雌激素诱导C57BL/6妊娠小鼠肝损伤的比较研究

目的比较雌激素对C57BL/6同种系和异种系妊娠小鼠肝脏的影响,探讨妊娠期肝损伤小鼠模型选择C57BL/6异种系妊娠小鼠的可能性。方法选择健康C57BL/6雄鼠、BALB/c雄鼠分别和C57BL/6雌鼠交配,得到C57BL/6同/异种系妊娠小鼠,并分为对照组、溶剂组和不同剂量给药组。给药组从怀孕10 d起连续4 d分别每天皮下注射不同剂量17-α-乙炔雌二醇。结果给药的异种系孕鼠血清中除碱性磷酸酶(ALP)指标外丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、总胆红素(TBIL)和甘胆酸(CG)升高水平与同种系孕鼠比较差异有统计学意义(P<0.05),其肝脏组织病理学结果也不同,且剂量为1.0μg/g体重的异种系孕鼠肝脏NK细胞出现集聚和活化现象。结论雌激素对C57BL/6同种系和异种系妊娠小鼠肝脏作用不同,选择雌激素诱导C57BL/6异种系妊娠小鼠建立妊娠期肝损伤模型能够反映该病的肝脏免疫学变化。

C57BL/6小鼠的血循环DNA的定量研究

目的探讨循环DNA的定量检测在荷瘤C57BL/6小鼠中的应用价值。方法以异位接种法在C57BL/6小鼠中建立B16黑色素瘤肝转移模型,以”微量基因组抽提试剂盒”抽提血清DNA,用SYBR Green I斑点荧光染色法对DNA进行定量。结果在正常小鼠中,血循环DNA为(62.4±25.52)ng/mL、荷瘤伴有肝转移小鼠为(241±73.7)ng/mL(P<0.01);小鼠的血循环DNA水平与小鼠肝转移的分期相关,I期、Ⅱ期肝转移小鼠分别为(131.11±54.32)ng/mL和(170±10.96)ng/mL, Ⅲ期、Ⅳ期小鼠为(235±85.54)ng/mL和(271±65.76)ng/mL。用健脾理气中药抑制肿瘤生长和转移的同时,荷瘤小鼠血循环DNA也同步下降。结论循环DNA定量检测能客观反应小鼠荷瘤程度,并能动态反应药物的疗效,是一具有应用前景的肿瘤标志物。

博来霉素诱导G57BL/6与ICR小鼠肺间质纤维化模型的比较

目的探讨C57BL/6与ICR小鼠在博来霉素(BLM)致肺纤维化过程中的种属差异。方法 8周龄雌性C57BL/6小鼠19只,ICR小鼠16只,分别经尾静脉一次性注射BLM150mg/kg,观察每组小鼠体重、生存率及肺组织病理改变。结果①C57BL/6与ICR小鼠最低体重分别发生在静脉注射处置后的7d和5d,最低体重分别为注射前的65.46%和73.21%,两组间无显著的统计学差异。②C57BL/6与ICR小鼠的生存率分别为36.84%和56.25%,两组间存在显著的统计学差异。③C57BL/6小鼠BLM注射后28d,在胸膜下及血管周围形成广泛、稳定的间质纤维化病理改变,而ICR小鼠肺组织未见明显纤维化形成。C57BL/6小鼠肺纤维化病理评分明显高于ICR小鼠(P<0.001)。结论 BLM诱导的肺纤维化作用在C57BL/6与ICR小鼠间存在着明显的种属差异。C57BL/6小鼠较ICR小鼠更适于复制博来霉素诱导的肺纤维化动物模型。

顺铂注射对C57BL/6小鼠肾脏功能和结构影响

目的改良并完善顺铂诱导小鼠慢性肾脏疾病模型,研究其肾功能、组织结构及分子水平的改变。方法对不同周龄雄性C57BL/6小鼠注射不同剂量顺铂,观察小鼠生存率,选取合适的顺铂剂量及小鼠周龄用以制备模型。通过酶联免疫吸附试验测定顺铂注射后小鼠血肌酐(Scr)和血尿素氮(BUN)水平的变化,采用免疫荧光(IF)、马松三色(MT)染色和实时荧光定量PCR(RT-qPCR)方法观察顺铂注射对肾纤维化的影响,采用IF、苏木精-伊红(HE)染色和RT-qPCR方法观察顺铂注射对小鼠肾组织中细胞因子和炎症细胞浸润的影响。结果选择8周龄小鼠,通过腹腔注射7 mg/kg顺铂(每周1次,共4次)构建慢性肾脏疾病模型。与对照组(小鼠腹腔注射无菌生理盐水)比较,顺铂注射24、42 d小鼠Scr和BUN水平显著升高(F=12.05、41.89,P<0.01),肾脏纤维化面积显著增加(F=78.87,P<0.01),肾纤维化相关基因胶原纤维1α1(Col1α1)和纤连蛋白(Fn)mRNA表达水平明显升高(F=37.01、57.10,P<0.01),肾组织炎性细胞、CD3^(+)T细胞和F4/80^(+)巨噬细胞浸润明显增加,肾组织炎症相关细胞因子白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)以及肿瘤坏死因子α(TNF-α)mRNA表达水平显著升高(F=10.24~86.82,P<0.01)。注射42 d小鼠上述指标变化较注射24 d小鼠更明显(P<0.01)。结论反复低剂量顺铂腹腔注射后肾脏发生纤维化、慢性炎症和功能障碍。本研究通过缩短模型制备周期以及减少顺铂用药剂量,完善了顺铂诱导肾纤维化和慢性炎症小鼠模型。

