大鼠大脑运动皮质向脑干运动前神经元的谷氨酸能投射

为观察大鼠大脑运动皮质向脑干运动前神经元所在区域的谷氨酸能投射。用逆行追踪和免疫荧光组织化学染色相结合的双标技术，将四甲基罗达明（ＴＭＲ）分别注入臂旁外侧核、三叉上核或延髓网状结构外侧部后，ＴＭＲ逆标神经元分别见于额叶２区、额叶１区或额叶１区和２区的Ｖ层；磷酸激活的谷氨酰胺酶（ＰＡＧ）样阳性神经元见于大脑运动皮质Ⅱ～Ⅵ层的锥体细胞；ＴＭＲ逆标神经元几乎均呈ＰＡＧ样阳性。结果提示，大脑运动皮质发出的皮质脑干束主要终止于脑干运动前神经元所在的区域，运动皮质向不同的脑干运动前神经元所在区域发出投射的起源也有差异，谷氨酸是此通路的主要神经递质。

大鼠大脑运动皮质与脑干面口部运动前神经元的突触联系

目的观察大脑运动皮质发出的下行投射终末或谷氨酸能终末与脑干面口部运动核内运动神经元的间接突触联系。方法顺行与逆行追踪相结合及免疫组织化学染色与逆行追踪相结合的双重标记技术。结果将ＰＨＡ－Ｌ电泳入大鼠额叶１区和／或２区和将ＨＲＰ分别注入三叉神经运动核（Ｖｍ）、面神经核（Ⅶ）或舌下神经核（ⅩⅡ），ＰＨＡ－Ｌ顺标终末和ＨＲＰ逆标神经元的重叠分布区主要见于臂旁核簇、三叉上核、Ｖｍ内侧的脑桥网状结构、延髓中缝核簇和延髓网状结构外侧部，而在脑干面口运动核内则很少见到ＰＨＡ－Ｌ顺标终末。上述区域内也有较密集的谷氨酸样阳性终末。在电镜下观察到除Ｖｍ、Ⅶ和ⅩⅡ以外的结构内ＰＨＡ－Ｌ顺标终末或谷氨酸样阳性终末与ＨＲＰ逆标神经元的胞体和树突形成以非对称性为主的轴－体和轴－树突触。结论本研究的结果为皮质脑干束的终止部位和运动皮质对脑干运动核的间接调控提供了直接的形态学依据。

与咬肌运动神经元直接联系的运动前神经元在脑干的分布

目的为了定位向咬肌运动神经元投射的最后一级运动前神经元在脑干内的分布。方法注射麦芽凝集素结合的辣根过氧化物酶(WGA-HRP)至咬肌神经逆行跨突触追踪,然后通过免疫组织化学方法显示了该类神经元。结果这类神经元分布在双侧三叉上核(Vsup)、三叉神经感觉主核背侧部(Vpdm)、小细胞网状结构(PCR)和三叉神经脊束核吻侧亚核背侧部(Vodm),以及对侧三叉神经运动核(Vmo)。数量上,Vsup,特别是注射侧Vsup中,标记的神经元数量最多;其他核团内,双侧标记的神经元的数量无明显差别。结论一侧咬肌运动神经元直接接受脑干双侧多个区域调控。

刺激延髓背角诱发的小鼠脑干网状结构内向Vmo投射的GABA能神经元突触后反应的电生理学研究

本实验利用谷氨酸脱羧酶67-绿色荧光蛋白(GAD67-GFP)基因敲入小鼠制备离体脑片,结合TMR逆行束路追踪技术,在荧光镜和红外镜头下,利用膜片钳全细胞记录的方法对电刺激延髓背角(即三叉神经脊束核尾侧亚核,Vc)诱发的小鼠小细胞网状结构(PCRt)内GABA能和TMR逆标的运动前神经元的突触后反应及其反应类型、药理学特征进行系统的研究。结果显示:(1)高频刺激(20 Hz)Vc,在PCRt内GFP和TMR双标的运动前神经元上可记录到兴奋性的突触后电流(EP-SCs),波形显示为单突触反应;(2)电压钳记录模式下,α-氨基羟甲基恶唑丙酸受体(AMPA受体)拮抗剂氨基-2-硝基喹啉-2,3-二酮(CNQX)及N-甲基-D-天冬氨酸受体(NMDA受体)阻断剂D,L-2-氨基-5-磷酸基戊酸(AP-5)均可显著降低刺激Vc所诱发的小鼠PCRt内GFP和TMR双标神经元的EPCSs的幅值;(3)电流钳模式下,刺激Vc,在PCRt内GFP和TMR双标的神经元上记录到兴奋性突触后电位,其幅度与刺激强度在一定范围内呈正相关。以上结果提示,小鼠PCRt内向三叉神经运动核(Vmo)发出投射的GABA能运动前神经元可通过其细胞膜上AMPA受体或NMDA受体的介导,对口面部伤害性信息发挥整合和调控作用,以实现对口面部伤害性反射活动的精确调节。

大鼠脑干向面口部运动核的P物质能和脑啡肽能投射

目的观察大鼠脑干面口部运动核（三叉神经运动核、面神经核和舌下神经核）内Ｐ物质（ＳＰ）和亮氨酸脑啡肽（Ｌ－ＥＮＫ）样阳性终末的中枢起源。方法荧光金（ＦＧ）逆行追踪与ＳＰ样和Ｌ－ＥＮＫ样免疫荧光组织化学染色相结合的双重标记技术。结果将ＦＧ分别注入三叉神经运动核、面神经核或舌下神经核后，ＦＧ逆标神经元主要位于臂旁核簇、三叉上核、三叉神经感觉主核、脑桥和延髓网状结构、巨细胞网状核α部和延髓中缝核簇。上述结构内的部分ＦＧ逆标神经元呈ＳＰ样或Ｌ－ＥＮＫ样阳性，这些双标神经元主要位于臂旁外侧核、延髓中缝核簇和巨细胞网状核α部。结论含ＳＰ和Ｌ－ＥＮＫ并向脑干面口部运动核投射的运动前神经元可能在面口部复杂而精细的运动调控中发挥重要作用。