早产大鼠高氧肺损伤组织还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶的动态表达及其意义

目的探讨还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)脱氢酶亚单位1、2、5在早产大鼠高氧肺损伤组织中的动态表达及其意义。方法早产新生大鼠生后1d随机分为高氧和空气组,高氧组持续暴露于850mL/L氧气中,空气组置同一室内常压空气中。分别取二组大鼠高氧或空气暴露后1、4、7、10和14d肺组织标本,采用HE染色观察肺组织形态学改变,采用RT-PCR法在mRNA水平检测NADH脱氢酶亚单位1、2、5的表达。结果1.高氧暴露1、4d,早产大鼠肺组织形态较空气组无明显改变;高氧暴露7、10d,肺组织渐出现小血管充血扩张,肺泡腔内炎性细胞浸润,肺泡间隔增厚,肺泡数目减少、结构简单化和囊泡化等改变。2.空气组NADH脱氢酶亚单位1(ND1)和亚单位2(ND2)mRNA的表达随日龄增长渐降低,至7d时最低,随后其表达逐渐增高;空气组NADH脱氢酶亚单位5(ND5)mRNA的表达随日龄增长渐降低,至4d时最低,随后其表达逐渐增高。3.与同时间点空气组相比,高氧暴露后1、4和7dND1和ND5mRNA表达显著增强(Pa<0.05),随后其表达渐下降,10、14d时低于空气组,但二者相比差异无显著性意义(Pa>0.05);与同时间点空气组相比,高氧暴露后1、4d ND2 mRNA表达二组间差异无显著性意义(Pa>0.05),7d时较空气组极显著增强(P<0.01),10、14d时较空气组显著降低(Pa<0.05)。结论高氧可导致早产大鼠肺组织NADH脱氢酶表达改变,提示其可能参与高氧肺损伤的病理生理过程。

血管外膜成纤维细胞及其还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶激活在血管损伤中的作用

血管外膜是血管壁最复杂的组成部分,血管外膜成纤维细胞(AF)是血管外膜主要的细胞成分,在血管的病理生理过程中发挥着重要作用。AF的还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)氧化酶激活与活性氧生成是多种血管损伤的始发阶段和共同机制。本综述对AF及其NADPH氧化酶、活性氧在血管损伤中的作用进行了总结。

高浓度氧暴露对早产鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸表达的影响

目的探讨高浓度氧(高氧)暴露对早产鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(AECⅡ)还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)-脱氢酶亚基4(ND4)表达的影响。方法原代培养早产Sprague-Dawley(SD)大鼠AECⅡ,待其在含50mL/L二氧化碳(CO2)培养箱中生长至接近融合状态时随机分为高氧组和空气组。高氧组持续暴露于常压高浓度氧中,氧体积分数>900mL/L,CO2体积分数为50mL/L;空气组仍置于含50mL/L CO2培养箱中。二组分别于高氧或空气暴露6、12、24h提取细胞RNA,采取半定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)测定ND4 mRNA的表达;采用免疫细胞化学染色法检测细胞爬片ND4蛋白的表达。结果与空气组比较,免疫细胞化学结果显示高氧暴露6、12h ND4的表达无显著性差异(Pa>0.05),高氧暴露24h ND4的表达显著减弱(P<0.05);RT-PCR检测显示高氧暴露6h ND4 mRNA表达无显著性差异(P>0.05),高氧暴露12、24h ND4 mRNA表达显著减弱(Pa<0.05)。结论高氧暴露下调早产SD大鼠AECⅡ ND4 mRNA和蛋白水平的表达,这种改变可能参与高氧肺损伤的发病过程。

还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸在细胞保护中的应用及其机制

探讨辅酶还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸 (NADH)在增加能量代谢水平、修复神经细胞损伤、改善帕金森综合征、疲劳综合征及提高细胞应激反应能力和降低化疗药物对正常组织的毒性损伤作用 ,阐明NADH对细胞保护的分子调控机制 ,为今后临床多种疾病的细胞保护治疗 。