链脲佐菌素诱导C57BL／6小鼠糖尿病瘙痒模型的建立

【目的】探讨链脲佐菌素（streptozotocin，STZ）诱导C57BL／6小鼠糖尿病瘙痒模型的最佳剂量。【方法】24只雄性8周C57BL／6野生型小鼠，体重20～28g，随机分为四组：A组（对照组）单次腹腔注射等剂量柠檬酸钠溶液10mL／kg，PH=4．5；B组STZ单次大剂量腹腔注射STZ160mg／kg；C组STZ腹腔注射40mg／kg，连续注射5d，每次给药时间间隔24h；D组STZ两次中剂量注射，腹腔注射STZ85mg／kg＋65mg／kg，两次间隔时间24h。从给药前4周开始，A组正常饮食，B、C、D组高脂饮食喂养至实验结束。注射STZ前1d、注射STZ后1、2、3、4周测定动物的空腹血糖（FBG）、体重，采用录像记录30min搔抓次数。【结果】与A组相比，B、C、D组造模后血糖升高并在不同时间点达到糖尿病标准（〉200mg／dL）（P〈0．05），B组体重较A、C、D组下降（P〈0．05），D组在STZ注射后第2、3周搔抓次数较A、B、C增多（P〈0．05）。【结论】腹腔分两次、间隔24h注射STZ85mg／kg＋65mg／kg并配合高脂饮食是建立糖尿病并发瘙痒小鼠模型的合适方法。

C57BL/6小鼠系膜增生型肾小球肾炎的复制

目的探索一种复制小鼠系膜增生型肾小球肾炎动物模型的方法。方法80只C57BL/6小鼠随机分为4组(每组20只):A-正常对照组;B-竹叶青蛇毒2 mg/kg注射组;C-竹叶青蛇毒4 mg/kg注射组;D-竹叶青蛇毒6mg/kg注射组。按照分组要求计算B、C、D 3组小鼠中每只小鼠需注射的竹叶青蛇毒的总量,配制3种不同浓度的竹叶青蛇毒液,B、C、D 3组小鼠分别尾静脉注射不同浓度的竹叶青蛇毒液0.2 mL,A组小鼠尾静脉注射生理盐水0.2 mL以进行对照。结果竹叶青蛇毒注射后的小鼠均出现中毒性症状。C、D组小鼠因蛇毒注射剂量较大,死亡率高达50%,且集中于前3 d内死亡,3 d后中毒小鼠的活动基本如常。B组与正常对照组小鼠无死亡。中毒小鼠的肾功能与正常对照组相较无明显差别,但均出现了肾小球系膜细胞增生,系膜基质增多,肾小球及间质内炎性细胞浸润等病理学改变。结论竹叶青蛇毒尾静脉注射是一种复制小鼠系膜增生型肾小球肾炎动物模型的较好的方法。

