结缔组织生长因子及吞噬和细胞运动蛋白1基因多态性与2型糖尿病肾病病位、病性的相关性研究

目的 探讨结缔组织生长因子(CTGF) rs2648875位点、吞噬和细胞运动蛋白1(ELMO1) rs10951509位点基因多态性与2型糖尿病性肾病(T2DKD)病位、病性的相关性。方法 选取2017年1月—2018年6月于泉州市中医院内分泌科住院及门诊就诊的T2DKD患者195例作为T2DKD组,同时选取泉州市中医院体检中心体检的健康人群134例作为对照组。采集四诊信息,运用证素辨证分析2组病位、病性证素分布特点,采用imLDRTM多重SNP分型试剂盒检测2组CTGF和ELMO1基因中AA、GA、GG基因型的分布频率。采用无序多分类Logistic回归分析CTGF、ELMO1基因型与病位、病性的相关性。结果 T2DKD组主要病位证素为肾、肝、脾,主要实证病性证素为湿、热、痰,主要虚证病性证素为阴虚、气虚、血虚、阳虚。2组患者CTGF基因AA、GA、GG基因型及EL-MO1基因AA、GA、GG基因型分布比较,差异有统计学意义(P<0.01)。以GG基因型作为参照,与非血瘀比较,携带CTGF基因AA、GA基因型的血瘀患者明显减少(P<0.01)。以GG基因型作为参照,与非阳虚比较,携带EL-MO1基因AA、GA基因型的阳虚患者明显增多(P<0.05)。结论 T2DKD主要病位在肾、肝、脾,而病性为虚实夹杂。CTGF基因rs2648875多态性与病性血瘀形成相关,ELMO1基因rs10951509多态性与病性阳虚形成相关。

吞噬和细胞运动蛋白1在炎性关节病的作用

吞噬和细胞运动蛋白1(ELMO1)是进化保守的一种蛋白,通过与胞质分裂作用因子(DOCK)结合激活Rac影响肌动蛋白细胞骨架的重塑,促进细胞吞噬、迁移和侵袭,其在恶性肿瘤中的临床意义已被证实,但在自身免疫性疾病中的作用尚未被广泛探索。近年来,有研究表明ELMO1调节免疫细胞功能、炎症反应以及破骨细胞活性,参与类风湿关节炎、强直性脊柱炎等炎性关节病的发生发展,本文就相关文献做一综述。

马铃薯X病毒25kD运动蛋白基因和外壳蛋白基因介导的抗病性研究

以马铃薯X病毒(potatovirusX,PVX)的RNA为模板,应用反转录聚合酶链式反应(RT PCR)方法分别扩增出长度为681bp的非翻译马铃薯X病毒25kD运动蛋白基因(PVX p25)和长度为714bp的非翻译马铃薯X病毒外壳蛋白基因(PVX CP)。并分别构建植物表达载体pROKⅡp25和pROKⅡCP。利用农杆菌介导方法转化烟草NC89。经卡那霉素筛选、PCR检测,共获得转非翻译PVX p25的转基因植株78株,转非翻译PVX CP的转基因植株83株。抗病性试验表明,转非翻译PVX p25的78株中有31株对PVX的侵染表现高度抗病,抗性比例为39.7%;转非翻译PVX CP的83株中有11株对PVX的侵染表现高度抗病,抗性比例为13.3%。分子生物学检测和抗病性分析表明,抗病性均为RNA介导的病毒抗性。研究结果初步证明,转非翻译PVX p25可以更有效地获得抗PVX转基因植株。

