滞育诱导温度与光照对家蚕近日节律基因per表达的影响

温度和光照是昆虫近日节律基因表达的授时因子,也是影响家蚕滞育的决定因素。为了解家蚕滞育与近日节律调控的关系,研究了滞育诱导发生温度与光照对家蚕近日节律基因per表达的影响。家蚕整个世代在25℃高温环境下,或幼虫期与蛹期在20℃的较高温度下,per基因在黑暗环境中的转录水平高于光照环境。家蚕幼虫及蛹期在相同光照条件下,per基因转录水平在高温环境中高于低温环境,黑暗环境下又呈现20℃>25℃>15℃的变化趋势,且温度的影响大于黑暗环境;在25℃持续光照条件(25LL)下,胚后时期per基因的表达水平高于15℃持续黑暗的条件(15DD),而20℃及光照与黑暗各12 h条件(20LD)下变化更加敏感,这与温度和光照对家蚕滞育的诱导作用一致。在处女蛾和卵产出后0.5 h的未受精蚕卵中都检测到了高水平的母源per基因mRNA。亲代卵催青期的单因子25℃高温或黑暗、以及20LD,都会引起子代卵内per基因mRNA水平的上调,这种上调只出现在滞育出现或活化发育的转折时间点(卵龄72 h)之前。家蚕滞育诱导温度和光照条件直接影响per基因在整个世代的差异表达,该基因在卵期的表达与胚胎滞育性差异密切关联。

近日节律基因Clock对雄性小鼠生殖功能的影响

目的通过干扰小鼠睾丸节律基因Clock的表达,研究Clock对雄性小鼠生殖能力的影响。方法通过RNA干扰技术干扰雄性小鼠睾丸节律基因Clock的表达,以Western blot检测干扰效果,研究干扰Clock表达后对小鼠体内胎仔数和精子数量、精子活力、体外受精率的影响。结果Clock干扰质粒使小鼠睾丸Clock蛋白的表达明显下调。在体内实验不但影响了雄性小鼠的胎仔数,而且其相对应的精子体外受精能力也明显下降。结论节律基因Clock与雄性小鼠的生殖功能有密切的关系。

近日节律基因Per2对人肺癌细胞生长的抑制作用

目的研究近日节律基因Per2对肺癌细胞(A549)生长的抑制作用及其机制。方法将pcDNA3.1(+)-Per2转导入A549细胞内,过表达Per2,以空质粒pcDNA3.1(+)为对照。采用MTT和细胞平板集落形成实验检测肺癌细胞的生长情况;通过流式细胞技术观察细胞的凋亡。结果近日节律基因Per2能够抑制A549细胞的生长和增殖,诱导细胞凋亡。结论近日节律基因Per2能够抑制肺癌细胞的生长,其机制可能涉及诱导肿瘤细胞的凋亡。

近日节律基因Period2对紫外线损伤NIH3T3细胞的影响

目的探讨Period2(Per2)基因对紫外线损伤NIH3T3细胞的影响。方法将Per2基因插入pcDNA3.1,构建Per2基因的真核表达质粒,采用脂质体包裹法转导入NIH3T3细胞内。以紫外灯照射Per2基因过表达(pcDNA3.1-Per2)的NIH3T3细胞、pcDNA3.1空白组(pcDNA3.1-vector)细胞和空白对照组细胞;通过流式细胞术和克隆形成试验检测稳定转染Per2阳性表达的NIH3T3细胞的凋亡、生长情况;采用单细胞凝胶电泳技术检测Per2过表达对DNA损伤后修复的影响。结果紫外线照射后Per2阳性表达的NIH3T3细胞较其对照组细胞增殖速度快、凋亡率减少,单细胞凝胶电泳实验表明紫外线照射后,各组细胞均表现出明显的DNA损伤,但是pcDNA3.1-Per2转染组均较pcDNA3.1-vector及空白对照组细胞的彗星细胞出现率和拖尾细胞DNA迁移长度低。结论节律基因Per2能抑制紫外线对细胞的损伤,其机制可能与Per2促进DNA修复作用有关。

模拟微重力对NIH3T3细胞近日节律基因的影响

目的:研究模拟微重力对NIH3T3细胞近日节律基因表达水平的影响。方法:NIH3T3细胞按照模拟微重力的天数分为5组,RT-PCR检测节律基因mRNA的相对表达水平。结果:实验结果显示五组样品Per1、Per2、Cry1、Bmal1、Clock的相对表达水平存在显著性差异。Per1和Per2基因mRNA的相对表达水平在模拟微重力的第2天、第3天较0天显著升高(P<0.05),Per2、Cry1和Clock基因mRNA的相对表达水平在模拟微重力的第4天较其他四组显著降低(P<0.05)。结论:近日节律基因的相对表达水平在模拟微重力第2、3天升高,第4天后降低。模拟微重力影响近日节律基因的表达且具有时间依赖性。

