运输胁迫下日本黄姑鱼肝脏抗氧化系统的响应

研究了运输胁迫对日本黄姑鱼(Nibea japonica)肝脏抗氧化能力的影响。胁迫处理后,鱼体肝脏中抗氧化防御指标受到不同程度的影响。超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)活力快速升高并显著高于处理前水平(P<0.05),之后逐渐下降到与处理前无显著性差异。谷胱甘肽转移酶(GST)活力在处理后也有所升高,但一直与处理前无显著性差异(P>0.05)。肝脏中维生素C(VC)含量在处理后1 h显著性升高,以应对氧化压力;而自由基含量先升在胁迫0.5 h后快速降低并恢复到处理前水平。丙二醛(MDA)含量在处理后0.5 h达到最高值,然后快速恢复并与处理前无显著性差异(P>0.05)。研究表明,运输胁迫能通过氧化应激反应对日本黄姑鱼造成影响,在胁迫应激反应中SOD和CAT可以作为有效的生物指示剂用于胁迫状态的检测;同时,日本黄姑鱼具有较强的抗氧化防御体系,能较快地清除体内自由基并调整鱼体以适应外界环境的影响。

运输胁迫对四指马鲅幼鱼肝脏、鳃和脾脏组织结构的影响

【目的】探究运输胁迫对四指马鲅(Eleutheronema tetradactylum)幼鱼肝脏、鳃、脾脏组织结构的影响,提高种苗运输存活率,为其规模化养殖提供技术支持。【方法】以四指马鲅幼鱼为研究对象,分别设对照组(未运输)、混合组(运输,同时添加抗应激混合物)和空白组(运输,不添加任何抗应激剂),抗应激剂为维生素C∶谷氨酰胺=1∶1。混合组和空白组幼鱼经6 h运输后分别取样(肝脏、鳃和脾脏),经石蜡切片和HE染色,显微镜下观察测定肝脏、鳃和脾脏的细胞形态、组织结构、生活及生理状态。【结果】对照组幼鱼表现正常,未出现死亡现象,混合组幼鱼的累计死亡率为12.5%,空白组的累计死亡达27.5%。对照组幼鱼的各组织均呈正常形态;混合组幼鱼的肝脏部分区域细胞排列疏松,肝小板结构不清晰;空白组幼鱼的肝脏组织整体失去固有形态,肝小板结构消失不见,大部分细胞核变性呈椭圆形或纺锤形。混合组幼鱼的鳃丝排列混乱,少数鳃小片末端或整体肿胀,血窦内红细胞出现部分堆积现象,线粒体丰富细胞体积变大;空白组的鳃小片整体肿胀,血窦加粗,部分鳃小片因红细胞过多而胀破,线粒体丰富细胞体积变大且数量增多。混合组幼鱼的脾脏白髓区域相对增大,黑色素—巨噬细胞中心数量及大小均有所增加;空白组幼鱼的脾脏组织红髓区域占据大部分,白髓区域相对较少,呈零散分布,巨噬细胞中心减小。【结论】运输胁迫导致四指马鲅幼鱼肝脏、鳃及脾脏组织损伤,抗应激剂混合物虽然在一定程度上起到缓解作用,但并不能完全消除。

短途运输胁迫对珍珠龙胆石斑鱼血清酶活力及葡萄糖含量的影响

研究分析了运输胁迫后0,6,12,24,48,96,168 h珍珠龙胆石斑鱼血清酶及葡萄糖含量的变化。选取平均体质量为(205.5±34.76)g的珍珠龙胆石斑鱼240尾为试验对象,进行30 min的短途运输胁迫后,测定珍珠龙胆石斑鱼部分血清指标。结果表明:总超氧化物歧化酶(T-SOD)活力在6 h达到最低值,胁迫后的0,6,12,24 h与胁迫前和胁迫后96,168 h差异性显著(P<0.05)。过氧化氢酶(CAT)活力在胁迫后的6 h达到最高值,胁迫后的0,6,12,24 h显著高于胁迫前水平(P<0.05)。谷胱甘肽(GSH)含量在胁迫后0 h最高,显著高于胁迫前及胁迫后各时间段(P<0.05)。总抗氧化能力(T-AOC)在胁迫后24 h达到最大值,显著高于胁迫前及胁迫后0,168 h值(P<0.05)。谷草转氨酶(GOT)和谷丙转氨酶活力(GPT)均在胁迫后6 h达到最大值,在胁迫后的6~24 h显著高于胁迫前及其余各时间组水平(P<0.05)。酸性磷酸酶(ACP)活力变化趋势与碱性磷酸酶(AKP)活力基本一致,胁迫后24 h达到最大值,显著高于胁迫前及胁迫后除12 h的其余各组(P<0.05)。乳酸脱氢酶(LDH)活力在运输后6 h达到最高值(P<0.05),6~48 h酶活力值显著高于胁迫前和胁迫后其余各时间组(P<0.05)。葡萄糖(GLU)含量在胁迫后48 h达到最大值,随后恢复到胁迫前水平,胁迫前与胁迫后各时间组间差异不显著(P>0.05)。研究表明:短途运输胁迫造成了珍珠龙胆石斑鱼的应激反应,但在胁迫后168 h血清部分生理指标趋于胁迫前水平,对其生理机能不会产生持久性影响。

