近平滑念珠菌临床分离菌株毒力因子差异表达研究

目的比较近平滑念珠菌临床分离株毒力相关因子天冬氨酸蛋白酶和生物膜形成及其基因表达的差异。方法采用基因测序及微卫星分型方法,对临床真菌感染患者分离的近平滑念珠菌进行鉴定,检测各菌株产生分泌型天冬氨酸蛋白酶及生物膜形成的能力,比较各菌株生物膜形成相关基因BCR1、EFG1、HWP1及天冬氨酸蛋白酶毒力基因SAPP1、SAPP2、SAPP3表达的差异。结果共收集8株临床分离的近平滑念珠菌,经基因鉴定均为基因Ⅰ型。微卫星分型结果显示,8株临床菌株分为4个微卫星型别,G1、G2、G3菌株为不同型别,分别分离自甲患者的尿、经外周静脉置入中心静脉导管(PICC)和血;J1、J2、J3、J4、J5菌株为同一型别,分离自乙患者不同时期血标本。8株临床菌株均能形成生物膜,生物膜形成能力均高于近平滑念珠菌标准菌株ATCC 22019,其中G1、G3和J5菌株生物膜形成能力强,J1、J2、J3、J4菌株生物膜形成能力中等,G2菌株生物膜形成能力弱。8株临床分离菌株均分泌天冬氨酸蛋白酶,酶体外表达水平均高于近平滑念珠菌标准菌株ATCC 22019,G3、G1、G2菌株分别为低表达、中表达、高表达,酶体外表达水平比较,差异均有统计学意义(均P<0.05);J1、J5菌株为中表达,J2、J3、J4菌株为高表达,中表达菌株与高表达菌株比较,差异有统计学意义(P<0.05)。甲、乙患者分离的各菌株生物膜形成基因BCR1、EFG1、HWP1表达水平均增加,其中甲患者G1菌株EFG1基因表达水平高于G2菌株(P<0.05),乙患者分离的菌株BCR1、EFG1、HWP1基因表达水平差异无统计学意义。甲、乙患者分离的各菌株天冬氨酸蛋白基因SAPP1、SAPP2、SAPP3表达水平均增加,其中G1菌株的SAPP1和SAPP2表达水平高于G2、G3(均P<0.05),乙患者SAPP1、SAPP2、SAPP3基因表达水平差异无统计学意义。结论近平滑念珠菌临床分离株生物膜形成和天冬氨酸蛋白酶产生能力均高于标准菌株,分离自不同标本的菌株毒力因子表达具有差异性,不同时期分离的菌株毒力因子表达差异不明显。患者可能存在同一时期多部位感染不同MT型别近平滑念珠菌的情况。

伊曲康唑联合点阵激光及光动力治疗皮肤近平滑念珠菌病1例

患者,男,59岁,双上肢皮肤结节、破溃、坏死6个月余。完善皮肤镜、皮损组织病理、特殊染色、真菌培养、DNA-病原微生物宏基因组检测,确诊为皮肤近平滑念珠菌病。予以口服伊曲康唑胶囊、复方甘草酸苷片,点阵激光联合光动力治疗3次,6周后皮损愈合。

近平滑假丝酵母细胞催化乙酰基三甲基硅烷不对称还原反应

采用近平滑假丝酵母细胞用于催化乙酰基三甲基硅烷不对称还原反应,可高选择性地生成(R)-1-三甲基硅乙醇.结果表明,固定化于海藻酸钙的细胞催化该反应的产物收率比游离细胞的高.不同辅底物对该反应的影响显著,以葡萄糖为辅底物时,反应的初速率较快,产物收率较高.该反应的最适条件为:辅底物(葡萄糖)浓度110mmol/L,振荡速度180r/min,缓冲液pH值6.0,反应温度30oC,底物浓度20mmol/L.在此反应条件下反应的初速率、产物收率和产物的ee值分别为11.4μmol/h,96.5%和99.9%.