NLRP3基因敲减对高脂高糖饮食诱导的非酒精性脂肪性肝炎小鼠模型的影响

目的探讨NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)基因敲减对高脂高糖诱导的非酒精性脂肪性肝炎(NASH)小鼠模型的影响。方法将44只小鼠随机分为正常饮食组(CON)20只,高脂高糖造模组(HFHC)24只。造模14周末,随机选取4只HFHC组小鼠进行腺相关病毒9(AAV9)尾静脉注射预实验,4周后验证NLRP3敲减模型是否成功。18周末确认敲减成功后,对剩余40只小鼠进行AAV9一次性尾静脉注射,分为CON+NLRP3敲减阴性对照组(CON+NLRP3-NC)、CON+NLRP3敲减组(CON+NLRP3-KD)、HFHC+NLRP3-NC及HHFHC+NLRP3-KD组,每组10只,继续造模6周。24周末取材观察炎症小体活化效应,检测小鼠体质量、肝质量、肝指数及糖代谢(空腹血糖、空腹胰岛素及HOMA-IR指数)指标;检测小鼠肝脂质含量(肝组织TG及油红O染色)、肝脏炎症(血清ALT活性、HE染色及炎症相关基因)及肝纤维化(天狼星红染色及纤维化相关基因)指标。计量资料多组间比较使用单因素方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验。结果与CON+NLRP3-NC组相比,Western Blot结果提示,HFHC+NLRP3-NC组的NLRP3、pro-Caspase1、Caspase1、ASC及IL-1β蛋白水平均升高,HFHC+NLRP3-KD组均降低(P值均<0.05);HFHC+NLRP3-NC组小鼠体质量、肝质量、肝指数及糖代谢指标均有不同程度升高,HFHC+NLRP3-KD组均显著改善(P值均<0.05);在肝脂肪沉积方面,与CON+NLRP3-NC组相比,HFHC+NLRP3-NC组肝脏TG明显增高,油红O染色显示大量红色脂滴,HFHC+NLRP3-KD组肝脏TG及肝脂滴数量显著减少(P值均<0.01);在肝脏炎症方面,HFHC+NLRP3-NC组血清ALT,非酒精性脂肪性肝病活动度(NAS)评分及炎症相关基因均较CON+NLRP3-NC组明显升高,HFHC+NLRP3-KD组均明显降低(P值均<0.01);在肝纤维化方面,HFHC+NLRP3-NC组肝胶原纤维面积以及纤维化相关基因均较CON+NLRP3-NC组明显升高,HFHC+NLRP3-KD组纤维化相关基因均明显降低(P值均<0.05),胶原纤维面积虽有降低趋势但差异无统计学意义(P>0.05)。结论NLRP3基因敲减可显著改善高脂高糖饮食诱导的NASH小鼠模型肝脂肪沉积及炎症。

人脐带间充质干细胞(hUC-MSC)对肝纤维化小鼠模型的治疗作用及其机制分析

目的 探讨人脐带间充质干细胞(hUC-MSC)对肝纤维化小鼠的治疗作用及其机制。方法 选取18只SPF级6周龄C57BL/6小鼠,使用随机数字表法随机分为3组,分别为对照组、CCl_(4)模型组(CCl_(4)组)和h UC-MSC治疗组(MSC组),每组6只。CCl_(4)组和MSC组腹腔注射CCl_(4)溶液构建小鼠肝纤维化模型,对照组同时注射相同剂量玉米油,MSC组在注射CCl_(4)的过程经尾静脉注射hUC-MSC。于第8周末采取小鼠血清,处死小鼠,取小鼠肝脏固定。使用酶联免疫吸附法测定炎症因子水平,自动生化检测仪检测肝功能相关指标,HE染色、Masson染色、天狼星红染色及α-SMA免疫荧光用于评估肝纤维化情况;TGF-β刺激的肝星状细胞(HSC)分别在有无几丁质酶3样蛋白1(CHI3L1)添加的培养基中与hUC-MSC共培养,Western Blot试验检测蛋白表达水平。计量资料多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用Dunnett-t检验。结果 Masson染色、天狼星红染色提示CCl_(4)组小鼠纤维化较对照组明显(P值均<0.05),MSC组小鼠纤维化较CCl_(4)组减轻(P值均<0.05)。CCl_(4)组IL-1β、IL-6、AST、ALT和ALP水平较对照组明显升高(P值均<0.05),MSC组IL-6、AST、ALT及ALP水平较CCl_(4)组明显降低(P值均<0.05)。CCl_(4)组CHI3L1和α-SMA的表达均高于对照组和MSC组(P值均<0.05)。细胞培养实验显示,MSC+HSC组Bax表达高于HSC组和MSC+CHI3L1组(P值均<0.05),提示CHI3L1逆转了MSC对活化的HSC的促凋亡作用。结论 hUC-MSC治疗可以改善小鼠肝纤维化,其作用机制可能与抑制CHI3L1从而促进HSC的凋亡相关。