运输胁迫对大菱鲆生理免疫影响的初步探究

大菱鲆(Scophthalmus maximus)是我国北方的重要经济鱼种,为研究运输胁迫对大菱鲆生理免疫的影响,并确定大菱鲆的优选运输方案,采用体长为4.65±1cm(幼体组)和14.50±1cm(成体组)2种规格的大菱鲆为研究对象,在实验室模拟运输条件,分析其非特异性免疫、呼吸排泄及死亡率变化,并探究活鱼苗运输的优选方案,结果显示:(1)过氧化氢酶(CAT)、碱性磷酸酶(AKP)、超氧化物歧化酶(SOD)、溶菌酶(LZM)呈现降低趋势并明显低于对照组,随着模拟运输中温度的升高、密度的增加和震动强度的增加而降低,谷草转氨酶(GOT)、谷丙转氨酶(GPT)、丙二醛(MDA)呈现升高趋势并明显高于对照组,随着模拟运输中温度的升高、密度的增加和震动强度的增加而升高;(2)大小2种规格的大菱鲆在运输胁迫下表现出了不同的免疫能力,幼体组中的GOT、GPT、SOD、MDA的表现优于成体组,成体组中的CAT、AKP、LZM优于幼体组;(3)耗氧率和排氨率随着模拟运输中温度的升高、密度的增加和震动强度的增加而升高,幼体组的耗氧率和排氨率的升高程度要低于成体组;(4)实验结束后的幼体组与成体组大菱鲆死亡率均随时间变化先升高后降低,在实验结束时的死亡率极低,而在0~24h死亡率达总死亡率的50%以上,24~48h内的死亡率又开始下降。随着模拟运输中温度的升高、密度的增加和震动强度的增加,2种规格的大菱鲆的总死亡率呈现上升趋势,成体组的总死亡率的升高程度要低于幼体组;(5)通过正交实验极差分析法得出综合考虑成本及运输效果前提下,幼体组与成体组大菱鲆的优选运输方案均为A1B1C2,即温度为15℃、密度为ind·L^-1、震动强度为200RPM。

塑料袋包装充氧运输胁迫对四指马鲅幼鱼抗氧化系统的影响及抗应激剂的作用

为探究塑料袋包装充氧运输胁迫对四指马鲅(Eleutheronema tetradactylum)幼鱼肝、肌肉抗氧化系统的影响以及抗应激剂的生理作用。本研究设置了未经运输的幼鱼30尾作为对照组、不添加任何抗应激剂运输的幼鱼90尾作为空白组、添加维生素C(VC)运输的幼鱼90尾作为维生素C组以及添加谷氨酰胺(Gln)运输的幼鱼90尾作为谷氨酰胺组,在运输实验进行的2 h、6 h以及9 h采样,不同时间点每组各取30尾幼鱼分别采集肝、肌肉样品进行相关指标的测定。测定项目包括:超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、还原型谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)以及总抗氧化能力(T-AOC)。结果显示,运输胁迫使空白组肝和肌肉中SOD活性最终显著(P<0.05)高于对照组,而维生素C组和谷氨酰胺组由于抗应激剂的存在而使其最终活性低于对照组;运输胁迫使空白组和维生素C组肝以及肌肉中CAT活性显著(P<0.05)升高,最终其活性均显著(P<0.05)高于对照组,而谷氨酰胺组最终值与对照组无显著差异(P>0.05);运输胁迫使空白组肝和肌肉MDA含量均显著(P<0.05)升高,而抗应激剂维生素C和谷氨酰胺明显缓解了这一现象;GSH含量在空白组、维生素C组和谷氨酰胺组的肝与肌肉中均出现了不同的变化趋势,可能与这两种组织所承担的生理功能不同有关;运输胁迫后,空白组肝与肌肉T-AOC值均显著(P<0.05)高于对照组,而维生素C组和谷氨酰胺组最终则略高于或等于对照组。本研究分析了运输胁迫下四指马鲅幼鱼抗氧化系统变化规律以及抗应激的作用效果,旨在为其养殖生产提供参考依据。

