CD40信号联合细胞因子体外制备过继免疫治疗细胞的实验研究

目的:探索一种新的过继免疫治疗细胞体外培养的方法。方法:从正常人外周血分离单个核细胞(PBMCs),经过CD40激发型单抗5C11、细胞因子IFN-α、IL-7、IL-2(CD40激发组)诱导并扩增,光镜下观察其细胞形态及计数,进行动态增殖观察,并在第9天收集细胞,对其淋巴细胞亚群、NKT细胞和调节性T细胞(Treg)的比例进行分析,同时与常规CIK细胞(CD3激发组)进行比较性分析。结果:两组培养细胞中CD4+/CD8+细胞的比例无明显差异;但CD3激发组中的Treg数量和比例远高于CD40激发组,而CD3+CD56+的NKT细胞低于CD40激发组,同时,CD40激发组出现了一群单核-NK-DC(Mo-NKDC)样细胞。结论:本实验所建立的新型过继免疫治疗细胞培养方法能提高具有肿瘤杀伤能力的NKT细胞的比例,同时显著减少Treg的数量,有望为肿瘤细胞过继免疫治疗开拓新的方案。

异基因造血干细胞移植联合供者CIK细胞过继免疫治疗复发难治血液肿瘤11例临床分析

目的观察异基因干细胞移植(allogeneic stem cell transplantation,allo-HSCT)联合供者细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine induced killer cells,CIK)过继免疫治疗复发难治血液肿瘤的效果。方法回顾性分析我科2005年3月至2012年3月行供者CIK细胞输注的allo-HSCT后复发难治血液肿瘤患者11例临床资料,其中急性髓系白血病3例,急性淋巴细胞白血病1例,慢性髓系白血病2例,多发性骨髓瘤1例,淋巴瘤4例。患者均进行亲缘allo-HSCT后给予供者CIK输注。结果移植后11例患者造血均重建,CIK细胞输注的中位次数为4(2～7)次,中位细胞总数为11.9×106/kg[(5.8～86.5)×106/kg];11例患者原发肿瘤均获完全缓解。4例移植后2～4个月再次复发(急性髓性白血病髓外复发1例,多发性骨髓瘤2例,慢粒急变1例),经供者CIK输注、停用免疫抑制剂后重获完全缓解3例。4例死亡,其中2例死于特发肺综合征,均为单倍型移植后原发肿瘤复发停用免疫抑制剂所致,另2例死于严重感染。总体中位生存时间9(2～53)个月;7例生存至今,生存时间12～53个月,除1例MM分子复发外,其余仍处于完全缓解。结论 allo-HSCT联合供者CIK过继免疫治疗血液肿瘤有明显效果,副作用小,值得进一步进行多中心病例对照研究。

T细胞过继免疫治疗法在肿瘤疾病治疗中的应用进展

目前T细胞过继免疫治疗技术已应用于治疗各种疾病,尤其是在肿瘤领域的应用,具有肿瘤抗原特异性的T细胞过继免疫疗法不仅可以在体外实验中诱导肿瘤细胞死亡,而且已经部分应用于临床患者并达到一定的治疗效果,有望成为从基因水平上解决肿瘤疾病的前沿武器。本文对近年来T细胞过继免疫疗法在肿瘤疾病治疗方面的研究进行综述。

靶向肿瘤KRAS突变的T细胞过继免疫治疗

1文献来源Tran E,Robbins PF,Lu YC,et al.T-celltransfer therapy targeting mutant KRAS in cancer[J].N Engl J Med,2016,375（23）：2255-2262.2证据水平4。3背景·过继免疫细胞具有一定的抗肿瘤作用,可能的原因是T细胞具有特异性识别肿瘤抗原表位的免疫活性;·G12D是KRAS基因最常见的突变位点,目前尚缺乏针对KRAS G12D突变蛋白有效的抗肿瘤药物或者疫苗。

T细胞过继免疫治疗恶性实体肿瘤研究进展

过继细胞免疫治疗（adoptive cellular immunotherapy，ACI）在血液系统疾病的临床应用已获得广泛认可，尤其在目前疫苗免疫治疗还存在着不能有效抑制微小残留肿瘤生长等多种因素而限制了其临床应用的前提下，ACI在恶性实体肿瘤治疗中的应用研究也引起了人们的普遍关注。