CB_(2)受体激活对慢性PD模型小鼠运动功能和黑质胶质细胞活化影响

目的通过行为学、免疫印迹技术及免疫组织化学技术探讨大麻素Ⅱ型(CB_(2))受体对1-甲基-4-苯基吡啶(MPTP)诱导的慢性帕金森病(PD)模型小鼠运动功能、黑质(SN)区酪氨酸羟化酶(TH)蛋白表达及小胶质细胞和星形胶质细胞活化的影响。方法将30只8周龄雄性C57BL/6野生型(WT)小鼠随机分为WT对照组(A组)、WT MPTP组(B组)、WTCB_(2)受体激动剂(JWH133)组(C组)、WT MPTP+JWH133组(D组)和WT MPTP+JWH133+CB_(2)受体拮抗剂(AM630)组(E组),12只8周龄雄性CB_(2)受体敲除(CB2-KO)C57BL/6小鼠随机分为CB_(2)-KO对照组(F组)和CB_(2)-KOMPTP组(G组)。模型组小鼠首先腹腔注射20μg/(kg·d)AM630和(或)10μg/(kg·d)JWH133,每天1次,连续注射30d;然后腹腔注射30mg/(kg·d)的MPTP,每周2次,持续4周。对照组小鼠腹腔注射等量的生理盐水。应用行为学实验检测各组小鼠爬杆与转棒时间,免疫印迹技术检测SN区TH蛋白的表达,免疫组织化学染色检测SN区小胶质细胞和星形胶质细胞数量和形态变化。结果与A组相比,B组小鼠爬杆时间增加,转棒时间减少;与B组相比,D组小鼠爬杆时间减少,转棒时间增加;与D组相比,E组小鼠爬杆时间增加,转棒时间减少;与F组相比,G组小鼠爬杆时间增加,转棒时间减少。上述差异具有统计学意义(F=29.70、45.45,q=4.87~18.09,P<0.05)。与A组相比,B组小鼠SN区TH蛋白表达水平下降;与B组相比,D组小鼠SN区TH蛋白表达水平上调;与D组相比,E组小鼠SN区TH蛋白表达水平下降;与F组相比,G组小鼠SN区TH蛋白表达水平下降。上述差异具有统计学意义(F=24.88,q=5.09~8.88,P<0.001)。小鼠SN区活化的小胶质细胞和星形胶质细胞计数显示,与A组相比,B组明显增加;与B组相比,D组明显减少;与D组相比,E组明显增加;与F组相比,G组明显增加。上述差异具有统计学意义(F=269.80、708.50,q=13.29~54.78,P<0.01)。结论激活CB_(2)受体能够改善MPTP诱导的慢性PD模型小鼠的运动功能障碍,抑制小鼠SN区小胶质细胞和星形胶质细胞的活化。

TRPC6对糖尿病肾病小鼠肾小管间质炎症的影响及其机制

目的探讨瞬时受体电位阳离子通道6(TRPC6)对糖尿病肾病(diabetickidneydisease,DKD)小鼠肾小管间质炎症的影响及其机制。方法将6周龄雄性C57BL/6J小鼠36只随机分为6组,每组6只。对照组(A组)和DKD组(B组)分别腹腔注射0.1mmol/L柠檬酸盐缓冲液和10g/L链脲佐菌素(后简称给药);DKD+生理盐水干预组(C组)和DKD+线粒体自噬激活剂干预组(D组)在B组基础上分别灌胃生理盐水和10mmol/L尿石素A;DKD+阴性对照慢病毒转染组(E组)和DKD+TRPC6敲降慢病毒转染组(F组)在B组基础上分别尾静脉注射阴性对照慢病毒和TRPC6敲降慢病毒。测定各组小鼠给药后第12周时的全血空腹血糖(FBG)水平、尿微量白蛋白肌酐比(ACR)和血尿素氮(BUN)水平,PAS染色观察小鼠肾小管损伤情况并进行评分,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术检测小鼠肾组织中炎性因子(IL-1β、MCP-1、TNF-α)mRNA水平,免疫组织化学染色观察小鼠肾组织中TRPC6蛋白表达水平,蛋白免疫印迹检测小鼠肾组织中TRPC6、LC3B、P62、PINK1、Parkin相对表达量,透射电镜观察小鼠肾小管细胞中线粒体自噬体数量变化。将HK-2细胞分为高糖+TRPC6siRNA+DMSO干预组(G组,TRPC6siRNA转染+35.0mmol/L葡萄糖+0.06%DMSO)和高糖+TRPC6siRNA+线粒体自噬抑制剂干预组(H组,TRPC6siRNA转染+35.0mmol/L葡萄糖+12μmol/L千层纸素A),RT-qPCR技术检测细胞中炎性因子(IL-1β、MCP-1、TNF-α)mRNA的水平。结果给药后第12周时,B组小鼠全血FBG水平、ACR、BUN水平、肾小管损伤评分、肾组织炎性因子mRNA水平及TRPC6、P62蛋白表达水平均显著高于A组(t=2.77~13.61,P<0.05),肾组织LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ及PINK1、Parkin蛋白表达水平显著低于A组(t=3.33~14.63,P<0.05),肾小管细胞中线粒体自噬体数量减少;D组小鼠ACR、BUN水平、肾小管损伤评分、肾组织炎性因子mRNA水平及P62蛋白表达水平显著低于C组(t=2.40~23.50,P<0.05),肾组织LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ及PINK1、Parkin蛋白表达水平显著高于C组(t=5.74~12.50,P<0.05),肾小管细胞中线粒体自噬体数量增多;F组小鼠ACR、BUN水平、肾小管损伤评分、肾组织炎性因子mRNA水平及TRPC6、P62蛋白表达水平均显著低于E组(t=2.45~7.09,P<0.05),肾组织LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ及PINK1、Parkin蛋白表达水平显著高于E组(t=7.91~13.18,P<0.05),肾小管细胞中线粒体自噬体数量增多;H组细胞的炎性因子mRNA水平显著高于G组(t=5.40~7.27,P<0.05)。结论TRPC6可通过上调自身表达,抑制肾小管细胞线粒体自噬,从而加重DKD小鼠的肾小管间质炎症。TRPC6抑制药物有希望用于DKD治疗。