烟草花叶病毒运动蛋白cDNA的克隆及融合蛋白的表达

从烟草花叶病毒 (TMV)中提取总RNA ,通过反转录 PCR (RT PCR)扩增得到其运动蛋白 (MP)的基因 ,将扩增产物克隆到pMD 18T载体上。DNA序列分析表明 ,所得到的运动蛋白的基因全长为 80 7bp (GenBank接受号AY30 0 16 1) ,与已发表TMV序列 (GenBank登陆号为NC- 0 0 136 7)和同属的番茄花叶病毒 (ToMV ,GenBank登陆号为NC- 0 0 2 6 92相比核苷酸的同源性分别为 98 0 %和 80 9% ,氨基酸的同源性分别为 99 1%和 80 0 %。将目的片段亚克隆到表达载体pET 30a上 ,并在大肠杆菌JM10 9中诱导表达 ,诱导 9h后 ,融合蛋白表达量最大。诱导后的工程菌超声后经SDS PAGE检测 ,融合蛋白以可溶形式存在。

黄瓜花叶病毒运动蛋白基因及其缺失突变体在大肠杆菌中的表达和表达产物的纯化

利用ＣＭＶＦｎｙ 株系ＲＮＡ３ 全长ｃＤＮＡ 克隆， 构建了运动蛋白（ＭＰ） 基因５′端缺失突变体和３′端缺失突变体的原核表达载体。ＳＤＳ－ ＰＡＧＥ 分析表明， 经ＩＰＴＧ 诱导， ＭＰ 基因及其２ 种缺失突变体均能在大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３） ｐＬｙｓＳ中高效表达。利用分离包含体的方法， 提纯了全长的及Ｃ 端缺失的ＭＰ。光密度扫描分析表明， 提纯产物的纯度达９６ ．６ ％ 。

烟草花叶病毒运动蛋白的表达及特异性抗体制备

从烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)感染的发病烟草叶片中提取总RNA,通过RT-PCR扩增得到其运动蛋白基因,将扩增产物克隆到pMD18-T载体上.DNA序列分析表明,所得运动蛋白基因全长为807 bp,与已报道的TMV-U1株系核苷酸和氨基酸同源性均为100%.将目的基因亚克隆到原核表达载体pET-29a上,并转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导4 h后蛋白表达量达到最大,超声波显示所得融合蛋白以不可溶形式存在.SDS-PAGA检测蛋白表达情况,表达产物与目的蛋白大小一致,割胶免疫注射家兔得到抗体,ELISA测定效价为25600,Western-blot检测证明在烟草叶片被侵染早期MP得到表达,且抗体特异性良好.

建兰花叶病毒运动蛋白基因克隆及序列分析

从建兰花叶病毒 (CyMV)石斛兰分离物中提取病毒RNA ,用反转录———聚合酶链式反应 (RT PCR)方法获得约 5 0 0bp的运动蛋白基因片断 ,插入 pGEM T载体克隆并测序。序列分析表明 ,该基因片断由 474个核苷酸组成 ,和CyMV美国夏威夷分离物、新加坡分离物相应基因核甘酸序列分别具有 97.8%同源性 ;根据核酸序列推导该片断含有 3个部分重叠的开放阅读框架 (ORF) ,分别编码 14kD、12kD和

低温对沙土鼠脑缺血海马微管运动蛋白Kinesin活性的影响

目的 :观察脑缺血再灌注期间海马锥体细胞微管运动蛋白 Kinesin活性的变化及低温对其的影响。方法 :沙土鼠前脑缺血再灌注模型 ,脑缺血时间为 10分钟。应用免疫组织化学染色方法结合计算机图像分析技术测定海马微管运动蛋白 Kinesin的活性。结果 :在海马 CA1区 ,常温缺血再灌注 6、48和 96小时 ,微管运动蛋白 Kinesin的活性分别降至假手术组的 5 8%、38%和 12 % (P均 <0 .0 1) ,而低温组在再灌注 6、48和 96小时后 ,微管运动蛋白 Kinesin活性分别为假手术组的 97%、81%和 79% ,明显高于常温组。在海马 CA 2、CA3和CA4区 ,微管运动蛋白 Kinesin活性无明显变化。结论 :低温可明显抑制脑缺血再灌注期间海马 CA1区微管运动蛋白 Kinesin活性的下降。