恶性实体瘤患者自体细胞因子诱导杀伤细胞过继免疫治疗的安全性改进

目的观察恶性实体瘤患者外周血来源的细胞因子诱导杀伤细胞在自体血浆中的增殖特性及静脉回输治疗的安全性。方法用淋巴细胞分离液分离获取50例恶性实体瘤患者外周血单个核细胞,在含10%自体血浆的RPMI-1640培养液中添加rhIFN-γ、Anti-CD3mAb和rhIL-2联合诱导单个核细胞为细胞因子诱导杀伤细胞。在培养第13天进行细胞计数,通过流式细胞术检测细胞免疫表型,并将细胞进行自体回输。结果在培养第13天,细胞因子诱导杀伤细胞得到大量扩增,细胞数增加30.0±5.2倍。CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+和CD3+CD16+CD56+细胞在培养第13天分别占(93.0±6.1)%、(28.4±7.2)%、(65.5±4.5)%和(25.8±12.2)%。恶性实体瘤患者回输自体细胞因子诱导杀伤细胞的治疗过程中未观察到明显的毒副作用,主要表现有畏寒、发热。结论恶性实体瘤患者血浆可以高效扩增自体细胞因子诱导杀伤细胞,临床应用安全可靠,且无明显的毒副作用。

晚期非小细胞肺癌自体T细胞过继免疫治疗后T细胞受体变化

目的探讨肺癌患者经自体T细胞过继在治疗后T细胞受体(TCR)的变化特征及临床意义。方法用分子生物学方法对晚期非小细胞肺癌放化疗结合细胞治疗的患者,免疫细胞治疗前和治疗3个疗程结束后检测TCR表达的变化分析。结果 21例患者中的12例在CD4+TCR基因家族中产生克隆化改变,而这种改变发生在CD8+TCR基因家族有16例。结论外周血TCR克隆化分析可能成为自体T细胞过继免疫治疗的疗效评价指标。

T细胞过继免疫治疗在肿瘤治疗中的临床研究进展

肿瘤的过继细胞免疫治疗（adoptive cell therapy,ACT）是通过输入在体外扩增的经加工处理的免疫细胞促进宿主抗肿瘤免疫,发挥直接的抗肿瘤作用,从而治疗晚期难治性肿瘤的一种生物学方法。目前有3种方法应用T细胞进行肿瘤过继治疗：（1）从患者肿瘤组织标本中获得的肿瘤浸润淋巴细胞（tumor in-filtrating lymphocyte,TIL）.

DC-CIK细胞过继免疫治疗肿瘤患者的护理进展

DC-CIK生物免疫治疗是继手术、放射治疗、化疗之后肿瘤患者可选择的第四大治疗模式。DC-CIK是肿瘤免疫治疗的两个重要部分。前者DC细胞,又称树突状细胞（den-dritic cells,DC）,是体内摄取、加工,呈送抗原的最重要的专职抗原呈递细胞,它呈递抗原的能力最强,是巨噬细胞的10～100倍,且是唯一可以活化初始T细胞的抗原呈递细胞。CIK细胞,即细胞因子诱导的杀伤细胞,是外周淋巴细胞在体外经多种细胞因子组合诱导激活的对肿瘤细胞具有杀瘤能力的淋巴细胞。该类细胞具有增殖速度快、杀瘤活性高、杀瘤谱广、

DC-CIK细胞过继免疫治疗联合XELOX方案化疗对进展期结直肠癌患者的疗效分析

目的探讨树突状细胞-细胞因子诱导杀伤细胞(DC-CIK)细胞过继免疫治疗联合奥沙利铂+卡培他滨(XELOX)方案化疗对进展期结直肠癌(CRC)患者的疗效。方法将104例进展期CRC患者按随机数字表法分为观察组和对照组各52例,观察组行DC-CIK联合化疗,对照组行化疗。检测患者治疗前后血清糖类抗原242(CA242)、糖类抗原19-9(CA19-9)、癌胚抗原(CEA)、T淋巴细胞亚群[自然杀伤性T(NKT)细胞、自然杀伤(NK)细胞、CD4^+、CD3^+、CD8^+]及白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-2(IL-2)、干扰素-γ(IFN-γ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,评价患者近期疗效。结果观察组患者的缓解率(RR)为61.54%(32/52),疾病控制率(DCR)为75.00%(39/52),分别高于对照组的40.38%(21/52)和55.77%(29/52),差异均有统计学意义(P<0.05)。治疗后,两组患者血清CEA水平均低于治疗前,差异均有统计学意义(P<0.05);治疗后,观察组患者血清IL-2、IFN-γ、TNF-α、CD4^+、CD3^+、CD8^+及NKT细胞水平均高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 CRC患者行DC-CIK细胞过继免疫治疗联合XELOX方案化疗可改善机体免疫功能,弥补单纯化疗所造成的免疫抑制,为安全有效的疗法。

