缺氧诱导因子-1α在新生儿窒息后缺氧／复氧肾脏人近曲肾小管上皮细胞损伤中的表达及丹参干预效果

目的探讨缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)在新生儿窒息后缺氧/复氧肾脏损伤中的表达及丹参的干预作用。方法以人近曲肾小管上皮细胞(HK-2)为研究对象,随机分为实验对照组、模型组、丹参组。采用液体石蜡覆盖法建立新生儿窒息后肾脏缺氧后复氧模型,每组都选择缺氧1、4、8、12、24h,缺氧后复氧1、4、8、12、24h,用链霉亲和素-生物素-过氧化物酶法(SABC)测定HIF-1α的阳性率。组间比较采用单因素方差分析。结果经免疫组织化学检测,HIF-1α主要表达于HK-2细胞核。在常氧下,HIF-1α有阳性表达,但阳性率低。在缺氧1h,HIF-1α即有明显增高,随着缺氧时间的延长,阳性率渐升高,缺氧24h达最高峰;复氧后HIF-1α的表达仍升高,复氧4h达最高峰,随后逐渐下降,在复氧后24h达最低水平。与模型组相比,丹参组各个时间点的HIF-1α表达阳性率明显降低(Pa<0.01)。结论HIF-1α的表达增加是机体的一种内源性保护机制。丹参可使HIF-1α的表达下降。

CTGF反义寡核苷酸对AngⅡ诱导的人近曲肾小管上皮细胞转分化的影响

目的:探讨结缔组织生长因子(CTGF)反义寡核苷酸对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的肾小管细胞转分化的可能影响。方法:采用体外培养的人近曲肾小管上皮细胞株(HK2),分别观察CTGF反义寡核苷酸和AngⅡ干预细胞对细胞CTGF mRNA和蛋白质的表达、细胞内超微结构及细胞α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达的影响。结果:AngⅡ干预HK2细胞48 h后,细胞CTGF mRNA和蛋白的表达显著增高(P<0.01);AngⅡ干预96 h后,细胞超微结构显示出间质细胞样结构;这些作用都可被CTGF反义寡核苷酸显著抑制。AngⅡ可以呈时间依赖性地刺激HK2细胞表达α-SMA,这些作用可以被CTGF反义寡核苷酸显著抑制(P<0.01)。对照组错义寡核苷酸无上述作用。结论:CTGF反义寡核苷酸对AngⅡ诱导HK2细胞转分化具有显著的抑制作用,提示CTGF可能介导了AngⅡ诱导的肾小管上皮细胞转分化。

重组人IL-6对近曲肾小管上皮细胞增殖及生物学表型的影响

【目的】观察重组人白细胞介素6(rIL-6)在体外对人近曲肾小管上皮细胞株(HK-2)增殖及生物学表型的影响。探讨rIL-6对HK-2细胞作用的时间-效应及剂量-效应关系。【方法】用MTT比色法检测rIL-6对细胞增殖的影响;用流式细胞术检测rIL-6对细胞周期及α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)阳性细胞百分率的影响;倒置显微镜观察rIL-6对HK-2细胞形态改变的影响。【结果】MTT比色法示,rIL-6在10～50ng/mL作用浓度范围内促进HK-2细胞增殖,呈剂量、时间依赖效应;rIL-6作用浓度为100～200ng/mL时抑制细胞增殖,随作用浓度增加抑制作用加强(F=201.582,P<0.001),(F=43.943,P<0.001)。rIL-6影响HK-2细胞的DNA合成。HK-2细胞有基础量的α-SMA表达,25ng/mLrIL-6与HK-2孵育1～48h后,α-SMA阳性细胞百分率高峰出现在48h(F=442.22,P<0.001)。rIL-6干预下,HK-2细胞形态由卵园型渐转变为长棱型、长条型。【结论】rIL-6可促进HK-2细胞增殖及生物学表型的转化,但大剂量的rIL-6可抑制HK-2细胞增殖。