大麦黄矮病毒运动蛋白及其介导的小麦抗病性研究进展

麦黄矮病毒依靠介体蚜虫传播引起小麦黄矮病,对我国麦类作物生产造成严重威胁。本文结合本课题组的研究,对大麦黄矮病毒编码的运动蛋白的生化特性、生物学功能及其介导小麦的抗病性等方面的研究进展进行了综述。该运动蛋白在病毒构成中能够结合病毒核酸,并与宿主细胞膜系统相互作用,是一个与黄矮病毒系统侵染相关的致病因子。

运动蛋白介导的病毒在植物体中的传播

综述了病毒在植物寄主内扩散中的运动蛋白的作用。由病毒基因组编码的运动蛋白与病毒核酸形成运动蛋白核酸复合物,介导病毒扩散。在病毒复制与扩散过程中,运动蛋白与宿主细胞内质网、高尔基体、细胞骨架、胞间连丝发生作用,并受细胞果胶甲基脂酶、包含体、β-1,3-葡聚糖酶、磷酸化等因素的影响,形成了植物体内遗传物质系统性运输的一个模式。

大麦黄矮病毒运动蛋白在烟草中的瞬时表达

[目的]快速鉴定运动蛋白基因在烟草中的瞬时表达,进一步研究该外源基因的功能。[方法]将大麦黄矮病毒的运动蛋白基因定向克隆到马铃薯X病毒载体上,得到重组的马铃薯X病毒,电击转化农杆菌后,利用农杆菌渗透注射技术注射到本生烟草的叶片中,观察病毒对烟草的侵染状况。[结果]渗透注射后第7天观察,重组病毒载体侵染的烟草系统叶有病毒侵染症状,而对照组未有此现象。对2组试验进行逐日跟踪观察,重组病毒载体侵染的烟草有较严重的病毒侵染症状和叶片卷曲现象,后期引起注射叶及系统叶坏死。而空病毒载体侵染的烟草只有轻微的病毒侵染症状,并能够恢复健康。对侵染的烟草进行RT-PCR检测,结果表明外源基因BYDV-MP在烟草体内进行了正常的转录和表达。[结论]BYDV-MP蛋白促进了PVX的系统侵染速度,加重了系统侵染的病毒症状,是病毒病症的决定因子;利用PVX表达载体表达异源MP的方法是可行的。

剔除小鼠神经微管运动蛋白Kif1b基因导致类似Charcot-Marie-Tooth病动物模型

目的研究杂合子小鼠Kiflb基因剔除后导致的表现型,探讨其作为类似Charcot-Marie-Tooth (CMT)病动物模型的可行性。方法用Southern blotting和PCR检测同源重组和基因型,Western blotting测定杂合子KIF1B蛋白表达量,行为学实验观察其表现型。结果杂合子Kif1b基因剔除小鼠的KIF1B蛋白表达量减少了一半以上,行为学实验结果表明,杂合子基因剔除小鼠在运动和感觉方面均有异常。Rota-rod实验,Rod walking实验和Wire hanging实验中,野生型小鼠的停留时间均明显长于Kif1b基因剔除小鼠。同时,杂合子Kif1b基因剔除小鼠在热板实验和福尔马林实验中,表现出对温度觉和痛觉反应的迟钝,其反应时间与野生型小鼠相比明显延长,反应强度降低。结论杂合子Kif1b基因剔除小鼠的表现型与人类腓骨肌萎缩症相似,作为疾病模型具备可行性。

