MNX1及miR-7156-3p在晚期乳腺癌患者组织中的表达及与预后的相关性

目的研究晚期乳腺癌患者癌组织中短链非编码RNA(miR)-7156-3p、运动神经元和胰腺同源盒1(MNX1)表达对患者预后的评估价值。方法经MR检查并病理证实的晚期乳腺非特殊型浸润性癌(晚期乳腺癌组,n=86)和良性结节(良性组,n=72),采用实时荧光定量PCR检测患者乳腺病灶组织匀浆中MNX1及miR-7156-3p表达,Pearson法分析MNX1与miR-7156-3p相关性,COX回归模型分析MNX1及miR-7156-3p与患者不良预后的相关性;绘制受试者工作特征曲线(ROC),计算曲线下面积(AUC)分析MNX1及miR-7156-3p对患者不良预后的评估价值。结果晚期乳腺癌组miR-7156-3p表达水平明显低于良性组(P<0.05),而MNX1表达水平则明显高于良性组(P<0.05);经Pearson相关性分析发现,miR-7156-3p与MNX1表达水平呈负相关性(r=-0.403,P<0.05);COX回归分析发现,年龄、肿瘤低分化和直径、Ki-67≥14%+、miR-7156-3p、MNX1表达水平是影响晚期乳腺癌患者不良预后的相关因素(P<0.05);ROC曲线分析发现,miR-7156-3p及MNX1的AUC分别为0.749、0.772,而两项指标联合的AUC为0.872,明显高于单项指标(P<0.05)。结论晚期乳腺癌患者病灶组织中MNX1及miR-7156-3p异常表达,是影响患者预后的相关因素,对患者不良预后具有较高的评估价值。

犬Mnx1基因过表达载体的构建及其对脂肪间充质干细胞向胰岛β细胞分化的影响

本研究旨在构建犬Mnx1基因腺病毒过表达载体,并探究Mnx1基因过表达对犬脂肪间充质干细胞向胰岛β细胞方向分化的影响。本试验构建了腺病毒重组表达载体pAD-Mnx1,经293A细胞包装扩增后产生具有感染性的重组腺病毒,将其按感染复数(MOI)100感染犬ADSCs后,分别在第3、6、9、12和15天观察绿色荧光蛋白的表达情况、细胞形态变化和胰岛β细胞发育相关基因的表达情况。结果显示,ADSCs在感染后24 h出现绿色荧光,形态无显著变化;Mnx1基因表达可激发胰十二指肠同源盒1(Pdx1)基因、神经元素3(Ngn3)基因、肌腱膜纤维肉瘤癌基因同源物A(Mafa)基因、NK2同源盒2(Nkx2.2)基因、NK6同源盒1(Nkx6.1)基因、神经分化因子1(Neurod1)基因、成对合基因4(Pax4)和GATA结合蛋白4(Gata4)基因等内源性基因的表达。结果证实,腺病毒介导的过表达载体pAD-Mnx1可在犬ADSCs超表达Mnx1基因,从而诱导犬ADSCs向胰岛前体细胞分化,具有进一步诱导犬ADSCs形成胰岛β细胞的可能。

MNX1在乳腺癌组织中的表达及功能研究

目的研究运动神经元和胰腺同源盒1(MNX1)在乳腺癌组织中的表达,通过构建MNX1沉默的MDA-MB-231细胞株,检测MNX1对乳腺癌细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭等生物学功能的作用。方法收集广西医科大学第一附属医院乳腺癌73例患者的73对乳腺癌组织和邻近正常组织进行回顾性研究,采用qRT-PCR检测MNX1在组织和细胞中的相对表达,使用Western blotting检测组织中MNX1的蛋白质水平。我们设计了MNX1的shRNA,构建了低表达的MNX1病毒载体。病毒载体进一步用于感染三阴性乳腺癌细胞。设计沉默效果最好的MNX1靶向沉默乳腺癌细胞株MDAMB-231作为沉默组(shMNX1),设计空载体慢病毒感染的阴性对照组(Control)以进行后续的细胞功能实验。采用CCK-8实验检测细胞增殖能力,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力,用流式细胞仪检测细胞凋亡,每个实验至少有3次独立实验,正态分布的计量资料以均数±标准差(Mean±SD)表示,组间比较采用t检验。结果qRT-PCR结果显示,在乳腺癌组织中MNX1基因的表达水平高于癌旁组织(P<0.05)。Western blotting显示乳腺癌组织中MNX1基因的蛋白表达水平明显高于邻近组织(P<0.01)。CCK-8实验结果显示,沉默组乳腺癌细胞在24、48和72 h的外径(450 nm)低于阴性对照组(P<0.05),可以认为沉默MNX1基因可抑制乳腺癌细胞的增殖。Transwell结果显示,迁移实验中,沉默组和阴性对照组通过跨室的细胞数分别为217.00±33.23和490.00±45.56;侵袭实验中,沉默组和阴性对照组通过跨室的细胞数分别为91.00±12.79和419.00±49.37,可以认为沉默MNX1基因可以抑制乳腺癌细胞株MDA-MB-231的迁移和侵袭能力。在流式细胞术检测细胞凋亡中,沉默组乳腺癌细胞凋亡率为(3.81±0.41)%,阴性对照组为(2.13±0.16)%。沉默组乳腺癌细胞凋亡率高于阴性对照组,说明沉默MNX1基因促进乳腺癌细胞株MDA-MB-231的的凋亡。结论MNX1在乳腺癌组织中高表达,沉默MNX1基因的表达抑制乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭,促进细胞凋亡。