糖蛋白PAGE分离后的糖基显色法

鸡卵清蛋白通过SDS-PAGE分离后,用过碘酸-希夫(PAS)显色法可以使卵清蛋白显红色,而用糖苷酶去除卵清蛋白的糖基可以去除相应的红色。考马斯亮兰染色结果显示,去糖基后的卵清蛋白分子量略有减小。可见,PAS可方便地使糖蛋白呈现红色。

两种鼠蚤成熟过程中组织化学研究Ⅰ糖原和PAS物质

目的 :探讨不等单蚤Monopsyllnsanisus(Rothchild)和缓慢细蚤Leptopsyllasegnis(Sch nherr)吸血消化成熟过程中糖原和PAS物质的变化。方法 :用高碘酸 希夫反应 (periodicacid SchiffreactionPAS)法显示未吸血蚤、吸血后不同消化时间蚤体内糖原和PAS物质。结果 :2种蚤糖原和PAS物质以脂肪体含量最高。吸血后成蚤消化道各部分PAS反应均有增高 ,不同消化时间 (2 4、4 8、72h)不存在显著差异。 2种蚤中雌蚤吸血后卵黄细胞发育过程中PAS反应的变化相似 ,但不等单蚤发育较缓慢细蚤迟缓。结论 :吸血将导致 2种蚤消化道糖原不同程度的增加 。

化学修饰对川木通凝集素活性及构象的影响

川木通干燥茎蛋白粗提液经DEAE-Sepharose离子交换柱和Sephacryl S-100分子筛分离后得到川木通凝集素(命名为CML)。Tricine SDS-PAGE分析表明CML的分子量为12.5 kDa,Sephacryl S-100分子筛分析CML的表观分子量为25.8 kDa,表明CML是由两个亚基组成的同源二聚体。过碘酸-希夫(periodic acid Schiff reacition,PAS)染色结果表明CML为糖蛋白,糖含量为12.2%。氨基酸残基修饰色氨酸(Trp)、精氨酸(Arg)和-SH CML凝血活性的必需基团。每分子CML中含有6个Trp。荧光光谱显示这些基团修饰后荧光强度都有不同程度的下降,最大发射峰位置也相应变化,表明这些残基修饰导致蛋白质构象变化。酪氨酸(Tyr)、苏氨酸(Ser/Thr)和组氨酸(His)修饰后,活性并没有变化,但荧光强度显著减弱,说明修饰后CML分子的活性中心的必需构象并没有受到破坏,但氨基酸的修饰导致色氨酸的微环境发生变化。