鼠巨细胞病毒感染C57BL/6小鼠急性肝炎动物模型的建立与鉴定

目的:建立鼠巨细胞病毒(MCMV)感染C57BL/6小鼠急性肝炎模型并对其感染特点进行分析及鉴定。方法:将24只C57BL/6小鼠随机分为阴性对照组(n=12)及病毒感染组(n=12),病毒感染组腹腔注射1.0×10^(6) PFU(200μL)MCMV悬液,阴性对照组注射等体积小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)悬液。于感染后第3天和第7天取外周血分离血清检测谷丙转氨酶(ALT)及谷草转氨酶(AST)。同时进行肝组织病毒分离、组织病理学及MCMV IE和M55基因、细胞因子白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的检测。结果:病毒感染组肝组织匀浆病毒分离均为阳性,肝炎发生率为100%。在感染后第3天即发生肝炎病理改变,病毒感染组血清ALT及AST较阴性对照组明显升高(P<0.01);病毒感染组肝脏HE染色第3天可见局灶性炎性细胞浸润及肝脏点灶状坏死,持续至第7天,Ishak评分较阴性对照组明显升高(P<0.01);在感染后第3天病毒感染组肝组织内可检测到MCMV IE及M55基因,且在感染后第7天仍可测得IE基因;感染后第3天及第7天病毒感染组炎性细胞因子IL-6、TNF-α及IL-1βmRNA表达水平明显升高(P<0.05)。结论:成功建立MCMV感染C57BL/6小鼠急性动物肝炎模型,其感染表现主要集中在急性感染前期。

TGF-β1对慢性EAE模型C57BL/6小鼠脑和脾脏Foxp3 mRNA表达影响的研究

[目的]观察外源性转化生长因子β1（TGF-β1）对慢性实验性变态反应性脑脊髓炎（EAE）C57BL／6小鼠脑和脾脏Foxp3 mRNA表达的影响。[方法]72只C57BL／6小鼠，随机分为致病组（A组）、干预组（B组）、佐剂对照组（C组）、干预对照组（D组）。各组小鼠取发病初、发病高峰和慢性期不同时间点分为1、2、3亚组。用盲法每天观察动物行为活动，称体重并按Benson评分标准做EAE严重性的临床评估，RT-PCR技术观察各组各期脑和脾组织Foxp3 mRNA的表达变化。[结果]A1～3组平均Benson标准评分分别为2．3±0．4分、3．9±0．5分、3．5±0．4分，B1～3组Benson标准评分2．7±0．4分、4．3±0．5分、2．8±0．5分。A组和B组评分有统计学差异（P〈0．05）。D组为假干预组，D1～D3组，平均Benson标准评分分别为2．4±0．5分、4．0±0．4分、3．6±0．3，与A组无统计学差异（P〉0．05），而与B组有统计学差异（P〈0．05）。佐剂对照组Benson标准评分为0分。致病组和干预组小鼠脑和脾Foxp3在发病初期表达下降，高峰期下降明显，相比有统计学差异（P〈0．05），到慢性期上升，与高峰期相比有统计学差异（P〈0．01）。假干预组Foxp3各时期表达与致病组无统计学差异（P〉0．05），表达变化同致病组。干预组小鼠脑和脾Foxp3表达在发病初期就已下降，但与致病组和假干预组没有统计学差异。在发病高峰期下降较致病组和假干预组明显，并有统计学差异（P〈0．05），在慢性期较致病组表达上升，并有统计学差异（P〈0．01）。[结论]外源性TGF-β1对慢性EAE产生较复杂的影响，高峰期可以使Foxp3表达进一步下调，症状加重，但在慢性期可使Foxp3表达明显上调．从而促进病情缓解。

腱糖蛋白-W在不同发育阶段C57BL/6小鼠耳蜗中的表达

目的研究Tnn基因编码的腱糖蛋白-W(tenascin-W,TN-W)在出生后不同发育阶段小鼠耳蜗内的表达,初步探讨tenascin-W在听觉系统中的功能。方法以出生后(postnatal day,P)1、3、14、28天(P1、P3、P14、P28)各6只及出生后7天(P7)9只C57BL/6小鼠作为研究对象,通过免疫荧光标记观察tenascin-W在耳蜗中的表达及定位,运用实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,RT-qPCR)检测各发育阶段小鼠耳蜗中Tnn mRNA相对表达水平,Western blot法检测tenascin-W在小鼠耳蜗中的表达。结果免疫荧光标记显示tenascin-W在P1、P3、P7、P14、P28小鼠耳蜗中均有表达。在P1、P3、P7小鼠耳蜗螺旋神经节、Corti器中均有表达,在P14、P28小鼠仅在螺旋神经节高表达,在Corti器中不表达,在各发育阶段小鼠耳蜗血管纹均有表达;共染显示其与Ⅲ型β-tubulin共定位在螺旋神经节神经元胞体的胞浆中。RT-qPCR显示Tnn mRNA在P7小鼠耳蜗相对表达量最高,Western blot法检测到tenascin-W在P7小鼠耳蜗中有表达。结论Tenascin-W在小鼠耳蜗各发育阶段均有表达,在P7表达量最高,且主要定位于螺旋神经节神经元,提示该蛋白可能影响耳蜗螺旋神经元发育及功能,对小鼠正常听觉的维持发挥重要作用。