大麦黄矮病毒运动蛋白基因克隆及原核表达

[目的]构建大麦黄矮病毒运动蛋白(BYDV-MP)基因的原核表达载体,并在E.coli-BL21中进行高效表达。[方法]根据GenBank中收录的大麦黄矮病毒PAV6株系的基因序列设计合成1对引物,应用RT-PCR技术从感染大麦黄矮病毒的叶片中扩增得到大麦黄矮病毒(BYDV)的运动蛋白(MP)基因,利用基因重组技术构建pGEX-4T-1-MP,将其转化至大肠杆菌表达菌株E.coli-BL21(DE3)中,用IPTG诱导重组质粒pGEX-4T-1-MP在E.coli-BL21中进行表达。[结果]对重组质粒进行酶切分析及序列测定,鉴定正确后,与GeneBank中收录的大麦黄矮病毒PAV6株系的MP基因序列比对分析,同源性达100%。在IPTG诱导下,高效表达出相对分子质量约43 kD的蛋白,蛋白质电泳(SDS-PAGE)结果表明,表达的蛋白条带与预期的GST-MP融合蛋白相符。[结论]成功构建了pGEX-4T-1-MP的原核表达载体,在E.coli-BL21中高效表达了MP,为进一步研究该蛋白的结构和功能奠定基础。

中国小麦花叶病毒运动蛋白基因的克隆及其表达

应用RT-PCR技术从小麦病叶中扩增得到中国小麦花叶病毒(CWMV)的运动蛋白(MP)基因,在大肠杆菌BL21(DE3)plysS中得到大量表达,并以含表达产物的凝胶为抗原,免疫小鼠制备特异性抗血清,同时将MP基因重组到质粒pGBKT7中,电击转化酵母Y187菌株。Westernblot分析表明MP基因在酵母体内能以融合蛋白的形式正确表达,并具有免疫活性,可作为酵母双杂交系统中的“诱饵”质粒。

黄芩素甙对脑缺血沙土鼠海马CA1区微管运动蛋白Kinesin活性的影响(英文)

背景:脑缺血-再灌注损伤与 Kinesin 活性密切相关,研究认为微管运动蛋白 Kinesin 活性下降是脑缺血后神经细胞死亡的早期标志。黄芩素甙可以防止脑缺血-再灌注诱发的蛋白激酶 C 的激活、减轻钙超载,且可减小缺血梗死灶的体积,从而减轻脑缺血-再灌注损伤。但是黄芩素甙脑保护作用是否与 Kinesin 活性有关,目前很少报道。目的:观察黄芩素甙对脑缺血-再灌注期间海马锥体细胞微管运动蛋白Kinesin 活性的变化。设计:随机对照实验。单位:济宁医学院附属医院麻醉科及徐州医学院附属医院江苏省麻醉学重点实验室。材料:实验于 1999-02/08在江苏省麻醉学重点实验室完成。选用雄性沙土鼠 35只。方法:将沙土鼠随机分成假手术组(5只)、缺血再灌注对照组(15只)和黄芩素甙组(15只)3组,根据再灌注时间将缺血再灌注对照组和黄芩素甙组分为 3个亚组,即再灌注Ⅰ组(再灌注 6h)、再灌注Ⅱ组(再灌注 48h)和再灌注Ⅲ组(再灌注 96h)。每亚组 5只动物。缺血再灌注对照组和黄芩素甙组制备沙土鼠前脑缺血-再灌注损伤模型,脑缺血时间为 10m in。假手术组仅游离双侧颈总动脉但不予阻断。黄芩素甙组于缺血前 15m in 给予灯盏花素(其有效成分为黄芩素甙)45m g/kg腹腔注射,假手术组和缺血再灌注对照组则给予等量的生理盐水灌胃。应用免疫组织化学染色方法结合计算机图象分析技术测定海马微管运动蛋白 Kinesin 的活性。主要观察指标:各组动物 Kinesin 的活性及其变化。结果:纳入实验的动物为 35只,均进入结果分析,无实验动物脱失。在海马 CA1区,缺血再灌注对照组缺血-再灌注 6,48和 96h 时微管运动蛋白 Kinesin 活性分别降至假手术组的 58%,38%和 12%(P 均<0.01),而黄芩素甙组在再灌注 6,48和 96h 后,微管运动蛋白 Kinesin 活性分别为假手术组的 81%,61%和 21%,均明显高于缺血再灌注对照组(P均<0.05)。在海马 CA2,CA3和 CA4区,微管运动蛋白 Kinesin 的活性无明显变化。结论:黄芩素甙可通过抑制脑缺血-再灌注期间海马 CA1区微管运动蛋白 Kinesin 活性的下降达到脑保护作用。

