返魂草不同部位绿原酸含量测定及体外抑菌活性研究

目的通过高效液相色谱法对返魂草不同部位绿原酸含量进行测定,并研究其抑菌活性。方法色谱柱采用Thermo hypersil gold(250mm×4.6mm,0.5μm),流动相乙腈(A)-0.4%甲酸溶液(B),梯度洗脱(0~10min,94%B;10~50min,94%→86%B),流速为1.0mL·min-1,280nm为检测波长,柱温25℃;采用纸片法比较返魂草各部位对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌抑菌的抑制作用。结果返魂草不同部位绿原酸含量为叶>茎>花>根;由最低抑菌浓度和抑菌直径可知,对金黄色葡萄球菌抑菌活性顺序为:叶>茎>花>根;对大肠杆菌抑菌活性顺序为:茎>叶>花>根。结论返魂草不同部位绿原酸含量差异明显,对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌具有一定的抑制作用。

改进返魂草颗粒薄层色谱鉴别方法的建议

目的改进返魂草颗粒薄层色谱鉴别方法。方法对《卫生部药品标准中药成方制剂第四册》返魂草颗粒【鉴别】项的薄层色谱条件进行了修改。结果供试品色谱中在与对照药材色谱相应的位置上,显相同的蓝色斑点。结论该方法操作简便、重现性好,可用于返魂草颗粒的薄层色谱鉴别。

返魂草的高效液相色谱法指纹图谱研究及成分分析

采用高效液相色谱法,建立了返魂草的指纹图谱,并与相同条件下获得的同属植物千里光图谱进行了比较;通过液相色谱-质谱联用法及与对照品比照研究,对其5种共有成分进行了鉴定;并对以上成分的含量进行同步测定。结果表明,此指纹图谱能够用于区分返魂草及其混淆品千里光;5种成分在各自的浓度范围内线性关系良好(r=0.9995～0.9998),10批样品中原儿茶酸、绿原酸、咖啡酸、金丝桃苷、异槲皮苷含量分别为0.03～0.07 mg/g,0.10～1.04 mg/g,0.01～0.05 mg/g,0.07～0.35 mg/g和0.02～0.74 mg/g。本方法可用于返魂草的鉴别及药材的质量评价。

返魂草提取物及其有效成分抗病毒作用的研究

目的:研究返魂草提取物及其有效成分的抗病毒作用。方法:利用鸡胚培养技术、离体和整体实验观察返魂草提取物及其有效成分对流感病毒、呼吸道合胞病毒及腺病毒的影响。结果:返魂草提取物及其有效成分(咖啡酸和绿原酸)对接种鸡胚、MDCK细胞中的流感病毒的复制具有抑制作用,可降低呼吸道合胞病毒、腺病毒感染的Hela细胞的死亡率,可降低流感病毒感染小鼠的死亡率及肺指数。结论:返魂草提取物、绿原酸咖啡酸对流感病毒、呼吸道合胞病毒及腺病毒均有抑制作用。

青霉素对返魂草种子萌发及幼苗生长的影响

以单叶返魂草和宽叶返魂草为试验材料,以赤霉素为对照处理,研究了不同浓度的青霉素对返魂草 种子萌发及幼苗生长的影响作用。结果表明:青霉素对宽叶返魂草种子萌发的作用不明显,而质量浓度为 300 mg/L的青霉素对单叶返魂草的种子萌发效果显著。质量浓度为100-500 mg／L青霉素对2个品种的幼苗 生长都有不同程度的促进作用,促进单叶返魂草幼苗生长的最适宜质量浓度为400 mg/L。同浓度水平的赤霉 素处理对返魂草种子萌发的促进作用大于青霉素,但其幼苗鲜重远低于青霉素处理组。

HPLC法同时测定返魂草颗粒中6种活性成分

目的利用HPLC法同时测定返魂草颗粒中同型原儿茶酸、原儿茶酸、对羟基苯乙酸、绿原酸、咖啡酸和金丝桃苷。方法以Agilent Zorbax SB-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),乙腈-0.1%三氟乙酸溶液梯度洗脱,体积流量1.0 mL/min,柱温30℃,检测波长280 nm。结果 6种成分均达到基线分离,同型原儿茶酸、原儿茶酸、对羟基苯乙酸、绿原酸、咖啡酸和金丝桃苷的质量浓度与峰面积,分别在1.14～114μg/mL(r=0.999 9)、0.74～186μg/mL(r=0.999 2)、5.26～526μg/mL(r=0.999 8)、2.88～288μg/mL(r=0.999 8)、1.50～148μg/mL(r=0.999 9)、1.42～205μg/mL(r=0.999 9)范围呈良好的线性关系;平均加样回收率分别为100.4%、99.4%、98.4%、99.5%、96.2%、97.6%;RSD分别为1.3%、2.2%、2.2%、3.6%、1.8%、3.4%。结论该方法准确,简便,灵敏,为返魂草颗粒的质量评价提供了依据。