小鼠近曲肾小管上皮细胞的原代培养及P450酶活性测定

采用胶原酶消化和筛网过滤法分离肾小管,并用Percoll密度梯度离心法进一步纯化肾小管上皮细胞,建立小鼠近曲肾小管上皮细胞原代培养方法。利用免疫细胞化学方法鉴定细胞种类,通过乙氧基试卤灵O-脱乙基酶(7-ethoxyresorufin-O-deethylase,EROD)活性方法检测0、1、3、7天肾小管上皮细胞细胞色素P450(CYPIA1)的活性。细胞染色结果表明,传1代后98%的细胞为近曲肾小管上皮细胞,证明此方法是培养小鼠近曲肾小管细胞的有效方法。CYPIA1在刚分离近曲肾小管上皮细胞中活性较强,在培养24 h后明显下降,3天后基本无活性。

应用微阵列芯片分析草酸钙结晶肾损伤中LncRNA表达谱的差异

目的:利用微阵列芯片对结晶组小鼠和正常组小鼠的基因表达谱进行比对分析,筛选出差异基因,探讨lncRNA与肾结石的关系。方法:将6只C57BL/6雄性小鼠随机分为结晶组和正常组,两组腹腔分别注射50 mg/kg生理盐水和100 mg/kg乙醛酸盐。7 d处死全部小鼠,对两组小鼠的肾组织,提取总RNA后进行差异lncRNA的筛选、聚类分析以及小鼠lncRNA与人同源性分析,采用实时定量RT-PCR验证人鼠同源性lncRNA。结果:芯片结果显示差异表达lncRNA共376个,其中结晶组表达上调154个,下调222个;差异表达mRNA共3 062条,上调1 914条,下调1 148条。结论:Sprr2c、CHCHD4P4可能参与肾结石发生的调控。

转录组与蛋白组关联分析探讨草酸钙结石晶体对HK-2细胞基因表达的影响

目的探讨草酸钙结石晶体对人近曲肾小管上皮细胞HK-2的影响。方法建立草酸钙结石与HK-2细胞相互作用的模型,进行转录组和蛋白组表达谱高通量定量研究。筛选差异表达基因,通过InterProScan进行GO富集分析,KEGG Mapper进行KEEG信号通路分析及蛋白质相互作用网络STRING分析。结果转录组与蛋白组定量研究分别定量到57833个转录本和6407个蛋白。通过比较转录组与蛋白组的定量情况,发现有6144个基因在转录组和蛋白组水平都定量。蛋白水平464个分子显著下调,699个分子显著上调。转录组水平11个分子下调,14个分子上调。GO分析发现,线粒体衍生囊泡与腺嘌呤跨膜转运体活性、snRNA的细胞核输出以及中心粒周围异染色质组装具有最高的富集指数。KEEG富集分析显示缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸降解、初级胆汁酸生物合成、维生素B6代谢、硫中继系统以及糖胺聚糖生物合成和DNA非同源末端链接为最显著的KEEG通路。蛋白互作网络发现MYH9、MYH14、MYH1、MYL12A、ACTB、ARPC1A、ARPC2、ANXA2、CFL1、PRDX1、PRXD2共11个关键调控因子。结论转录组与蛋白组关联分析筛选所得关键通路及关键基因可能在肾结石形成过程中扮演重要角色。

缺氧-复氧后HK-2细胞内OPA1的表达变化及rhEPO干预的影响

目的探讨重组人促红细胞生成素(recombinant human erythropoietin,rhEPO)干预对缺氧复氧后HK-2细胞内视神经萎缩症蛋白(optic atrophy 1,OPA1)表达变化及细胞凋亡率的影响。方法体外培养HK-2细胞随机分为正常对照组、H/R组和rhEPO干预组。然后免疫组化检测各组细胞胞质内OPA1蛋白表达变化,流式细胞仪检测各组细胞凋亡数量差异。结果与正常对照组比较,H/R组细胞数量减少,细胞凋亡率显著增加,同时细胞内OPA1表达减少;而与H/R组相比,rhEPO干预组细胞数量增加,细胞凋亡率下降,OPA1表达明显增强,但各指标仍未恢复至正常对照组水平。结论rhEPO对缺氧-复氧所致肾小管上皮细胞损伤具有保护作用,其机制可能通过抑制细胞内OPA1蛋白表达而实现。