运输胁迫对牙鲆血浆IGF-1及IGFBP-1等指标的影响

为了研究运输胁迫对牙鲆的影响,试验采用模拟国内正常等级公路上运输环境的方法,测定不同运输时间对牙鲆血浆中胰岛素样生长因子-1(IGF-1)、胰岛素样生长因子结合蛋白-1(IGFBP-1)等指标的影响。结果表明:运输胁迫可以明显降低血浆IGF-1、IGFBP-1及一氧化氮(NO)水平,明显提高血浆一氧化氮合酶(NOS)、丙二醛(MDA)水平(P<0.01)。说明运输胁迫通过影响机体的内分泌指标,造成体内的氧化应激,将会对牙鲆的后续养殖造成不良影响。

运输胁迫对牙鲆血液生化指标的影响

为了探讨外界环境变化对牙鲆生理机制的影响,试验采用模拟国内正常等级公路上运输环境的方法,研究运输胁迫对牙鲆血液生化指标的影响。结果表明:运输胁迫会导致牙鲆血浆中总胆固醇、血糖与谷丙转氨酶的水平明显升高。说明运输胁迫会影响营养物质在其体内的分配及肝脏功能,并降低机体的免疫机能,对动物生产造成不利影响。

密度胁迫对黑鲷运输存活率及免疫酶活性的影响

【目的】研究密度胁迫对黑鲷鱼苗运输存活率及免疫酶活性的影响,筛选出适宜的运输密度,为黑鲷科学运输提供参考依据。【方法】选取体长9.0~11.7 cm的健康黑鲷鱼苗490尾,共设5个密度组(D1、D2、D3、D4和D5),每袋对应装入黑鲷鱼苗10、15、20、25和30尾,采用塑料袋充氧密封运输方式,运输时间2 h 45 min,分别于运输后0、6、12、24和48 h共5个时间点取样检测,对比不同密度运输后黑鲷幼鱼鳃丝Na+/K+-ATPase酶(NKA)和肝脏超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、乳酸脱氢酶(LDH)活性及总蛋白(TP)、丙二醛(MDA)含量的变化。【结果】采用塑料袋充氧密封运输方式,各密度组的黑鲷鱼苗存活率均为100%,运输后恢复48 h的存活率仍为100%。经塑料袋充氧密封运输2 h 45 min后,各密度组黑鲷鱼苗鳃丝组织中的NKA活性显著低于运输前水平(P<0.05,下同),肝脏组织中的SOD和CAT活性显著高于运输前水平,但三者均在恢复12 h后达到峰值;肝脏组织中的MDA含量整体上呈先增后降的变化趋势,除D1组外其他密度组的MDA含量均在恢复6 h后达到峰值,随后缓慢下降,恢复48 h后D1、D2、D3和D4组的MDA含量基本恢复到运输前水平;肝脏组织中的TP含量显著低于运输前水平,恢复48 h后其含量明显升高,但仍低于运输前水平;肝脏组织中的LDH活性随时间推移的变化趋势各不相同,D1、D2和D3组的LDH活性整体上呈逐渐降低趋势,D4和D5组的LDH活性则呈先增后降的变化趋势。【结论】密度胁迫对黑鲷鱼苗运输存活率无影响,但其免疫酶活性及代谢能力均受影响,需在运输后暂养48 h才开始或基本恢复到运输前水平。在实际生产中,采用塑料袋充氧密封运输且运输时间不超过3 h时,以每袋装20~25尾9.0~11.7 cm规格的黑鲷鱼苗为宜。

四指马鲅热休克蛋白70基因(HSP70)表达分析

四指马鲅(Eleutheronema tetradactylum)为名贵海产鱼类,因其对应激反应强烈,易在运输过程中受损。热休克蛋白70(heat shock protein 70,HSP70)作为一种热休克蛋白(heat shock protein,HSP),是HSP家族中最重要的一员,对细胞蛋白质折叠过程及细胞对压力的适应起着重要作用。比较四指马鲅仔鱼和幼鱼在运输胁迫下的抗氧化能力和应激反应,进行幼鱼鳃组织学观察,探究热休克蛋白HSP70基因的组织表达模式以及在仔鱼和幼鱼中的表达差异,研究验证了运输胁迫下仔鱼和幼鱼阶段四指马鲅的抗氧化能力和HSP70表达呈现显著差异,并探讨了其作为评估抗应激反应及养殖管理效果的生物指标的潜力。