全国多中心血流分离近平滑念珠菌药物敏感性和分子流行病学回顾性研究

目的对全国多中心收集的血流感染近平滑念珠菌进行分子流行病学和药物敏感性分析。方法将全国42家医院377例血流感染患者中分离的非重复菌株纳入研究,采用美国临床和实验室标准协会(CLSI)M44-A2纸片扩散法进行氟康唑和伏立康唑敏感性检测,采用微卫星分型方法对所有菌株进行分子流行病学分析。结果377例患者中,46.2%的患者年龄超过60岁;分别有26.5%、23.9%、21.8%和12.5%的患者分布于外科病房、内科病房、综合ICU和外科ICU病房。377株近平滑念珠菌中,24株(6.4%)对氟康唑耐药,10株(2.7%)对伏立康唑耐药。微卫星分型结果显示,所有菌株共分为172个微卫星型别(microsatellite genotype,MT),125个MT型别各自仅在单个菌株中出现;28家医院内经分析存在65例同家医院内不同患者感染同型别菌株的情况,其中同型别氟康唑耐药株在同家医院内感染不同患者的情况为6例。结论本研究回顾分析全国多中心血流感染近平滑念珠菌的分子流行病学,在多家医院内均发现同型别菌株包括氟康唑耐药菌株分离于不同患者的情况,提示存在近平滑念珠菌院内传播的可能。

木糖辅助底物对近平滑假丝酵母催化(R,S)-苯基乙二醇不对称氧化还原合成(S)-苯基乙二醇体系稳定性的促进作用

通过分析近平滑假丝酵母Candida parapsilosis催化外消旋苯基乙二醇（PED）不对称氧化还原合成（S）-苯基乙二醇的反应过程,结合微生物中糖类的代谢路径研究,建立了一种以木糖为辅助底物的NADPH辅酶再生的方法,提高了该催化系统的稳定性.结果表明,相同条件下反应体系中添加8 g/L的木糖可使（S）-PED产物的对映体过量值（ee）和产率分别提高14%和10%;菌体可重复使用3-4次,而产物ee值保持在98%.考察了木糖对表达羰基还原酶重组大肠杆菌体系催化效果的影响,发现木糖是通过强化（S）-羰基还原酶的催化作用提高了催化系统的稳定性,其原因是在磷酸戊糖途径中再生了氧化还原反应所需的NADPH辅酶.

近平滑假丝酵母ATCC 7330羰基还原酶CpCR的表达及酶学性质研究

通过构建重组菌Escherichia coli BL21(DE3)/pACYC Duet-1-cpcr,表达带有His标签的近平滑假丝酵母Candida parapsilosis ATCC 7330羰基还原酶CpCR基因,并采用Ni-Agarose亲和层析对重组酶CpCR进行分离纯化和酶学性质研究。重组酶CpCR的基因序列全长1107 bp,含有368个氨基酸,分子质量在41 kDa左右,比酶活力为20 U/mg;该酶在4~33℃的温度范围稳定性较好,相对酶活力在80%以上,T 50值为37℃;该酶的pH适宜范围在6.2~7.5,在中性条件下稳定性最好;Cu^2+对该酶有强烈的抑制作用,在1 mmol/L条件下,相对酶活力下降30%,在5 mmol/L条件下,相对酶活下降50%;该酶对底物苯甲醛、正丁醛亲和能力强于4-氯-3-酮基-丁酸乙酯(4-chlor-3-keto-butyrate-ethyl ester,COBE),对苯甲醛或正丁醛的催化效率是对COBE的20倍左右;该酶是一种NADPH依赖型的羰基还原酶。本研究为羰基还原酶CpCR分子改造和催化应用提供了重要的基础数据。

近平滑假丝酵母NAD(H)依赖型次级醇脱氢酶的分离纯化及酶学性质

从近平滑假丝酵母(Candida parapsilosis CCTCC 203011)中分离得到了NAD(H)依赖型的次级醇脱氢酶.粗酶经乙醇沉淀、Blue Sepharose Fast Flow亲和层析、DEAE Sepharose离子交换层析后在SDS-PAGE上显示为单一条带,其酶蛋白的亚基分子量(Mr)为37.5×103.该酶还原反应的最适pH为6.0,最适温度为45℃,是一个含Zn2+金属酶.该脱氢酶具有较高的底物的选择性,对2-酮具有较高的还原活力;同时,也能作用于醇类发生氧化反应,对次级醇的氧化活力最高.以β-羟基苯乙酮为底物,用纯化得到的酶催化反应后,还原产物为(R)-苯基乙二醇,因此该酶为(R)-专一性次级醇脱氢酶,是一种生产(R)-苯基乙二醇的有效的生物催化剂.经LC-MASS-MASS分析得到了酶蛋白中3个肽段的氨基酸序列,通过比对发现该酶与NCBI编号为BAA24528的次级醇脱氢酶具有较高的同源性.

