雪旺细胞浆神经营养蛋白高效液相分离纯化及其生物活性研究

目的 分离纯化雪旺细胞浆神经营养蛋白并研究其生物活性。方法 取 30 0只出生后 1～ 3天SD大鼠双侧坐骨神经 ,纯化培养 ,收集雪旺细胞 ,超声粉碎 ,超速离心 ,不同孔径分子筛滤膜 (PM10、30、5 0 )超滤浓缩 ,收集分子量 10～ 30 ku,30～ 5 0 ku和 >5 0 ku三种组份胞浆蛋白浓缩液 ,分别加入体外无血清培养的 E14SD胎鼠脊髓运动神经元培养液中 ,用 MTT酶标法检测证实 10～ 30 ku和 >5 0 ku两组份蛋白有神经营养活性。再通过Diol- 15 0高效液相分子层析进一步从雪旺细胞胞浆中纯化分离出分子量为 2 6 ku和 5 8ku两种胞浆蛋白 ,并对其神经生物活性进行研究。结果 2 6 ku和 5 8ku雪旺细胞胞浆蛋白能维持体外无血清培养的脊髓运动神经元存活 ,其最佳生物活性浓度为 2 0 ng/孔。结论 雪旺细胞胞浆内含有分子量为 2 6 ku和 5

雪旺细胞胞浆神经营养蛋白促进周围神经再生的实验

目的 研究雪旺细胞胞浆神经营养蛋白 (SDNF)对周围神经再生的影响。方法 选用 90只成年SD大鼠 ,在右侧坐骨神经造成长 10 m m缺损 ,用植入血管的变性骨骼肌桥接神经缺损。分成三组 ,每组 30只。分别将分子量为 2 6、5 8ku的 SDNF和生理盐水 (对照组 )于术中、术后 7及 14天注入肌桥的近段、中段和远段。术后均观察 6个月。术后 15天开始 ,每隔 15天走足印一次 ,测定坐骨神经功能指数。术后 1、3、6个月 ,每组取 10只大鼠行神经电生理检测、比目鱼肌收缩力测定和组织形态学观察。结果 分子量为 2 6、5 8ku的 SDNF两实验组坐骨神经功能恢复指数、神经电生理、比目鱼肌收缩力和形态学观察指标 ,与对照组比较有非常显著性差异 (P<0 .0 1)。结论 分子量为 2 6和 5 8ku的 SDNF有促进损伤的周围神经再生作用。