高浓度氧对早产大鼠肺组织中还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶亚单位1表达的影响

目的探讨高浓度氧暴露对早产大鼠肺组织中还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶亚单位1(ND1)表达的影响。方法早产SD新生大鼠生后1 d随机分为高氧组和空气组,高氧组持续暴露于≥85%氧气中,空气组置于同一室内常压空气中。分别取两组大鼠高氧或空气暴露后1、4、7、10和14 d肺组织标本,采用免疫组织化学和Western blot方法检测ND1蛋白的表达,半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测ND1 mRNA的表达。结果①高氧组和空气组各时间点均有ND1蛋白表达;与空气组相比,高氧组在1、4和7 d ND1蛋白表达增高,随后其表达下降。②与同时间点空气组相比,高氧暴露后1、4和7 d ND1 mRNA表达显著增高(P<0.05),其后ND1 mRNA表达逐渐下降,10 d和14d时低于空气组,但两者相比差异无显著性意义(P>0.05)。③ND1蛋白的表达变化趋势与ND1 mRNA的表达变化趋势一致。结论高氧导致早产大鼠肺组织ND1表达改变,提示ND1可能参与了高氧肺损伤的病理生理过程。

还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶-1基因重组真核表达质粒的构建及其对血管平滑肌细胞凋亡的影响

目的构建含人还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶-1(NOX1)基因重组真核表达质粒,探讨其对血管平滑肌细胞(VSMC)凋亡的影响。方法通过美国国家生物技术信息中心(NCBI)数据库查找NOX1基因的mRNA序列,针对蛋白质编码区(CDS)设计引物,以人c DNA为模板扩增出NOX1基因全长CDS序列,经双酶切鉴定后,将NOX1基因与真核表达载体pc DNA3.1(+)连接,再经双酶切、测序鉴定。运用脂质体转染重组体pc DNA3.1(+)-NOX1至VSMC中,观察NOX1表达及VSMC凋亡情况。结果重组体中NOX1基因片段和载体DNA大小与预期一致。经BLAST(the basic local alignment search tool)比对,与NCBI数据库中的NOX1基因序列具有高度的同源性。pc DNA3.1(+)-NOX1能促进VSMC中NOX1蛋白高表达,并促使VSMC的凋亡。结论 NOX1基因重组真核表达质粒能促使VSMC凋亡,为阐明NOX1在主动脉夹层中的作用及分子机制研究奠定了基础。

具有还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶功能的家蚕l(3)neo18基因的克隆与表达特征

果蝇l(3)neo18基因可以通过P转座子诱发致死突变,编码的蛋白质具有还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)脱氢酶(ND)的功能。利用生物信息学、cDNA末端快速扩增(RACE)和反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)等方法,克隆了家蚕l(3)neo18同源基因,分析了基因结构与表达谱。Bm-l(3)neo18基因(EU826676)的cDNA全长为868 bp,由573 bp的完整开放读码框(ORF)序列、25 bp的5′端非翻译区序列(5′-UTR)和251 bp的3′端非编码区序列(3′-UTR)组成,编码蛋白质为190个氨基酸残基,分子质量22.7 kD,pI 9.60。Bm-l(3)neo18基因由3个外显子和2个内含子组成,定位于家蚕第3染色体,位于nscaf2930的1 203.8-1 205.6 knt。Bm-l(3)neo18蛋白质在1-185氨基酸残基位置为ND的SGDH亚基保守区,在61-83氨基酸残基位置具有一个保守的跨膜区域。采用Clustal W进行多序列比对发现,Bm-l(3)neo18与埃及伊蚊等昆虫ND具有50%以上的蛋白质同源性,ND的保守区域高度一致,NJ法分子进化分析也显示Bm-l(3)neo18与昆虫ND进化上同源。该基因除在家蚕卵期的表达量较低外,在幼虫、蛹和蛾期均有较高表达,且存在组织差异性。