运输期间维生素浸泡对红鳍东方鲀(Takifugu rubripes)生理生化指标的影响

运输操作会对鱼类造成应激胁迫,口服B族维生素、维生素C有助于鱼类缓解应激胁迫,但用上述维生素药浴是否有助于缓解鱼类的应激反应,尚未见报道。本试验在体重为(23.8±3.8)g的红鳍东方鲀(Takifugu rubripes)运输期间(持续30 min),用维生素B2(10 mg/L)、维生素C(3.4g/L)药浴,对照组在运输期间不加维生素。在运输结束后第一、三、五和七天取血液和组织,检测生理生化指标。结果表明,与维生素组相比,对照组白细胞总数、淋巴细胞总数、中间细胞总数、中性粒细胞总数、红细胞压积和血小板总数显著升高(P<0.05),肝胰脏超氧化物歧化酶(SOD)、溶菌酶(LZM)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、乳酸(LD)、过氧化氢酶(CAT)、丙二醛(MDA)、还原型谷胱甘肽(GSH)显著升高(P<0.05),脾SOD、CAT显著升高(P<0.05);对照组肌肉总抗氧化能力(T-AOC)、MDA显著升高(P<0.05),维生素组差异不显著;试验组肌肉LZM、LDH变化显著(P<0.05),且对照组波动更大。结论:在30 min的运输过程中用上述维生素浸泡,有助于维持红鳍东方鲀生理生化指标的相对稳定,缓解运输对其造成的胁迫。

养殖密度对黑鲷幼鱼生理指标和抗应激能力的影响

为探讨养殖密度对黑鲷(Acanthopagrus schlegelii)幼鱼生理指标和抗应激能力的影响,分析了4种养殖密度:0.164 kg·m^(-3)(A组)、0.328 kg·m^(-3)(B组,对照组,近似实践中苗种养殖密度)、0.492 kg·m^(-3)(C组)和0.656 kg·m^(-3)(D组)条件下黑鲷的生长、存活和应激相关指标变化,并通过运输操作检验了应激状态下各组黑鲷的适应差异。结果显示,经过60 d的实验,各密度组黑鲷生长和存活存在差异,其中A组黑鲷终末全长、体质量、增重率和存活率等均显著高于C、D两个高密度组(P<0.05)。生理生化分析显示,各组黑鲷皮质醇含量与对照组无显著性差异(P>0.05),但C、D组皮质醇含量显著高于A组(P<0.05);C、D两组黑鲷体内葡萄糖含量较A、B两组显著升高,乳酸含量以及超氧化物歧化酶(SOD)和溶菌酶活力与对照组相比显著升高,而A组黑鲷丙二醛(MDA)含量较对照组显著降低(P<0.05)。运输后,A组黑鲷皮质醇含量在2 h时显著升高(P<0.05),之后又快速回落,而C、D高密度组的皮质醇一直处于较高水平。C、D两组黑鲷体内葡萄糖含量在运输后变化基本不显著,乳酸含量在运输48 h时D组显著高于对照组(P<0.05);低密度A组黑鲷体内葡萄糖含量变化较大。此外,C、D组SOD活力较运输前显著降低(P<0.05)。研究表明,养殖密度不仅影响黑鲷的生长,还可通过影响鱼体能量代谢、抗氧化和免疫能力进而影响其健康状况。适当降低养殖密度可减少黑鲷养殖过程中的应激反应,提升群体的抗应激能力,从而提升其放流后苗种在自然水体中的适应力和放流效果。

刀鲚POMC基因的cDNA克隆及其应激应答

为了研究刀鲚(Coilia nasus)阿黑皮素原(proopiomelanocortin,POMC)基因的应激应答及调控,克隆了刀鲚POMC基因的c DNA全长。刀鲚POMC基因的c DNA全长2030 bp,编码区699 bp,编码232个氨基酸。二级结构预测显示,刀鲚POMC包括信号肽(signal peptide)、N末端区(N-terminal region,NPP)、促肾上腺皮质激素结构域(adrenocorticotropic hormone,ACTH)、β-脂解素(β-LPH)、α-促黑素(α-MSH)、促肾上腺皮质激素样垂体中叶多肽(CLIP)、γ-脂解素(γ-LPH)、β-促黑素(β-MSH)和β-内咖肽(β-EP)结构域。运用荧光定量的方法检测了该基因在刀鲚不同组织中的表达分布。结果显示,POMC在健康刀鲚的脑高表达,鳃、肾、精巢相对高表达,肝、脾、肠、头肾、肌肉和卵巢中微量表达。运输胁迫后,POMC基因的表达量显著下降(P<0.05);10‰ NaCl组4 h和6 h POMC基因的表达量显著上调(P<0.05),6 h的表达量恢复至应激前。POMC基因在脂肪代谢及应激调控中发挥重要的功能,本研究结果可为该基因在刀鲚后续育种及应激调控工作提供重要基础。