以LAK/IL-2为主的肿瘤过继免疫治疗在国内的应用

以ＬＡＫ／ＩＬ┐２为主的肿瘤过继免疫治疗在国内的应用李殿俊１刘旭１张春艳１张树强２作者单位：１．哈医大肿瘤研究所（哈尔滨１５００４０）２．大庆市第五医院肿瘤过继免疫治疗（Ａｄｏｐｔｉｖｅｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ）是指将具有杀伤活性的免疫效应细胞如Ｌ...

基因修饰T细胞过继免疫治疗肿瘤的研究进展

过继免疫治疗(adoptive immunotherapy,AIT)是一种新的肿瘤治疗方法,可直接杀伤或激发机体免疫反应杀伤肿瘤细胞,发挥治疗作用。基因修饰T细胞是AIT的重要组成,近年来对T细胞分离、基因修饰等方面的研究使AIT取得了一系列进展。作为未来AIT治疗体系的一部分,免疫标志物检测逐渐受到重视。本文就基因修饰T细胞AIT治疗肿瘤的研究进展作一综述。

NK及CAR-NK细胞在肿瘤过继免疫治疗中的运用现状及研究进展

NK细胞及CAR-NK细胞作为肿瘤过继免疫细胞治疗技术之一,展现出细胞毒性能力强、经济、off-the-self(现成的)、容易规模化制备的特点,特别在实体瘤临床运用中展现出很好的疗效。文章主要对NK及CAR-NK细胞在肿瘤过继免疫治疗中的运用现状及研究进展进行了综述。

细胞因子诱导的杀伤细胞过继免疫治疗延缓肝癌根治术后复发和转移的研究

肝癌根治性切除术后的复发转移是影响肝癌患者预后的重要因素，是目前肝癌研究的热点。由于肝癌对目前的放疗、化疗均不敏感，因此寻找有效的术后辅助治疗成为提高肝癌整体疗效的当务之急。细胞因子诱导的杀伤细胞（cvtokine induced killer cell，CIK）是一种高效免疫活性细胞，是恶性肿瘤过继免疫治疗的重要手段之一，目前已证实在体内外对于多种恶性肿瘤细胞存在杀伤作用。

靶向表皮生长因子受体Ⅲ型突变体的第三代嵌合抗原受体的构建与表达

目的:构建第三代靶向表皮生长因子受体Ⅲ型突变体(EGFRvⅢ)的嵌合抗原受体表达载体,为肿瘤过继免疫治疗提供实验基础。方法:运用分子克隆方法将嵌合抗原受体的胞外抗原结合区(EGFRvⅢ单克隆抗体的轻链和重链可变区,EGFRvⅢsc Fv,726 bp)、铰链区/穿膜区(213 bp)、共刺激分子(CD28和CD137的胞内信号区,123 bp和126 bp)和免疫受体酪氨酸活化基序(CD3ζ链,336 bp)连接成EGFRvⅢsc Fv-CD28-CD137-CD3ζ(EGFRvⅢ/3CAR),克隆入真核表达载体p CDHCMV-MCS-EF1-cop GFP的EcoRⅠ和Bam HⅠ位点,转染293T细胞48 h后提取蛋白,采用SDS-PAGE和Western blotting检测EGFRvⅢ/3CAR的表达。结果:EGFRvⅢsc Fv和基因合成的CD28-CD137-CD3ζ表达框通过重叠延伸PCR拼接成EGFRvⅢ/3CAR,限制性内切酶片段分析和DNA测序均验证了重组载体序列完全正确,Western blotting应用抗人-CD3ζ抗体检测到EGFRvⅢ/3CAR在293T细胞中的完整表达(相对分子质量约58 k D)。结论:成功构建嵌合抗原受体EGFRvⅢ/3CAR表达载体,为嵌合抗原受体修饰T细胞靶向治疗肿瘤提供研究基础。

激活脐血单个核细胞体外抗白血病细胞株活性研究

目的 探讨植物血凝素 (PHA)、白细胞介素 2 (IL 2 )、抗CD3单克隆抗体 (αCD3Ab)激活的脐血单个核细胞 (CBMC)体外对K562的杀伤活性 ,以及外源性刺激因子对CBMC的可溶性白细胞介素 2受体 (sIL 2R)含量的影响。方法 采集CBMC分别与不同刺激因子体外短期培养 ,台盼蓝拒染法测效应细胞的增殖能力 ,ELISA法检测上清液中sIL 2R的含量 ,3 H TdR释放法测定效应细胞体外对K562靶细胞的杀伤活性。结果 脐血PHA CD3AK细胞在体外培养 3d后增殖倍数、活化后上清液中sIL 2R的含量显著高于PHA LAK ,CD3AK和LAK细胞 (P <0 .0 5)。PHA CD3AK细胞体外对白血病细胞株K562细胞的细胞毒活性明显高于PHA LAK ,CD3AK和LAK细胞 (P <0 .0 5)。结论 脐血单个核细胞经PHA ,IL 2和αCD3Ab激活后 ,可有效形成PHA CD3AK效应细胞 ,其增殖活性、细胞毒性均高于PHA LAK 。