还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶染色法术中快速诊断婴幼儿先天性巨结肠的价值

目的探讨还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶(NADPH-d)酶组织化学染色法在术中快速诊断婴幼儿先天性巨结肠的价值。方法选取2015年1月至2017年3月新疆乌鲁木齐儿童医院收治的37例先天性巨结肠患儿术中切除的肠管为观察标本,以同期因坏死性小肠结肠炎行结肠造瘘术患儿的切除肠管标本作为实验对照,将先天性巨结肠患儿的肠管标本分为扩张段和痉挛段,进行常规冰冻连续切片,采用NADPH-d进行染色(NADPH-染色组),显微镜下观察神经丛及神经节细胞的染色情况,并与术中快速苏木精-伊红(HE)染色法(HE染色组)进行配对比较。结果 37例患儿中,NADPH-d染色诊断阳性36例(97.3%),阴性6例(2.7%);HE染色诊断阳性34例(91.9%),阴性3例(8.1%);2种染色方法均诊断阳性或阴性者分别为34例、1例,另2例NADPH-d染色诊断阳性者HE染色诊断为阴性;2种染色方法的诊断结果比较差异无统计学意义(χ~2=0.059,P>0.05)。NADPH-d染色组扩张段标本低倍镜下可见呈串珠状分布的神经丛样结构,高倍镜下可见细胞质着紫蓝色、细胞核空白无着色的细胞,HE复染显示串珠状分布的紫蓝色组织为肌间神经丛,黏膜下未见着紫蓝色的神经丛;高倍镜下可清楚分辨核大、深染、细胞质略呈蓝色的神经节细胞。NADPH-d染色组痉挛段标本镜下背景清晰,无任何着色,未见神经丛及神经节细胞。HE染色组扩张段标本肌间神经丛内隐约可见神经节细胞,痉挛段肌间及黏膜下可见分布杂乱的神经丛,其间无神经节细胞。结论 NADPH-d染色法诊断婴幼儿先天性巨结肠快速、精确、易操作,NADPH-d法与术中快速HE染色法联用能提高诊断效率,准确判断病变段肠管的切除范围。

还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶2在局限性骨肉瘤组织中表达及与新辅助化疗效应及局部进展相关性研究

目的探讨局限性骨肉瘤组织还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶(NOX)2表达与新辅助化疗效应及局部进展(L-PD)的相关性。方法选取自2005年1月至2016年12月收治的134例局限性骨肉瘤患儿(骨肉瘤组)及同期53例多指畸形患儿的软骨组织样本(参考组)进行回顾性分析。分别采用免疫组织化学法及蛋白质印迹法检测组织NOX2蛋白表达。采用Huvos分级系统评估新辅助化疗反应,RECIST标准评估L-PD情况。结果骨肉瘤组组织NOX2蛋白表达率及相对表达量均高于参考组,差异均有统计学意义(P<0.05),且两种检测结果基本一致。经受试者工作特征曲线(ROC)分析,组织NOX2蛋白相对表达量用于诊断骨肉瘤的曲线下面积(AUC)为0.746。组织NOX2蛋白高表达组病灶数目更多,且新辅助化疗反应不良的患儿比例更高(P<0.05)。Kaplan-Meier生存曲线结果显示组织NOX2高表达者5年无L-PD时间短于低表达者(P<0.001)更高。同样地,单因素及多因素COX回归分析的结果显示组织NOX2蛋白高表达是骨肉瘤患儿5年L-PD预后不良的独立预测因子(P<0.001)。经ROC曲线分析,组织NOX2蛋白表达预测骨肉瘤患儿新辅助化疗反应不良及L-PD的AUC分别为0.774、0.774。结论组织NOX2蛋白表达对骨肉瘤患儿新辅助化疗不良及L-PD具有良好的预测效能,有望成为新型预测生物标志物。

槲皮素对兔缺血再灌注心肌还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸、一氧化氮合酶基因和蛋白表达的影响