大麦黄矮病毒外壳蛋白基因和运动蛋白基因酵母表达载体的构建

根据已知的大麦黄矮病毒GPV株系的外壳蛋白(CoatProteinCP)和移动蛋白(MovementProteinMP)基因序列合成了CP,MP基因的上下游引物,通过PCR扩增获得目的片段,经过SalI和PstI双酶切、连接、转化、重组质粒的酶切鉴定及基因测序,构建了酵母表达载体pGBKT7-GPV-CP和pGBKT7-GPV-MP,用于在酵母双杂交分析中表达诱饵融合蛋白,为进一步筛选小麦cDNA文库内与大麦黄矮病毒相互作用的寄主因子、克隆寄主因子,推测其种类和功能打下基础.

低温对沙土鼠脑缺血后微管运动蛋白和结构蛋白活性的影响

目的 :研究低温对脑缺血后沙土鼠微管运动蛋白 (Kinesin)和微管结构蛋白 (microtubuleassociatedprotein 2 ,MAP2 )活性的影响 ,并探讨二者活性变化与延迟性神经元死亡 (delayedneuronaldeath ,DND)的关系。方法 :Kinesin和MAP2的活性应用免疫组织化学染色结合计算机图象分析的方法测定 ,DND应用病理检查方法判断。结果 :低温明显减少脑缺血后的DND。前脑缺血再灌注后MAP2和kinesin活性随再灌注时间延长而进行性下降 ,且kinesin活性下降程度大于MAP2。低温明显减少脑缺血后MAP2和kinesin活性的下降程度。Kinesin活性下降的严重程度与脑缺血后DND的严重程度相一致。结论 :低温可明显减少脑缺血后的DND ,其机制与其减少脑缺血后运动蛋白ki

剔除小鼠神经微管运动蛋白Kif1b基因产生轴索型神经退行性病变

目的研究杂合子小鼠Kif1b基因剔除后神经系统的病理改变,为Charcot-Marie-Tooth(CMT)病动物模型的分型提供病理学依据。方法用PCR和Southern blotting检测基因型和验证同源重组,通过脊髓前角细胞HE染色和坐骨神经甲苯胺蓝染色及电镜标本制备观察病理改变。结果Kif1b基因组DNA用Southern blotting检测表明,PCR法挑选的19只小鼠全部发生了同源重组。杂合子Kif1b基因剔除小鼠的坐骨神经内,粗径有髓纤维轴索变性,数量减少。在光镜和电镜下可见轴索的限局性肿胀,肿胀处可见壅堵的细胞器,但未见髓鞘的改变、节段性脱髓鞘和"洋葱球"样改变;其脊髓前角细胞体中,HE染色可以看到典型的嗜酸性球状体变性,电镜下显示为各种细胞器堵塞在核周和在细胞通往轴索的出口处,包括排列紊乱的神经丝、线粒体、空泡及多室小体。脊髓前角细胞数目明显减少。结论杂合子Kif1b基因剔除小鼠的病理改变与人类CMT2A具有相似性。

脑缺血再灌注对海马微管运动蛋白活性的影响

目的 研究脑缺血再灌注期间海马CA1区锥体细胞微管运动蛋白kinesin活性的变化与延迟性神经元死亡 (delayedneurondeath ,DND)的关系。 方法 沙土鼠前脑缺血再灌注模型 ,脑缺血时间为 10分钟。采用免疫组织化学方法结合计算机图象分析技术测定kinesin的免疫活性。组织学检查判断DND。结果 脑缺血再灌注后海马CA1区微管运动蛋白kinesin的活性明显下降 ,在再灌注 6、48和 96小时其活性分别仅为假手术组的 49%、32 %和 12 % (P <0 0 1)。在再灌注 96小时 ,CA1区出现明显的DND ,而CA2、CA3、CA4微管运动蛋白活性无明显变化。结论 脑缺血再灌注后海马CA1区微管运动蛋白活性进行性下降 。