脐血源MHC限制性杀伤T细胞的扩增及功能研究

目的:本研究通过不同细胞因子的组合定向诱导脐血单个核细胞分化扩增杀伤性T细胞(CTL)并探讨其功能。方法:利用密度梯度离心法获得脐血单个核细胞(MNK),添加IL-2、IL-15、PHA-P和IFN-γ等多种因子,诱导分化并扩增CTL细胞;通过流式细胞术、细胞杀伤实验及定量PCR技术检测其生物学功能。结果:经过15 d的培养细胞数量明显增多,细胞增殖率平均为(1 522±137)%。流式细胞仪检测显示,直接分离的脐血单个核细胞流式分型的结果为95%以上属CD3-CD8-,体外培养15 d后CD3+CD8+细胞的比例高达82.77±5.61,具有良好的杀瘤活性,直接提取的MNC细胞对He La细胞及K562细胞的杀伤效果平均值为(61.88±1.08)%,培养后的CTL细胞杀伤效果均能达到80%以上,平均值为(90.33±2.02)%,与对照组相比有显著提高;同时颗粒酶(Granzyme)A、颗粒酶B、GM-CSF、颗粒溶素(Granulysin)、IFN-γ、TGF-β、TNF-α和穿孔素(perforin))等相关细胞因子的mRNA表达水平均有不同程度增加,与对照组相比IFN-γ和TGF-β的表达显著上调(P<0.05),其余因子的表达极显著上调(P<0.01)。结论:脐血造血单个核细胞能体外分化为杀伤性T淋巴细胞,并可以大量扩增,脐血可以作为肿瘤过继免疫治疗所需T淋巴细胞的来源。

CIK细胞:过去、现在与将来

肿瘤过继免疫治疗研究的开展可以追溯到上世纪70年代，其中以人外周血单个核细胞（PBMC）为培养对象的研究经过80、90年代的发展，获得了一系列成果。1980年有学者在动物实验中发现培养体系中加入II，2后可以得到一个具有肿瘤细胞毒性的细胞扩增，1982年Rosenberg等提出了淋巴因子激活的杀伤细胞（LAK细胞）的概念，并在后续研究中对LAK细胞的临床应用进行了深入的探讨。

Th9细胞的特性、分化调控机制及其与肿瘤免疫

Th9细胞是近期发现的新型辅助性CD4^(+)T细胞亚群,以大量分泌白细胞介素-9(interleukin 9,IL-9)等细胞因子为主要特征,可由初始CD4^(+)T细胞经转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)联合IL-4诱导获得。Th9细胞的分化调控机制较为复杂,目前尚不清楚其关键的特征性转录因子,但已知多种转录因子参与了对Th9细胞分化的调控。在小鼠黑色素瘤过继转移治疗模型中,Th9细胞显示出极显著的抗肿瘤生长作用。本文概述了Th9细胞的生物学特性、分化调控机制、与肿瘤免疫应答的关系及其在肿瘤过继免疫治疗中的作用,试图为探索诱导性能优良的Th9细胞并将之应用于肿瘤过继性免疫治疗,提供有价值的理论基础和研究线索。

恶性胸水淋巴细胞对自体肿瘤细胞杀伤活性的研究

兰州医学院第一附属医院郭胤仕等采用不连续密度梯度离心法,分离恶性胸水淋巴细胞(MPEL)及肿瘤细胞,比较了MPEL与外周血淋巴细胞(PBL)对自体肿瘤细胞(ATC)的杀伤活性。

通用型嵌合抗原受体T细胞的研究现状及进展

通用型嵌合抗原受体T细胞(universal chimeric antigen receptor T-cell immunotherapy,UCAR-T)属于通用型CAR-T中基于基因编辑的通用T细胞技术,通过基因编辑技术敲除T细胞信号受体因子,并使用经过改造的健康志愿者的T细胞制备CAR-T细胞,输注后不会引起移植物抗宿主病(graft versus host disease,GvHD)和宿主抗移植物反应(host versus graft reaction,HvGR)等免疫排斥反应。在动物实验和早期临床试验研究方面,UCAR-T技术显示出了良好的抗瘤效果、广泛的适用性和不可估量的应用潜力;在产业化方面,UCAR-T细胞技术显示出了质量可控、off-the-shelf、容易规模化制备等特点,解决了自体CAR-T的设计及培养制备成本过高、制备周期长、质量控制不易、细胞数量及扩增能力不足等问题。本文介绍了目前UCAR-T细胞的研究现状、进展及存在问题,并就存在问题进行了初步分析,为UCAR-T细胞的基础研究、产业化研究以及临床应用提供参考。