目的观察槲皮素对兔缺血再灌注心肌还原型炯酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NOX2）、一氧化氮合酶（NOS）基因和蛋白表达的影响。方法建立成年家兔心肌缺血再灌注模型，结扎左缘支30min，再灌注12h。实验分d组：空白对照组（contr01）、缺血再灌注组（I／R）、槲皮素组（Que）、槲皮素＋缺血再灌注组（I／R＋Que）。采用实时定量聚合酶链反应（Real-timePCR）和Westernblot方法检测心肌NOX2、内皮型一氧化氮合酶（eNOS）、诱导型一氧化氮合酶（iNOS）mRNA和蛋白的表达。结果I／R组NOX2mRNA和蛋白表达分别为1．73±0．41、3．46±0．84，iNOSmRNA和蛋白表达分别为0．29±0．11、0．29±0．11，较对照组明显增高（P〈0．01），eNOS变化不明显（P〈0．01）。给予槲皮素后，Que组NOX2mRNA和蛋白表达分别为0．40±0．08、0．56±0．28，eNOSmRNA和蛋白表达分别为0．22±0．07、0．95±0．23，iNOSmRNA和蛋白表达分别为0．02±0．01、0．874-0．31；I／R＋Que组NOX2mRNA和蛋白表达分别为1．034-0．31、2．054-0．49，eNOSmRNA和蛋白表达分别为0．324-0．09、1．12±0．36，iNOSmRNA和蛋白表达分别为0．164-0．05、3．174-1．29；较对照组水平明显降低（P〈0．01）。结论心肌缺血再灌注后，NOX2、iNOS表达增加；槲皮素明显减少心肌缺血再灌注后NOX2、iNOS和eNOS的表达。

川穹嗪对肾性高血压大鼠左心室肥厚和还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶的影响

目的研究川穹嗪(TMP)对肾性高血压大鼠的左心室肥厚及还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)氧化酶的作用。方法用双肾双夹法建立肾性高血压大鼠模型,按照体重将大鼠随机分为5组:假手术组、模型组、低高2个剂量实验组(TMP,30,60 mg·kg^(-1)·d^(-1))、对照组(坎地沙坦,10 mg·kg^(-1)·d^(-1)),连续给药2周。颈动脉插管,检测血流动力学参数;试剂盒检测血清氧化应激指标;称取左心室重量,计算左心室体重指数(LVW/BW);以HE染色观察左心室组织的形态学改变;用逆转录聚合酶链反应和蛋白免疫印迹法检测左心室脑钠肽(BNP)、β-肌球蛋白重链(β-MHC)和还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)氧化酶的蛋白水平。结果治疗后低、高2个剂量实验组大鼠的主动脉收缩压和舒张压(AoSP,AoDP)、左心室收缩末压和舒张末压(LVESP,LVEDP)均显著降低,而室内压最大的上升速率(+dp/dt_(max))和下降速率(-dp/dt_(max))均显著升,高差异均有统计学意义(P<0.05)。给药后,与模型组的LVW/BW为(2.8±0.3)mg·g^(-1)比较,低、高2个剂量实验组和模型组分别为(1.9±0.2),(1.7±0.4)mg·g^(-1),差异有统计学意义(P<0.05)。与模型组比较低、高2个剂量实验组的SOD显著升高而MDA和H_2O_2显著下降,差异均有统计学意义(均P<0.05)。给药后,低、高2个剂量实验组和模型组的左心室Nox2的蛋白表达分别为0.82±0.08,0.57±0.05,1.30±0.13,这3组的Nox4的蛋白表达分别为1.00±0.10,0.79±0.07,1.32±0.15,这3组的P47phox的蛋白表达分别为0.88±0.08,0.65±0.06,1.23±0.15,均较模型组显著降低,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论 TMP可以改善肾性高血压大鼠的左心室肥厚,其机制可能与降低高血压大鼠左心室的NADPH(Nox2、Nox4及P47phox)蛋白表达、改善氧化应激有关。

尿酸上调肾小管上皮细胞还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸酶蛋白水平对肾小管上皮细胞凋亡的影响