模拟微重力对NIH3T3细胞近日节律基因表达的影响

目的探讨模拟微重力对NIH3T3细胞近日节律基因Per1,Per2与Cry1 mRNA表达的影响。方法体外培养培养NIH3T3细胞分为实验组和对照组。实验组采用RCCS模拟微重力环境培养NIH3T3细胞;而对照组在正常重力环境下静置培养。两组均采用PMA刺激细胞,RT-qPCR检测Per1,Per2与Cry1mRNA的表达水平。结果对照组与实验组的近日节律基因Per1,Per2与Cry1的mRNA都呈现节律性。与对照相比,实验组节律基因的振幅减小,相位延迟。结论模拟微重力影响NIH3T3细胞近日节律基因Per1,Per2,Cry1的表达。

miRNA-155-5p与近日节律基因Bmal1对小鼠骨髓间充质干细胞增殖、衰老的影响

目的探究近日节律基因Bmal1(brain and muscle arant-like-1)与微小RNA(microRNA,miRNA)中的miRNA-155-5p对小鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMMSCs)增殖能力及衰老的影响,为阐明骨衰老的发生机制提供实验基础。方法提取1月龄小鼠股骨骨髓腔细胞,采用全骨髓贴壁法纯化培养并传代至P3,流式细胞仪检测BMMSCs表面抗体的荧光表达情况;慢病毒转染BMMSCs,构建miR-155-5p及Bmal1过表达/干扰的BMMSCs稳转细胞系,细胞系由qRT-PCR验证,CCK-8检测miR-155-5p及Bmal1过表达/干扰的4种稳转细胞系增殖活性,流式细胞术检测细胞凋亡率,β-半乳糖苷酶实验检测细胞衰老状况,qRT-PCR检测衰老相关基因P16、P53的表达。结果慢病毒转染的BMMSCs稳转细胞系构建并鉴定成功。过表达miRNA-155-5p表达后,BMMSCs的增殖活性降低,凋亡率升高,β-半乳糖苷酶活性上调,P16、P53相对表达水平上升;干扰miRNA-155-5p表达,BMMSCs的增殖活性增强,凋亡率降低,β-半乳糖苷酶活性下调,P16、P53相对表达水平下降。过表达/干扰Bmal1表达,上述效应与过表达/干扰miR-155-5p表达相反。结论miRNA-155-5p的表达抑制BMMSCs增殖,促进衰老;Bmal1的表达有利于增强BMMSCs的增殖及抗衰老能力。

近日钟基因Bmal1与关节疾病相关性的研究进展

哺乳动物近日节律紊乱会影响多种生理活动,导致生物系统出现代谢紊乱、免疫炎症失调、早衰及癌症等相关疾病。Bmal1作为近日钟系统里的核心成分,对于生物节律的调控起着不可替代的作用。关节疾病严重危害人身体健康,通常会发生分子病理学上的节律性失调,这与其临床症状的节律性表现密切相关。由于其病因机制复杂,目前尚无明显有效针对性药物。而近年许多研究发现近日钟基因与关节疾病存在紧密联系,Bmal1能通过调控炎症因子、蛋白酶等生物标志物的节律性表达控制关节软骨与骨的内稳态,还可能通过调节免疫、代谢、衰老在关节疾病中发挥重要作用。文章结合最新相关研究就近日钟基因Bmal1与关节结构的病理性变化、在免疫代谢衰老中与关节疾病的关系做一综述,以提高对关节疾病机制的认识,为临床缓解疾病症状与改进治疗方案提供新思路。

hper1干扰质粒的构建及hper1功能的初步研究

目的构建高效的针对hper1(人类period1基因)的干扰质粒,并对hper1的功能进行初步研究。方法选择4个hper1的干扰位点,根据位点序列合成构建4个pTER-hper1干扰质粒,并通过测序验证。将4种干扰质粒分别转染至SH-SY5Y细胞,经马血清休克诱导后,提取细胞总RNA,RT-PCR检测hper1mRNA的表达,鉴定干扰效果。提取细胞总蛋白,Western Blot检测P-p44/42丝裂原活化蛋白激酶(mitagen-actinated pratein kinase,MAPK)表达。结果RT-PCR鉴定显示pTER-hper1-Ⅱ干扰质粒干扰效率最高,hper1表达量降低84.9%。Western Blot显示hper1表达受抑制后,P-p44/42MAPK水平升高。结论成功构建并筛选到具有显著干扰效率的pTER-hper1干扰质粒,为进一步研究hper1的功能奠定了基础,并发现hper1对MAPK通路具有负相调控作用。