Rac1和WAVE2蛋白在高脂饮食C57BL/6J幼鼠肾小球中的表达及意义

目的探讨Rac1和WAVE2蛋白在高脂饮食诱导的C57BL/6J幼鼠肾小球中的表达及意义。方法 32只3周龄雄性C57BL/6J幼鼠随机分为正常饮食组和高脂饮食组,每组16只。分别给予标准饲料(脂肪含量10%)与高脂饲料(脂肪含量60%)喂养4周。HE染色和PAS染色观察小鼠肾脏的病理形态学改变;应用免疫组织化学技术及蛋白免疫印迹技术检测Rac1和WAVE2蛋白的表达。结果与正常饮食组相比,高脂饮食喂养的C57BL/6J幼鼠出现了肾小球系膜基质轻度增生以及渗出等病理改变。同时高脂饮食组小鼠肾小球Rac1和WAVE2蛋白的表达明显增强。结论 Rac1和WAVE2蛋白可能共同参与了高脂饮食诱导的C57BL/6J幼鼠肾小球的损伤。

骨形态构建蛋白2型受体下调单核细胞趋化蛋白1/CC类趋化因子受体2通路对哮喘小鼠气道炎症和Th1/Th2平衡的影响

目的探究骨形态构建蛋白2型受体(BMPR2)对小鼠哮喘模型气道炎症和Th1/Th2平衡的影响及其机制。方法于2021年9月至2022年11月选用24只C57BL/6小鼠尾静脉注射BMPR2腺病毒,随后卵清蛋白(OVA)致敏和激发建立哮喘小鼠模型;采用随机数字表法分为对照组(生理盐水替代OVA造模)、OVA模型组(OVA诱导小鼠哮喘模型)、OVA+载体(Vector)组(空载慢病毒处理的OVA哮喘模型小鼠)、OVA+BMPR2组(BMPR2过表达慢病毒处理的OVA哮喘模型小鼠),每组6只。收集支气管肺泡灌洗液(BALF)和肺组织。免疫组织化学检测肺组织BMPR2表达水平;苏木精-伊红染色观察肺组织病理学改变;瑞氏染色后计数BALF中各类炎症细胞数目;酶联免疫吸附测定(ELISA)试剂盒检测BALF中白细胞介素(IL)-4,IL-5和IL-13炎症因子水平;蛋白质印迹法检测肺组织和气道上皮细胞16HBE中BMPR2、单核细胞趋化蛋白-1(MCP1)及其受体CC类趋化因子受体2(CCR2)蛋白表达水平。免疫共沉淀实验检测BMPR2与MCP1相互作用。结果与对照组相比,OVA模型组肺组织BMPR2(0.36±0.05比1.04±0.04)显著降低(P<0.01);小鼠肺泡破坏程度严重,肺组织有大量的淋巴细胞浸润;BALF中炎症细胞总数[(93.25±9.32)×10^(4)个/毫升比(4.79±0.41)×10^(4)个/毫升,P<0.001]、嗜酸性粒细胞、中性粒细胞和淋巴细胞均升高;Th1相关炎症因子γ干扰素(IFN-γ)水平降低,Th2相关炎症因子IL-4,IL-5和IL-13水平升高。过表达BMPR2可降低肺泡破坏程度和淋巴细胞浸润程度。与OVA+Vector组相比,OVA+BMPR2组BALF中炎症细胞总数、嗜酸性粒细胞、中性粒细胞和淋巴细胞均降低;ELISA结果表明,OVA+BMPR2组BALF中IFN-γ水平升高,IL-4,IL-5和IL-13水平降低,提示过表达BMPR2可上调Th1百分比,下调Th2细胞百分比。进一步研究表明,BMPR2过表达显著下调了MCP1及其受体CCR2的表达水平,且BMPR2与MCP1存在相互作用。结论BMPR2可通过下调MCP1/CCR2通路降低哮喘小鼠气道炎症,并调节Th1/Th2平衡。

