaUPO分子质量约为40 ku,其最适反应条件为35℃、pH 9.0。重组GmaUPO可在温和条件下利用H_(2)O_(2)高效催化芳环类物质中的惰性C—H键羟化,合成芳环类含氧化合物,在香精香料等领域具有巨大的应用潜力。

过氧物酶体病(综述)

过氧物酶体病(Peroxisomal Disorders,PD)是一组新近认识的以过氧物酶体结构和/或功能异常为特征的遗传性疾病。自1964年Bowen等首次报道脑-肝-肾综合征(即Zellweger综合征,ZS)至今,已发现了近10种PD。

妊高征患者血清过氧化物岐化酶的变化及其意义

测定了25例妊娠高血压综合征(妊高征)患者血清人过氧化物岐化酶-1(hSOD-1)含量。结果表明重度妊高征患者血清hSOD-1含量为851.62±70.97mg/L,显著高于正常对照、正常妊娠组及轻、中度妊娠高征组(分别为148.84±60.53mg/L,894.12±122.21mg/L和390.12±26.15mg/L)(P<0.01)。有肝、肾功能损伤者,血清hSOD-1明显高于无肝、肾操作者(P<0.001)对12例患者动态观察发现产前血清hSOD-1含量明显高于产后24小时血清hSOD-1含量(分别为709.35±72.78mg/L与343.42±33.10mg/L,P<0.001)。还发现妊高征患者血清hSOD-1含量与外周血白细胞计数量显著正相关(r=0.5015,P<0.02)。提示氧自由基可能参与了妊高征的发病,而血清hSOD-1的增高可能与中性粒细胞释放自由基有关。

过氧化物酶体病

过氧化物酶体病是一组新近认识的遗传性代谢病,一般分为广泛性过氧化物酶体功能缺陷和特异性单个过氧化物酶体酶缺陷两大类。其临床症状多为代谢障碍引起毒性产物蓄积所致,可累及全身各个器官,在不同年龄时期表现各异。主要包括特殊面容、肌张力低下、精神运动性迟缓、惊厥、白内障、视觉听力障碍、肝肾损害、瘫痪、骨钙化等。病变常呈进行性,预后不良。其诊断除根据临床表现外,尚可借助于各种生化检查,部分病例已能进行产前诊断。对于单个酶缺乏者通过控制代谢产物蓄积可望减少毒性,但对广泛性酶缺陷者尚无特异治疗方法。