过继免疫细胞注射治疗胚胎停育的临床效果分析

目的分析过继免疫注射治疗对胚胎停育的临床治疗效果。方法以2014年1月至2016年1月某妇幼保健院收治的胚胎停育的患者为研究对象,累计79例,根据患者意愿分为治疗组与对照组;其中治疗组45例,对照组37例。治疗组:采用免疫细胞注射进行治疗,对照组采用传统疗法进行治疗。收集患者治疗效果、治疗时间、症状控制时间与治疗不良反应。采用SPSS21.0进行数据分析。结果治疗组治疗有效率88.1%;对照组治疗有效率62.2%。治疗组有效率高于对照组(H=13.167,P=0.007)。治疗组与对照组症状控制时间分别为(12.5±4.8)周与(9.4±4.9)周,治疗组症状控制时间长于对照组(t=2.837,P=0.006);治疗组与对照组接受治疗的时间分别为(11.6±5.6)与(14.8±7.6)周,治疗组治疗时间叫对照组短,差异有统计学意义(t=2.106,P=0.039)。治疗组治不良反应发生率为11.9%;对照组治不良反应发生率为18.9%。治疗组与对照组不良反应发生率不存在统计学差异(χ~2=0.751,P=0.386)。结论"过继免疫治疗"治疗胚胎停育效果相对较好,有效率相对较高,且具有较高的安全性。

应用树突状细胞-细胞因子诱导的杀伤细胞过继免疫治疗恶性肿瘤患者的护理

树突状细胞（DC）和细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK）细胞联合应用可增强免疫效应细胞的抗肿瘤活性,使效应细胞对肿瘤靶细胞的杀伤更具特异性,尤其对手术后或放化疗后患者效果显著,能消除残留微小的转移病灶,防止癌细胞扩散和复发,提高机体免疫力.2012年5月至2013年4月我科应用DC-CIK过继免疫治疗和护理618例,现报告如下.

自体DC-CIK过继免疫治疗儿童急性白血病的疗效观察

目的回顾性评估化疗联合自体共培养树突状细胞、细胞因子诱导的杀伤细胞(co-cultured dendritic cellswith cytokine-induced-killer cells,DC-CIK)的过继免疫细胞治疗对儿童急性白血病的临床有效性和安全性。方法将体外培养扩增并质检合格的自体DC-CIK细胞回输给47例急性白血病患儿,观察输注期间的不良反应,治疗结束后定期复查患者生存情况、微小残留病(minimal residual disease,MRD)水平及淋巴细胞亚群。结果 47例患儿顺利完成61例次DC-CIK回输治疗,中位随访41(5～72)个月。38例MRD阴性患儿中36例处于持续完全缓解(continuous completeremission,CCR),其中1例伴乙肝大三阳化疗不耐受者,治疗后获CCR,同时大三阳转化为小三阳,肝功能恢复正常;9例MRD阳性患儿回输治疗后8例转阴。治疗后患儿外周血淋巴细胞亚群检测显示CD3+CD8+细胞比例显著增加。结论 DC-CIK过继免疫治疗对儿童急性白血病微小残留病有明显的清除优势,安全性好,是继化疗、造血干细胞移植后又一新的治疗白血病的模式。

树突状细胞联合细胞因子诱导的杀伤细胞免疫治疗对肾癌和非小细胞肺癌患者免疫功能的影响

目的探讨自体树突状细胞（DCs）联合细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK）过继免疫治疗对肾癌和非小细胞肺癌患者免疫功能的影响。方法选取Ⅲ～Ⅳ期肾癌患者28例和Ⅲ-Ⅳ期非小细胞肺癌患者15例，分别于DCs—CIK细胞免疫治疗前和治疗后第30天监测患者免疫功能指标，包括外周血T淋巴细胞亚群以及干扰素-γ（IFN-γ）、肿瘤坏死因子（TNF-α）、白细胞介素-10（IL-10）、IL-6、IL-4、IL-2等细胞因子水平。结果肾癌患者经DCs—CIK治疗后30d与治疗前比较，外周血IFN-γ、IL-2升高（P〈0．05），IL-10降低（P〈0．05），TNF—α、IL-6、IL-4则无明显变化（P〉0．05）。T淋巴细胞亚群中CD3＋T细胞、CD3＋CD8＋T细胞、NKT细胞比例较治疗前有所提高（P〈0．05），而CD3＋CD4＋T细胞、NK细胞、调节性T细胞（Tregs）则无明显变化（P〉0．05）。非小细胞肺癌患者DCs—CIK治疗后30d与治疗前比较，外周血IFN-γ、IL-2升高（P〈0．05），TNF-α、IL-10、IL-6、IL4则无明显变化（P〉0．05）。T淋巴细胞亚群中CD3＋T细胞、CD3＋CD8＋T细胞、NKT细胞比例较治疗前有所提高，CD3＋CD4＋T细胞、NK细胞、Treg细胞则无明显变化。结论DCs—CIK细胞免疫治疗能改善晚期肾癌和非小细胞肺癌患者的免疫功能。