返魂草中总黄酮提取工艺研究

目的:用正交试验法优选返魂草中总黄酮的提取工艺。方法:以50g原药材的总黄酮提取量为评价指标,选择提取用水量(倍)、提取时间(h)、提取次数(次)为考察因素,采用正交试验法确定返魂草中总黄酮的最佳提取工艺,采用分光光度法对干浸膏中总黄酮的含量进行测定,检测波长500nm。结果:最佳提取工艺条件为提取所用水量为12倍,提取次数为3次,回流提取时间为3h,芦丁在9.52～57.12mg.L-1范围内呈良好的线性关系。平均回收率为98.48%,RSD为0.86%。结论:总黄酮正交提取工艺的研究结果比较可靠,含量测定方法简便、准确,可用于返魂草干浸膏中总黄酮的含量测定。

返魂草种子内源萌发抑制物质的生理活性

为探明返魂草种子的休眠机理,加速萌发进程,采用多种溶剂浸提返魂草种子,研究其浸出液对白菜、小麦种子萌发及幼苗生长的影响作用.结果表明:返魂草种子中存在较强生理活性的内源活性抑制物质,且抑制作用随着提取液浓度的增加而增强.不同溶剂提取返魂草内源抑制物质的活性不同,以甲醇提取液的抑制活性最强,乙醚次之,水提液抑制作用不明显.采用温水浸泡返魂草种子可有效去除大部分内源抑制物质.

返魂草素Ⅱ对全氟异丁烯致大鼠吸入性急性肺损伤的预防作用

目的观察返魂草素Ⅱ(Senecio cannabifolius LessⅡ,FHC-Ⅱ)对全氟异丁烯(perfluoroisobutylene,PFIB)致大鼠吸入性急性肺损伤(acutelunginjury,ALI)的预防效果,初步探讨FHC-Ⅱ预防PFIB肺损伤的机制。方法 SD大鼠156只,随机分为正常对照组、PFIB染毒组和FHC-Ⅱ预防组,正常对照组32只,剩余2组每组62只。FHC-Ⅱ预防组提前1 d灌胃给予FHC-Ⅱ,每隔8 h给药1次,染毒前1 h最后1次给药,共给药3次。采用静态染毒装置染毒10 min,染毒浓度0.2 mg/L。观察染毒后1、2、4、8、16、24、48和72 h大鼠的存活率,检测染毒后1、2、4、8、16和24 h大鼠的肺系数、支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)中的蛋白含量,ELISA法测大鼠染毒后1、2、4、8和16 h血清中的白细胞介素(interleulcin,IL)-1β和IL-8含量,并在染毒后8 h进行大鼠肺组织病理学检查。结果 FHC-Ⅱ预防给药可显著提高PFIB染毒大鼠的存活率,降低染毒大鼠的肺系数及BALF中的蛋白含量,降低染毒大鼠血清中IL-1β和IL-8含量,显著改善PFIB所致的肺组织病理学损伤。结论 FHC-Ⅱ对PFIB所致大鼠ALI具有较好的预防性保护作用,其保护作用机制可能与抑制IL-1β和IL-8等炎性因子释放有关。

HPLC法测定不同产地返魂草中绿原酸的含量

目的建立同时测定不同产地返魂草中绿原酸含量的方法。方法采用HPLC法。色谱柱为Diamonsil ODS C18柱（4．6mm×250mm，5μm），流动相为乙晴-体积分数为0．4％的磷酸水溶液，检测波长为326nm；流速为1mL·min^-1。结果绿原酸质量在62～301ng内与峰面积呈良好的线性关系，平均回收率为99．2％，RSD为0．91％（n=9）；5个产地返魂草中绿原酸含量分别为0．95、0．72、0．55、0．64、0．44mg·g^-1。结论HPLC法可用于返魂草中绿原酸的含量测定；5个产地的返魂草中绿原酸含量有明显差异，吉林通化返魂草中绿原酸含量最高。

单叶返魂草人工栽培技术

通过野外考察和田间试验等研究了单叶返魂草Senecio cannabifolius.var.integrifolius的生长环境及生物学特征,井初步总结了栽培技术,可为返魂草资源的扩大和保护提供参考。

返魂草种子休眠机理及处理技术研究

目的:为解决返魂草驯化栽培中种子发芽率低的问题。方法:研究返魂草种子的休眠特性,并进行解除种子休眠的种子处理试验。结果:返魂草种子具有种皮吸水障碍性休眠特性,并含有抑制发芽物质。结论:浸种、低温及赤霉素处理均可打破种子休眠。

返魂草种子质量标准研究

目的:提出返魂草种子的质量标准,以规范种子供需市场。方法:通过返魂草种子的外部形态特征描述、品质检验技术和品质评价等关键环节的研究,提出返魂草种子分级依据。结果:返魂草种子的净度95%、千粒重0.79 g、含水量13.44%、发芽率86.7%,发芽势为69.3%、病虫害率2.29%。结论:制定返魂草种子Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级标准,可作为返魂草药材规范生产的组成部分,供生产企业进行GAP基地建设制定种子分级标准时参考。