目的观察不同水平尿酸对体外培养的肾小管上皮细胞还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)及活性氧簇(ROS)的影响,探讨尿酸损害肾小管上皮细胞的可能机制。方法分离肾小管上皮细胞,将其分为对照组与尿酸干预组(尿酸干预组又分0.1、0.2、0.4、0.8 mmol.L-14个亚组),每组重复6孔;紫外分光光度法测定肾小管上皮细胞内NADPH蛋白水平;光泽精化学发光法测定肾小管上皮细胞内超氧阴离子(O—2)生成量;脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)与琼脂糖凝胶电泳法检测肾小管上皮细胞凋亡。结果 24 h后,0.1 mmol.L-1尿酸干预组NADPH酶蛋白水平与O 2—生成量较对照组仅轻微增高,0.2、0.4、0.8 mmol.L-1尿酸干预组NADPH酶蛋白水平与O2—生成量均较对照组显著增高(Pa<0.01)。对照组细胞均未形成明显的DNA凋亡梯带,0.1、0.2、0.4、0.8 mmol.L-1尿酸干预组均可见明显的DNA凋亡梯带,0.4、0.8 mmol.L-1尿酸干预组DNA凋亡梯带较0.1、0.2 mmol.L-1尿酸干预组更为明显。TUNEL结果显示:对照组,0.1、0.2、0.4、0.8 mmol.L-1尿酸干预组的凋亡率分别为(17.5±1.0)‰、(72.4±12.4)‰、(136.8±13.4)‰、(328.7±32.6)‰、(427.2±51.5)‰,0.1、0.2、0.4、0.8 mmol.L-1尿酸干预组细胞凋亡率均明显高于对照组(Pa<0.01),各尿酸干预组之间细胞凋亡率随着尿酸干预浓度的增高而增高;相关分析发现肾小管上皮细胞凋亡率与肾小管上皮细胞内NADPH酶蛋白水平及O2—生成量呈显著正相关(r=0.765、0.792,Pa<0.01)。结论肾小管上皮细胞在持续高尿酸的作用下,可激活细胞内NADPH酶蛋白表达,释放O—2,启动氧化应激级联反应,使肾小管上皮细胞持续受损而导致肾小管上皮细胞凋亡增加。

慢性阻塞性肺疾病合并肺动脉高压患者血清活性氧和硫化氢水平及肺组织还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化酶-4和胱硫醚-γ-裂解酶表达及其意义

目的探讨慢性阻塞性肺疾病(COPD)急性加重期患者血清活性氧(ROS)、硫化氢(H2S)水平,及COPD 稳定期患者肺组织中还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADPH)氧化酶-4 (NOX4)、胱硫醚-γ-裂解酶(CSE)表达及其意义.方法(1)选2015年11月至2016年12月在宁夏回族自治区人民医院呼吸科住院的COPD急性加重患者60例,根据是否合并肺动脉高压(PH)分为COPD急性加重合并PH组和COPD急性加重未合并PH组,另选同期健康体检者30例为健康对照组,采用酶联免疫法测3组受试者血清ROS、H2S水平.(2)收集2012年11月至2017年4月在宁夏回族自治区人民医院心胸外科因肺癌行肺叶切除42例患者的肺组织,根据是否合并PH分为COPD稳定期合并PH组和COPD稳定期未合并PH组、对照组,免疫组化法测3组患者肺组织NOX4、CSE表达,并观察肺小动脉壁厚度.结果(1)COPD急性加重合并PH组患者血清ROS水平[(613.52± 69.66)IU/ml]高于COPD急性加重未合并PH组[(565.76±71.33)IU/ml]、健康对照组[(294.63±60.39) IU/ml],COPD急性加重未合并PH组患者血清ROS水平高于健康对照组(P<0.05).COPD急性加重合并PH组患者血清H2S水平[(18.59±5.50)nmol/ml]低于COPD急性加重未合并PH组[(20.49± 4.97)nmol/ml]、健康对照组[(38.03±4.43)nmol/ml],COPD急性加重未合并PH组患者血清H2S水平低于健康对照组(P<0.05).ROS水平与肺动脉收缩压(PASP)呈正相关(r=0.59,P<0.05),H2S水平与PASP呈负相关(r=-0.62,P<0.05).(2)COPD稳定期合并PH组肺组织NOX4表达(0.08±0.01)高于COPD稳定期未合并PH组(0.06±0.01)、对照组(0.03±0.01),COPD稳定期未合并PH组肺组织NOX4表达高于对照组(P<0.05).COPD稳定期合并PH组肺组织CSE表达(0.03±0.01)低于COPD稳定期未合并PH组(0.07±0.02)、对照组(0.12±0.02),COPD稳定期未合并PH组肺组织CSE表达低于对照组(P<0.05). COPD稳定期合并PH组WT%[(40.58±6.63)%]高于COPD稳定期未合并PH组[(36.87±5.60)%]、对照组[(31.27±6.24)%],COPD稳定期未合并PH组WT%高于对照组(P<0.05).COPD稳定期合并PH组WA%[(32.33±6.27)%]高于COPD稳定期未合并PH组[(30.20±5.28)%]、对照组[(25.20±4.31)%],COPD稳定期未合并PH组WA%高于对照组(P<0.05).NOX4表达与WT%、WA%呈正相关(r值分别为0.81、0.66,P值均<0.05),CSE表达与WT%、WA%呈负相关(r值分别为-0.55、-0.39,P值均<0.05).结论 NOX4/ROS和CSE/H2S信号通路在COPD合并PH的发病机制中可能起重要作用.

