慢病毒载体介导CC趋化因子受体7基因过表达可促进大鼠骨髓间充质干细胞归巢

背景:研究发现,骨髓间充质干细胞特异性地表达CC趋化因子受体7(CC chemokine receptor,CCR7),与其配体次级淋巴组织趋化因子(secondary lymphoid-tissue chemokine,SLC)相互作用,有助于骨髓间充质干细胞归巢到损伤部位。目的:探讨CCR7基因过表达对大鼠骨髓间充质干细胞体内外归巢特性的影响。方法:利用慢病毒载体介导大鼠骨髓间充质干细胞过表达CCR7基因,建立过表达CCR7的骨髓间充质干细胞。通过Transwell实验体外检测趋化因子SLC对过表达CCR7的骨髓间充质干细胞体外定向迁移的影响。将SD大鼠分为4组,每组动物10只:①对照组:未接受全身照射大鼠作为对照组;②照射组:大鼠接受全身照射(60Co单次全身照射,总剂量为7.5 Gy,照射量率为0.75 Gy/min),输注生理盐水1 mL;③BMSCs-GFP组:大鼠经全身照射后,输注GFP标记的骨髓间充质干细胞悬液1 mL (含细胞5×105个);④CCR7-BMSCs-GFP组:大鼠经全身照射后,输注携带GFP和CCR7基因的骨髓间充质干细胞1 mL (含细胞5×105个)。移植24 h后取大鼠脾脏做冰冻切片,荧光显微镜下观察骨髓间充质干细胞归巢情况,流式细胞技术检测骨髓间充质干细胞在脾脏的归巢率。ELISA方法检测照射后大鼠外周血中SLC水平。结果与结论:①Transwell实验结果表明,过表达CCR7可促进骨髓间充质干细胞向趋化因子SLC迁移募集;②冰冻切片结果显示,过表达CCR7可明显提高骨髓间充质干细胞归巢至损伤脾脏的效率;③流式细胞术测定过表达CCR7的骨髓间充质干细胞归巢至脾脏数量明显高于BMSCs-GFP组(P <0.05);④ELISA结果显示,照射24 h后大鼠外周血中SLC水平明显升高;⑤结果表明,CCR7及其配体SLC对骨髓间充质干细胞的归巢有促进作用。