肾细胞癌免疫治疗的临床研究进展

肾细胞是常见的泌尿系肿瘤之一,对于转移性的肾细胞癌靶向药物已经成为标准治疗方案,但是靶向药物的完全缓解率非常低,大多数的患者在最初治疗有效后很快发生肿瘤进展。因此肾细胞癌的免疫治疗随着肿瘤免疫学机制研究的发展再次成为研究的热点。本文总结了已经完成临床试验的肾细胞癌免疫治疗方法,根据免疫治疗的原理主要从T细胞调节剂、细胞过继免疫治疗、疫苗以及免疫治疗与其他治疗联合应用等方面介绍了肾细胞癌免疫治疗的临床研究进展,分析了免疫治疗在肾细胞癌治疗领域基本状况、需要解决的问题以及未来的发展趋势及应用前景。

我国免疫细胞治疗临床研究和应用的现状及管理对策

免疫细胞治疗又称细胞免疫治疗或细胞过继免疫治疗,近年来发展迅速,被誉为继手术、化疗、放疗后第四种最有前景的肿瘤治疗方法,其临床研究在国外非常活跃,某些种类的免疫细胞治疗也已经获得临床应用。但我国对免疫细胞治疗的管理尚不明晰,对我国免疫细胞治疗的发展非常不利,甚至给患者带来安全隐患。中国医药生物技术协会会同所属生物技术临床应用专业委员会首次将我国免疫细胞治疗调研结果公布,并在参考国际管理经验基础上对我国相关部门对免疫细胞治疗的管理提出对策,以期起到抛砖引玉的作用,为科学规范此项治疗建言献策。

自体NK细胞过继输注对Ⅲ-Ⅳ期NSCLC患者天然免疫与体力状态的影响

目的研究自体NK细胞过继输注对晚期非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)患者天然免疫及体力状况(performance status,PS)评分的影响。方法应用流式细胞仪检测20例晚期NSCLC患者(肺癌组)和20例健康人(健康对照组)外周血NK(CD16^+CD56^+)细胞的表达水平;检测晚期NSCLC患者应用自体NK细胞过继输注后外周血NK(CD16^+CD56^+)细胞的表达水平。根据美国东部肿瘤协作组(Eastern Cooperative Oncology Group,ECOG)体力状况评分标准,比较肺癌组患者应用自体NK细胞过继输注前后PS评分的变化情况。结果外周血NK(CD16^+CD56^+)细胞的表达明显降低[(8.980±1.942)%],与健康对照组[(15.290±1.869)%]比较差异均有统计学意义(P<0.05)。肺癌组治疗前PS评分为(1.50±1.080),应用自体NK细胞过继输注后PS评分显著降低(1.00±0.816),外周血NK(CD16^+CD56^+)细胞的表达显著升高[(24.660±10.049)%],与治疗前比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论自体NK细胞过继免疫治疗有助于提高晚期NSCLC患者的免疫功能状态及体力状况。

化放疗结合自体T细胞过继治疗晚期非小细胞肺癌21例

目的探讨肺癌患者经自体T细胞过继治疗后的临床疗效及T淋巴细胞亚群的变化。方法对晚期非小细胞肺癌病人行化放疗结合自体T细胞过继治疗(治疗组),与只行化放疗的病人(对照组)进行比较,观察两组患者的临床疗效及T淋巴细胞亚群变化。结果治疗组21例临床数据与对照组22例比较在疾病控制率(DCR)方面无统计学差异(P>0.05),在无进展生存(PFS)、1年生存率及减轻化放疗副作用方面两组比较均有统计学差异(P<0.05)。治疗组治疗后总T淋巴细胞普遍升高,升高比率为76.2%;CD4+T淋巴细胞升高比率为71.4%;CD8+T淋巴细胞亚群比率升高者为66.7%,与对照组比较均有统计学差异(P<0.05)。结论自体T细胞过继治疗辅助化放疗可提升疗效并减少化放疗的副作用。

医学免疫学实验教学中虚拟仿真软件的探索

以过继免疫细胞治疗为目的的医学免疫学实验教学,因受标本难以采集、实验试剂价格昂贵、生物安全隐患等因素的制约,一直难以在实验教学中开展。故本团队研发了一套可运用于医学免疫学实验教学的虚拟仿真软件,该套虚拟仿真实验教学软件以过继免疫细胞治疗为导向,将多个分散割裂的免疫学技术转变为整和性实验,将结果单一的验证性实验转变为开放探究性实验。可有效地拓展医学生的临床思维,提升创新实践能力,且实现了实验教学模式的多元化,提高教学互动和参与度,更好地激发了学生的求知欲。