脑缺血再灌注损伤与还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶的关系及其研究进展

脑卒中是目前世界上导致永久性残疾、痴呆及死亡的主要原因[1]。在中国,随着人口老龄化的加重,脑卒中的发病率正在不断提高,给整个医疗保健系统带来巨大负担。缺血性脑卒中(ischemic stroke,IS)是临床上最常见的脑卒中类型,约占其中的60%~80%,该病主要由突发血管内血栓形成引起的局部脑组织供血供氧不足所致[2-3]。目前尽早溶栓、恢复缺血脑组织血流灌注仍是急性缺血性脑卒中(acute ischemic stroke,AIS)的唯一治疗策略。虽然随着血管内介入技术的应用和发展,再灌注治疗的安全性及血管再通率有了很大提高,但是由于治疗时间窗及相关禁忌的限制,这种方法在临床上只适用于少数患者,并且相当一部分接受再灌注治疗的患者预后不佳甚至死亡[4]。

大蒜素激活核因子E2相关因子信号通路并抑制还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶抗脑缺血再灌注损伤作用机制研究

目的探讨大蒜素在大鼠脑缺血再灌注过程中对核因子E2相关因子2(NF-E2-related factor 2,Nrf2)信号通路和还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)氧化酶的影响,研究其抗脑缺血再灌注损伤的作用机制。方法将45只健康雄性8周龄SD大鼠随机分为假手术组、大脑中动脉阻塞(MCAO)模型组和大蒜素处理组。脑缺血2 h,再灌注48 h后进行神经功能评分,四氮唑红(TTC)染色检测脑梗死体积,酶联免疫吸附(ELISA)等方法检测脑皮质中超氧化物、丙二醛(MDA)、蛋白羰基化和8-羟脱氧鸟苷(8-OHd G)水平,采用蛋白印迹法(Western blotting)测定脑皮质核内Nrf2、血红素加氧酶-1(HO-1)和醌氧化还原酶(NQO-1)以及NADPH氧化酶亚基gp91-phox和p47-phox的蛋白表达水平。用SPSS 19.0软件进行单因素方差分析和Bonferroni’s检验。结果与假手术组(0 mm3)比较,MCAO模型组脑梗死体积[(204.6±24.8)mm3]明显增加,大蒜素组脑缺血再灌注诱导的脑梗死体积[(105.6±18.9)mm3]较MCAO模型组明显减少,差异均有统计学意义(P<0.01)。与假手术组(0分)比较,MCAO模型组大鼠神经功能缺损评分[(4.8±0.2)分]增加,与MCAO模型组比较,大蒜素处理组神经功能缺损程度[(2.5±0.5)分]明显减低,差异均有统计学意义(P<0.01)。与假手术组比较,MCAO组大鼠脑皮质超氧化物水平、MDA、蛋白羰基化和8-OHd G水平均明显增加,差异均有统计学意义(P<0.01)。大蒜素处理组与MCAO组比较,以上4项指标水平均降低,差异均有统计学意义(P<0.01)。