返魂草素Ⅱ对小鼠全氟异丁烯吸入性急性肺损伤的预防作用

目的探讨返魂草素Ⅱ对全氟异丁烯吸入性急性肺损伤的预防作用。方法小鼠以全身暴露静态吸入全氟异丁烯方式染毒,剂量为263 mg.m-3染毒5 min。在小鼠全氟异丁烯染毒前30 min腹腔注射返魂草素Ⅱ,剂量分别为27.5、55、110 mg.kg-1。以染毒小鼠存活率、肺系数、支气管肺泡灌洗液中蛋白含量、组织病理学检查、组织超微结构检查等为观测指标,观察返魂草素Ⅱ对全氟异丁烯吸入性急性肺水肿的预防作用。结果与染毒对照组相比,返魂草素Ⅱ预防给药可显著降低全氟异丁烯染毒小鼠的湿(干)肺体比、肺含水量及肺湿/干比,明显降低支气管肺泡灌洗液中的蛋白含量,显著提高全氟异丁烯染毒小鼠的存活率,改善染毒小鼠的肺组织病变,且呈现一定的量效关系。结论返魂草素Ⅱ对全氟异丁烯所致肺水肿与炎性渗出具有抑制作用,并能有效对抗全氟异丁烯所致动物死亡。

火焰原子吸收法测定返魂草中6种元素含量

目的测定返魂草中Ca，Mg常量元素及Cu，Zn，Mn和Cd4种微量元素的含量。方法利用火焰原子吸收法对返魂草中的Ca，Mg，Cu，Zn，Mn，Cd6种元素含量进行测定分析。结果返魂草中含有Ca869．6μg／g，Mg46．41μg／g，Cu4．529μg／g。Zn32．78μg／g，Mn114．9μg／g，Cd 1.010μg／g。其中钙、锰含量很高，镉含量较低。结论相对标准偏差为：0．20％以下。加标回收率为：99．1％～100．8％之间。

RP-HPLC测定返魂草颗粒中绿原酸和咖啡酸含量

目的：建立返魂草颗粒（返魂草）绿原酸和咖啡酸的反相高效液相色谱分析方法。方法：Eclipse XDB-C18柱,乙腈-0.4%磷酸（12∶88,V/V）为流动相,柱温：室温,于327 nm测定返魂草颗粒中的绿原酸和咖啡酸。结果：绿原酸在0.005 6~0.896μg/L,咖啡酸在0.012 5~0.1μg/L内线性关系良好,平均回收率分别为100.1%、99.8%。结论：该法简便、准确、无干扰,可用于测定返魂草颗粒中绿原酸和咖啡酸含量。

返魂草提取物对胃溃疡大鼠胃黏膜炎症反应的调节作用

目的:探讨返魂草提取物对胃溃疡大鼠胃黏膜炎症反应的调节作用。方法:采用冰醋酸注射法制备大鼠胃溃疡模型,随机分为模型组、雷尼替丁组(西药组)、返魂草低剂量组(低剂量组)、返魂草中剂量组(中剂量组)和返魂草高剂量组(高剂量组),设立正常对照组(空白组)。在光镜下观察大鼠溃疡炎症细胞密度,应用EL-LISA法检测血清及胃黏膜EGF及TNF-α含量。结果返魂草提取物各剂量组均能使再生黏膜炎症细胞密度减少,与模型组比较有非常显著性差异(P<0.01),返魂草中剂量组及高剂量组疗效优于西药组(P<0.05或P<0.01)。模型组胃黏膜TNF-α水平较空白对照组明显增加(P<0.01),血清TNF-α水平也有一定程度的上升(P<0.05),返魂草提取物治疗组胃黏膜TNF-α水平明显低于模型组(P<0.01)。治疗组血清及胃黏膜EGF含量较模型组及空白组升高(P<0.05或P<0.01)。结论:返魂草提取物能减轻炎症细胞的浸润,抑制炎性细胞因子的释放,从而促进胃溃疡的愈合,提高胃溃疡愈合质量。

HPLC法同时测定2种返魂草药材中金丝桃苷和绿原酸的含量

目的采用HPLC法同时测定麻叶返魂草和单麻叶返魂草药材中金丝桃苷和绿原酸的质量分数。方法采用Agilent Zorbax SB-C_(18)色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以乙腈-0.1%(体积分数)三氟乙酸溶液为流动相梯度洗脱,流速为1.0 mL·min^(-1),柱温为30℃,检测波长为280 nm。结果 2种成分均达到基线分离,金丝桃苷和绿原酸的质量浓度分别在1.03～41.02μg·mL^(-1)、2.70～43.20μg·mL^(-1)范围内与峰面积呈良好的线性关系;平均加样回收率分别为97.2%、99.2%,RSD值分别为3.9%、3.9%。麻叶返魂草中这2种成分的质量分数均高于单麻叶返魂草。结论该方法准确、简便、分离度好,为返魂草药材的质量评价提供了依据。