近平滑念珠菌性皮肤肉芽肿1例

1临床资料患者男,59岁,＂右手腕皮疹3a余,右上臂皮下结节3个月＂,于2014年4月就诊我院我科门诊。皮疹初起于右手腕伸侧,无明显外伤史,初起为一枚红色绿豆大丘疹,皮疹逐渐增多并融合,无明显痒痛,挤压可有黄色分泌物渗出。外院诊疗不详,无明显好转。就诊前3个月右上臂内侧出现皮下肿物,无压痛。既往体质可,高血压病史,血压控制可。查体：系统检查无特殊,右手腕伸侧见5cm×6cm大小红斑,上见多发大小不一红色斑块,

近平滑念珠菌致真菌性心内膜炎1例

真菌性心内膜炎（ FE ）是指由真菌感染引起的心内膜炎,临床较为少见,不同的感染性心内膜炎的系列病例报告中,FE的比例约为1.3%~7%[1,2]。根据临床情况不同又可分为自然瓣膜性、人工瓣膜性及心脏辅助装置相关性三类[2]。虽然少见,但FE 的预后较差,死亡率及复发率均较高。近年来随着接受器官移植、免疫抑制治疗或侵袭性操作的患者增多,以及广谱抗生素的大量应用,FE的发病率也有所升高,值得引起临床的高度重视。本院近期收治1例FE 患者,现将其临床资料报道如下,并复习相关文献,旨在提高对FE的认识。

近平滑假丝酵母ATCC 7330的生长条件优化

通过单因素实验和正交实验,对近平滑假丝酵母ATCC 7330生长的营养元素和发酵条件进行了优化。结果表明,近平滑假丝酵母ATCC 7330生长的最优培养基配方为:MgSO_40.8g·L^(-1)、(NH_4)_2HPO_4 16g·L^(-1)、蔗糖25.98g·L^(-1)、酵母浸粉12g·L^(-1),最适发酵初始pH值为5.0,最适通风量为3.0L·min^(-1),在此条件下,菌体量比优化前提高110%。该研究为近平滑假丝酵母ATCC 7330整细胞催化应用奠定了基础。

环磷酰胺对近平滑念珠菌感染小鼠白细胞的影响

目的ICR小鼠感染近平滑念珠菌试验前注射环磷酰胺,观察环磷酰胺对近平滑念珠菌感染ICR小鼠白细胞的影响。方法尾静脉注射近平滑念珠菌感染动物前,连续腹腔注射环林酰胺3次,同时设环磷酰胺组、近平滑念珠菌组和生理盐水组。每天采集血样,对动物血液白细胞进行分类计数。结果近平滑念珠菌组:6～7d白细胞高于正常水平,8d恢复正常水平;环磷酰胺组:1～6d白细胞数低于正常水平(第4天最低),7～10d高于正常水平(第9天最高),11～13、15、20d白细胞恢复正常水平;环磷酰胺作用后近平滑念珠菌感染组:1～6d白细胞变化趋势同环磷酰胺组,在7～11d白细胞呈上升趋势,并显著高于正常值,动物全部死亡。结论环磷酰胺能够在一定的时间段能有效降低ICR小鼠白细胞数,导致免疫功能低下。在近平滑念珠菌感染小鼠实验中得以充分利用。

氟康唑对近平滑念珠菌生物膜的影响

目的研究近平滑念珠菌不同时期生物膜对氟康唑的药物敏感性及氟康唑对其生物膜生成的影响。方法甲基四氮盐(XTT)减低法检测不同阶段生物膜对氟康唑的敏感性及生物膜的生成量。结果对氟康唑敏感的近平滑念珠菌在生物膜生成12 h后即对氟康唑耐药。在12、24和48 h时间点,治疗浓度为8μg/mL的氟康唑均可显著抑制氟康唑耐药株生物膜的生成;浓度0.5μg/mL的氟康唑可显著抑制氟康唑敏感株生物膜形成,但要抑制耐药株生物膜的形成则需更高浓度的氟康唑(≥1μg/mL)。结论近平滑念珠菌不同阶段生物膜对氟康唑耐药性不同,氟康唑可显著抑制近平滑念珠菌敏感株和耐药株生物膜的生成。

近平滑念珠菌的流行病学及致病机制的研究进展

近平滑念珠菌是一种重要的人类致病性真菌,近年来发病率逐年增加。其致病机制与多种因素有关,包括粘附力、生物膜形成和水解酶等。其中水解酶是最重要的毒力因子之一,在其入侵宿主过程中起关键作用。对真菌的诊断和治疗也有重要引领价值。为此我们综述了近平滑念珠菌的流行病学和致病机制的研究进展。