与假手术组比较,MCAO组大鼠脑皮质NADPH氧化酶亚基gp91-phox和p47-phox的蛋白表达升高,差异均有统计学意义(P<0.05),而核内Nrf2以及HO-1和NQO-1的蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05)。与MCAO模型组比较,大蒜素能显著降低大鼠脑皮质NADPH氧化酶的亚基gp91-phox和p47-phox的蛋白表达,增加核内Nrf2以及HO-1和NQO-1的蛋白表达,差异均有统计学意义(P<0.05)。大蒜素处理组的HO-1和NQO-1的活力较假手术组及MCAO组显著增加,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论大蒜素具有显著的抗脑缺血再灌注损伤作用,可能的作用机制是大蒜素能够激活Nrf2信号通路,并抑制NADPH氧化酶的表达和活力,从而抑制脑缺血再灌注诱导的氧化应激。

还原型辅酶Ⅰ(NADH)对PC12细胞鱼藤酮损伤的分子调控

为探讨NADH对PC12细胞线粒体鱼藤酮损伤的修复机制 ,采用细胞毒实验、免疫荧光和流式细胞仪检测细胞在鱼藤酮损伤前后细胞增殖基因 (c myc、c erbB 2 )、抗凋亡基因 (bcl 2 )、抑癌基因 (p5 3)、细胞快反应基因 (c fos)相关蛋白和细胞增殖核抗原 (PCNA)的表达。结果表明 ,鱼藤酮能明显抑制PC12细胞增殖 ,下调c erbB 2、c myc、bcl 2和 p5 3基因的表达 ;NADH可以抑制鱼藤酮对PC12细胞线粒体的毒性作用 ,上调细胞bcl 2、c myc、c erbB 2基因和PCNA的表达。提示鱼藤酮可能通过调控线粒体磷酸化过程和下调细胞增殖基因 (c erbB 2、c myc)、抗凋亡基因 (bcl 2 ) ,上调快反应基因 (c fos)表达致使细胞损伤 ,NADH抑制鱼藤酮对PC12细胞的损伤可能与bcl 2、c myc、c erbB 2和p5 3表达调控有关。

还原型辅酶Ⅰ(NADH)拮抗阿霉素心肌线粒体毒性的机制

为探讨还原型辅酶Ⅰ(NADH)对阿霉素 (Dox)心肌线粒体毒性的拮抗作用及其机制 ,建立原代培养的乳鼠心肌细胞和SD大鼠心肌受阿霉素损伤的模型 ,采用MTT比色法、激光共聚焦显微镜、透射电镜和生物氧耗电极检测器检测线粒体形态和功能改变。结果显示 ,Dox组心肌细胞杀伤率增高 ,而NADH/Dox组心肌细胞杀伤作用明显下降 ,Dox诱发的心肌细胞线粒体结构损害表现为肿胀、裂解、嵴断裂直至溶解 ,加入NADH后线粒体结构明显得到保护 ,Dox组和NADH/Dox组MMP和ROS荧光强度有显著性差异 ,Dox可明显损害线粒体氧化磷酸化功能 ,Dox组与NADH/Dox组S3 值、RCI值和ADP/O值比较 ,两者差异有显著性意义。提示NADH能够明显拮抗Dox所致的心肌线粒体毒性损伤作用 。