TLR配体对小鼠HPV11E7基因CTL表位肽的免疫调节作用

[目的]探讨Toll样受体（TLR）配体多聚肌苷酸-多聚胞苷酸（PIC）、非甲基化胞嘧啶嘌呤二核苷酸（CpG）对小鼠人乳头瘤状病毒（HPV）抗原肽-HPV11E7基因细胞毒性T淋巴细胞（CTL）表位肽的免疫调节作用.[方法]提取小鼠骨髓树突状细胞（BM-DC）（抗原递呈细胞）及脾细胞（效应细胞）,BM-DC经体外培养后与HPV11E7 CTL表位肽孵育,分为PIC组（添加PIC）、CpG组（添加CpG）、肽组（不添加试剂）及对照组（不做任何处理）.将肽和TLR配体处理后的BM-DC与脾细胞按1：17比例混合后低温保存备用.ELISA法检测肿瘤坏死因子-α（TNF-α）及干扰素-γ（IFN-γ）.将培养7 d后的各组脾细胞培养液上清液（视为效应细胞）分别与表达HPV11E7基因的小鼠B16细胞（肿瘤细胞,视为靶细胞）按不同比例（200：1,100：1,50：1,25：1）均匀混合,乳酸脱氢酶（LDH）释放法检测CTL杀伤活性.[结果]PIC组及CpG组TNF-α均明显高于肽组及对照组,差异具有统计学意义（P〈0.05）;CpG组IFN-γ明显高于其他三组,差异具有统计学意义（P〈0.05）,PIC组、肽组、对照组比较差异无显著性（P〉0.05）.在效/靶细胞比例25：1时各组CTL杀伤率无显著差异（P〉0.05）,当随着效/靶细胞比例增加PIC组及CpG组CTL杀伤活性均呈明显增高（P〈0.05）,但当比例增加到100：1以上时PIC组及CpG组增长幅度降低,呈现缓增趋势（P〉0.05）.[结论]TLR配体激动剂PIC及CpG均有明显CTL杀伤效果,可上调小鼠HPV11E7 CTL表位肽的免疫应答而使TNF-α分泌上调,而CpG还可上调IFN-γ分泌,提示PIC及CpG对小鼠HPV11E7 CTL表位肽有免疫调节作用.

制作C57小鼠烧伤模型时Meeh常数的取值研究

目的:研究制作C57BL/6小鼠烧伤模型时适于计算全身体表面积(BSA)的Meeh常数(k)值。方法:24只6～12周正常C57BL/6小鼠,雌雄各半,将其随机分为8AM组、4PM组和0AM组,每组8只。实验前3d在8AM、12N、4PM、8PM、0AM和4AM称小鼠体质量。测定每只小鼠的BSA实际值,并据此计算其k值。分别应用4个常用k值(9.1、9.5、10和11.4)计算出每只小鼠的BSA计算值。结果:24h内小鼠的体质量差别有统计学意义,4PM时最低,0AM时最高;4PM组小鼠k值大于8AM组和0AM组,差别有统计学意义(P<0.05);将小鼠常用k值与本实验所得3个时点的k值分别进行比较,除常用k值9.5与0AM组k值之间差别无统计学意义外,其余比较差别均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。使用小鼠常用k值计算出的BSA计算值和C57BL/6小鼠的BSA实测值之间的差值最大达到了BSA实测值的23.02%。结论:制作C57BL/6小鼠烧伤模型时可按实验时间选用不同的k值,8AM时k值宜为9.617,4PM时为9.802。

分子嵌合MHC-Ⅰ基因对小鼠DC反应的研究

目的:构建分子嵌合主要组织相容性复合体(MHC)-Ⅰ基因小鼠骨髓造血干细胞,并探讨其诱导脾脏T细胞对异基因小鼠树突状细胞(DC)反应的机制。方法:密度梯度法分离培养BALB/c小鼠骨髓造血干细胞。构建携带C57BL/6小鼠MHC-Ⅰ基因慢病毒载体(病毒感染组),携带无意义基因慢病毒载体(阴性对照组)。分别感染BALB/c小鼠骨髓造血干细胞,构建分子嵌合细胞。分别取病毒感染组、阴性对照组及未加入病毒的空白对照组造血干细胞输注BALB/c小鼠后7d,获取脾脏T淋巴细胞,分别与C57BL/6小鼠DC进行混合淋巴细胞培养,测定刺激指数。结果:成功体外分选及培养BALB/c小鼠骨髓造血干细胞。病毒感染组C57BL/6小鼠MHC-Ⅰ蛋白表达率可达98.17%。单向混合淋巴细胞培养结果显示,C57BL/6小鼠DC对输注病毒感染组细胞后BALB/c小鼠脾脏T细胞刺激指数明显降低(P<0.01)。结论:输注分子嵌合MHC-Ⅰ基因造血干细胞后,小鼠脾脏T细胞对异基因小鼠DC反应明显减低。