近平滑假丝酵母ATCC 7330中羰基还原酶双水相萃取工艺研究

研究了聚乙二醇(PEG)/硫酸铵[(NH4)2SO4]双水相体系萃取近平滑假丝酵母ATCC 7330粗酶液中羰基还原酶的工艺,考察了无机盐种类、PEG分子量及其质量分数、(NH4)2SO4质量分数、萃取温度、萃取时间等因素对羰基还原酶纯化倍数的影响。确定最优的双水相萃取条件为:(NH4)2SO4质量分数15%、PEG1000质量分数19%、萃取温度16℃、萃取时间15 min,在此条件下,羰基还原酶的纯化倍数可达6倍。为近平滑假丝酵母ATCC 7330中羰基还原酶在手性化合物的绿色合成中的应用奠定了基础。

高剂量氟康唑治疗近平滑念珠菌感染的药学监护1例分析

氟康唑是一种三唑类抗真菌药,广泛应用于念珠菌及隐球菌感染的治疗。随着念珠菌耐药问题的日益突出,抗真菌药物的选择及使用剂量的把握也成为临床用药的难点。本文从疾病诊断、治疗及高剂量氟康唑使用安全性等角度,结合药学监护,对1例使用高剂量氟康唑治疗近平滑念珠菌血症的病例进行分析,对用药安全性及合理性进行评估、干预,为临床合理应用氟康唑治疗近平滑念珠菌血症提供参考。

近平滑念珠菌形态多样性及毒力因子的分泌活性研究

目的比较近平滑念珠菌不同临床分离株的菌落和细胞形态及其分泌型天冬氨酸蛋白酶(SAP)酶活性,阐明该病原真菌的形态多样性及毒力差异。方法分别用Lee’s Glc NAc、Lee’s glucose、Spider 3种培养基于37℃培养7株近平滑念珠菌临床分离株,观察各菌株的菌落及细胞形态;用牛血清白蛋白培养基(BSA)于30℃培养7株近平滑念珠菌,通过观察形成晕圈能力的强弱确定其毒力因子(SAP)的分泌活性。结果 7株近平滑念珠菌临床分离株在不同条件下菌落表型有较明显的不同,菌落有光滑型、皱褶型及火山口样型,且染色程度不同,各分离株细胞在形成酵母相或菌丝相的能力方面呈现出不同程度的差异;SAP酶活性观察实验中检测到各菌株水解晕圈大小从2.55 cm到1.55 cm各不相等。结论近平滑念珠菌临床分离株具有形态多样性,各菌株SAP酶活性明显不同,提示菌株间的毒力有明显差异。

多态性微卫星标记技术与重复序列PCR在近平滑念珠菌基因分型中的比较

目的比较多态性微卫星标记（PMM）技术与重复序列聚合酶链反应（PCR）在近平滑念珠菌基因分型中的应用。方法收集2012年3月至2013年11月间上海5家医院临床分离的近平滑念珠菌55株,经内转录间隔区序列分析（ITS）进一步鉴定菌种,共有狭义近平滑念珠菌43株,之后采用重复序列PCR和PMM技术进行基因分型,比较2种分型方法的结果和效率。结果 43株狭义近平滑念珠菌经重复序列PCR分型只有1种基因型;经PMM技术分型有22种基因型,以Ⅰ型（10株）、Ⅱ型（6株）为主,Ⅲ~Ⅶ型见于2或3株菌,其余15种基因型均只有1株菌。结论 PMM技术用于狭义近平滑念珠菌的基因分型,分辨率高、重复性好,适用于狭义近平滑念珠菌基因组微进化的监测,而重复序列PCR不适用于狭义近平滑念珠菌的基因分型。

近平滑假丝酵母ATCC7330均质破碎工艺研究

研究了近平滑假丝酵母ATCC7330的高压均质破碎工艺,利用正交试验考查了均质温度、酵母质量分数、均质压力和均质次数对酵母细胞破碎得到的酮基还原酶的酶活影响。结果表明,4个因素的影响大小依次为均质压力>酵母质量分数>均质温度>均质次数,其中均质压力为近平滑假丝酵母破碎的显著性因素,最佳破碎工艺为均质温度6℃,酵母质量分数20%,均质压力180MPa,均质次数为3次。经过验证试验,采用高压均质破碎酵母细胞的方法可得到粗酶液酶活1.572U/mL,比优化前提高150%以上。

肺部感染近平滑念珠菌的临床分布与耐药性分析

随着广谱抗菌药物长期滥用和机械通气等创伤性治疗手段的增加,肺部念球菌感染尤其是近平滑念珠菌感染逐年增加。了解肺部感染近平滑念珠菌的分布及药敏情况,可为临床防治近平滑念珠菌肺部感染提供参考。