一株钒还原菌的分离鉴定及V(V)还原机理研究

从钒(V)污染土壤中筛选出一株对钒具有还原能力的细菌,探讨不同V(V)浓度、接种量、pH值条件对菌株还原V(V)的影响,研究菌株胞外、胞内还原V(V)的过程及酶活性变化,解析菌株对V(V)的还原机制.结果表明,筛选菌株NC1-2鉴定为一株神户肠杆菌(Enterobacter kobei).该菌株在160mg/L V(V)下培养7d时,V(V)还原率达96.29%;增加接菌量能加快V(V)还原;pH值8.0时菌株对V(V)的还原效果最佳.降低细胞膜通透性,V(V)还原率从71.2%提高至75.0%.不同亚细胞组分对V(V)的还原存在差异,胞外分泌物及细胞质组分对V(V)的还原率分别为41.71%和80.17%,细胞膜组分未发生V(V)还原.菌株还原V(V)过程中,亚硝酸还原酶(NIR)活性和还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)含量均有不同程度的提高.发生V(V)还原的细胞组分,胞外多糖及胞外蛋白含量增加,钒在细胞内外均有分布.傅里叶红外光谱(FTIR)分析表明菌体表面羟基、羰基、酰胺基参与生物吸附;扫描电镜(SEM)显示V(V)还原后菌体周围出现沉淀,能量散射x射线谱(EDS)结果表明沉淀物中有钒元素存在;X射线光电子能谱(XPS)分析表明菌株NC1-2将V(V)还原为V(IV);透射电镜(TEM)结果表明钒在细菌体内被沉淀.综上结果,菌株NC1-2能在细胞内和细胞外还原V(V)并形成不溶性V(IV)沉淀,NIR和NADH参与这一胞内生物转化过程.研究揭示了神户肠杆菌NC1-2还原V(V)的特性及内在机理,并简析其胞内电子传递过程.该菌株在钒污染修复中具有良好的应用前景.

贝那普利对肝纤维化大鼠核因子E2相关因子2、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶及活性氧簇的影响

目的研究贝那普利对肝纤维化大鼠肝脏核因子E2相关因子2(Nrf2)、还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4(NOX4)表达及血清活性氧簇(ROS)浓度的影响,探讨贝那普利可能的抗纤维化机制。方法将22只清洁级健康雄性SD大鼠随机分3组,其中对照组6只,模型组和贝那普利治疗组每组8只,在造模及治疗过程中模型组和贝拉普利治疗组各有2只大鼠死亡,建立四氯化碳诱导的肝纤维化模型,贝那普利治疗组同时应用贝那普利灌胃,共8周,各组肝组织损伤的评估采用常规苏木精-伊红和Masson染色,RT-PCR检测肝组织中Nrf2mRNA及NOX4mRNA的表达量、比色法测定血清ROS浓度。所有数据表示为均数±标准差,采用SPSS21.0统计软件分析。计量资料组间比较采用单因素方差分析,两两比较采用LSD-t法;相关性分析采用Spearman相关分析。结果随着肝纤维化的加重,模型组肝脏Nrf2mRNA、NOX4mRNA表达及血清ROS浓度均较对照组升高[(4.01±3.40)、(31.78±3.96)、(1.82±0.46)μg/ml对比(0.12±0.11)、(2.03±0.31)、(1.56±0.84)μg/ml,P值均<0.05]。贝那普利治疗后NOX4mRNA表达和ROS浓度较模型组下降[(15.93±5.01)、(0.78±0.44)μg/ml对比(31.78±3.96)、(1.82±0.46)μg/ml,P值均<0.05],而Nrf2mRNA表达较模型组升高(相对表达量6.69±4.86对比4.01±3.40,P<0.05)。Nrf2与NOX4、Nrf2与ROS、NOX4与ROS三组之间均呈正相关(r值分别为0.616、0.411、0.802,P值均<0.05)。结论贝那普利可能通过激活Nrf2表达发挥抗肝纤维化作用,亦可能抑制NOX4产生的ROS介导的氧化应激反应,发挥抗肝纤维化作用。