Hic-5基因敲除对NF-κB/p65表达及CCl4诱导的肝纤维化小鼠模型的影响

目的探讨Hic-5基因敲除对NF-κB/p65表达及肝纤维化的影响。方法野生型C57BL/6雄性小鼠10只,随机分为2组,野生型对照组(WT-Control,n=5)、野生型实验组(WT-CCl4,n=5);Hic-5基因敲除C57BL/6雄性小鼠10只,随机分为2组,敲除对照组(Hic-5 KO-Control,n=5)、敲除实验组(Hic-5 KO-CCl 4,n=5)。检测血清ALT和AST;天狼猩红染色观察肝组织胶原沉积;免疫组化检测α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、p65蛋白表达;定量PCR检测肝组织中α-SMA、Collagen1、p65 mRNA表达。分离小鼠原代肝星状细胞,在予以不同浓度TGFβ1刺激后定量PCR检测肝星状细胞中α-SMA、Collagen1、p65 mRNA的表达。多组间计量资料比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验。结果天狼猩红染色显示,与WT-CCl4组相比较Hic-5 KO-CCl4组肝组织胶原纤维减少(P值<0.001)。血清ALT和AST检测结果提示WT-Control组、WT-CCl4组、Hic-5 KO-Control组、Hic-5 KO-CCl4组间ALT、AST比较差异均有统计学意义(F值分别为22.85、25.15,P值均<0.001),Hic-5 KO-CCl4组血清ALT和AST水平均低于WT-CCl4组(P值均<0.05);免疫组化显示WT-Control组、WT-CCl4组、Hic-5 KO-Control组、Hic-5 KO-CCl4组4组间肝组织α-SMA、p65蛋白表达水平比较差异均有统计学意义(F值分别为207.10、98.16,P值均<0.001),Hic-5 KO-CCl4组肝组织α-SMA、p65蛋白表达量低于WT-CCl4组(P值均<0.01);定量PCR结果示WT-Control组、WT-CCl4组、Hic-5 KO-Control组、Hic-5 KO-CCl4组4组间肝组织α-SMA、Collagen1、p65 mRNA相对表达量比较差异均有统计学意义(F值分别为41.62、13.93、98.16,P值均<0.001),Hic-5 KO-CCl 4组肝组织α-SMA、Collagen1、p65 mRNA相对表达量低于WT-CCl4组(P值均<0.05);0 ng/ml、5 ng/ml、10 ng/ml TGFβ1刺激原代肝星状细胞,WT(0 ng/ml、5 ng/ml、10 ng/ml)组及KO(0 ng/ml、5 ng/ml、10 ng/ml)组间α-SMA、Collagen1、p65 mRNA相对表达量比较差异均有统计学意义(F值分别为53.90、75.82、52.41,P值均<0.001),不同浓度TGFβ1刺激原代肝星状细胞Hic-5 KO组α-SMA、Collagen1、p65 mRNA相对表达量均低于WT组(P值均<0.01)。结论Hic-5基因敲除抑制NF-κB/p65表达,抑制肝星状细胞活化,缓解CCl4诱导的肝纤维化。

CMS121对氧糖剥夺再灌注神经元及缺血再灌注模型小鼠脑神经损伤的保护作用及其机制

目的研究CMS121对氧糖剥夺再灌注(OGD/R)神经元及缺血再灌注(I/R)模型小鼠脑神经损伤的保护作用及其机制。方法将皮质神经元分为对照组、OGD/R组和OGD/R+CMS121组,分别进行正常培养、OGD/R处理和OGD/R+CMS121治疗处理。24 h后,检测3组神经元的细胞活力和乳酸脱氢酶(LDH)释放水平。通过蛋白免疫印迹实验分析3组神经元再灌注6、24 h蛋白激酶B(Akt)和磷酸化Akt(p-Akt)的表达。将C 57 BL/6 J小鼠随机分为Sham组、I/R组和I/R+CMS121组,分别进行假手术、I/R模型构建和I/R模型构建+CMS121处理,再灌注24 h后,通过神经严重度评分(NSS)评估小鼠神经系统受损情况,通过TTC染色计算小鼠的脑梗死体积占全脑体积的比例。结果3组神经元的细胞活力和LDH释放水平比较差异有显著性(F=71.21、88.93,P<0.01);与OGD/R组相比,OGD/R+CMS121组的神经元细胞活力升高,LDH释放水平下降(t=5.56,11.63,P<0.05)。时间、分组、时间与分组交互作用对神经元p-Akt表达有明显影响(F=13.48~32.67,P<0.01),对Akt的表达均无影响(P>0.05)。再灌注6 h,3组神经元p-Akt表达比较差异均有显著性(F=18.78,P<0.01),与对照组比较,OGD/R组和OGD/R+CMS121组神经元p-Akt表达均升高(P<0.01),且后两组间比较差异无显著性(P>0.05);再灌注24 h,3组神经元p-Akt表达差异有显著性(F=38.50,P<0.01),OGD/R+CMS121组神经元p-Akt表达较对照组和OGD/R组相比均升高(P<0.01),而OGD/R组和对照组间比较差异无显著性(P>0.05)。3组小鼠NSS和脑梗死体积占全脑体积比例比较差异有显著性(F=20.24、118.60,P<0.01);与I/R组相比,I/R+CMS121组小鼠NSS降低,脑梗死体积减小(P<0.05)。结论CMS121对OGD/R处理的神经元和I/R模型小鼠的脑神经损伤有保护作用,这种保护作用可能是通过上调大脑皮质神经元Akt磷酸化水平实现的。