大黄酸对糖尿病大鼠肾脏还原型辅酶Ⅱ基因表达的影响

目的观察大黄酸对糖尿病大鼠肾脏氧化应激的影响。方法链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病肾病大鼠模型随机分为模型组与治疗组,治疗6周后,比较各组大鼠肾组织中丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性,同时检测各组大鼠血糖、血肌酐、尿素氮、24 h尿蛋白定量等。采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测p22phox及p47phox的表达。结果治疗组较模型组明显改善尿清蛋白、尿素氮水平和肾脏肥大指数。肾脏MDA含量明显下降(P<0.05),SOD活性显著上升(P<0.05)。与对照组比较,模型组p47phox和p22phoxmRNA表达明显增多,大黄酸干预使其表达明显降低。结论大黄酸对2型糖尿病肾脏病变有一定的保护作用,其机制可能是通过抑制氧化应激反应,下调糖尿病大鼠p22phox及p47phox的表达对2型糖尿病模型大鼠肾脏产生保护作用。

工业微生物还原型辅酶Ⅱ的代谢调控研究进展

还原型辅酶Ⅱ(NADPH)主要参与细胞合成代谢,是微生物代谢网络中含量最丰富的氧化还原辅酶之一。辅酶工程作为代谢工程的重要分支,通过改变微生物胞内辅酶再生途径,进而改变细胞内代谢产物构成。本文在归纳NADPH产生途径和调控的基础上,分析和评述了工业微生物基于辅酶工程的NADPH代谢调控研究进展,包括过量表达NADPH代谢相关酶、敲除NADPH代谢相关基因及引入特定代谢途径等策略,指出今后的研究重点在于深入理解NADPH调控与中心碳代谢网络的相互作用,为利用代谢工程进行细胞工厂改造提供基础。

阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征及其相关高血压患者血浆还原型谷胱甘肽与氧化型谷胱甘肽和血清还原型辅酶Ⅱ与氧化型辅酶Ⅱ水平的变化

目的观察阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征(OSAHS)及阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征相关高血压(OSAHAHT)患者血浆还原型谷胱甘肽(GSH)、氧化型谷胱甘肽(GSSG)及血清还原型辅酶Ⅱ(NADPH)、氧化型辅酶Ⅱ(NADP+)水平。探讨OSAHS患者氧化还原态的变化。方法选择OSAHS患者39例,其中无并发症的OSAHS患者20例,OSAHAHT患者19例,;健康对照组19例,应用比色法和酶联免疫吸附法测定血浆GSH、GSSG,血清NADPH、NADP+水平。结果3组受检者血浆GSH、GSSG及血清NADPH、NADP+水平比较,差异均有统计学意义(P<0.01),其中OSAHS患者与对照组比较,OSAHAHT与OSAHS患者组比较,血浆GSH/GSSG、血清NADPH/NADP+比值均降低(P<0.05),并且与反映睡眠呼吸暂停严重程度的指标均呈负相关(P<0.05)。结论OSAHS患者存在GSH/GSSG、NADPH/NADP+比值的变化,且与OSAHS的病情严重程度相关;氧化还原态的变化在OSAHAHT患者中更明显。

Pd(Ⅱ)与还原型辅酶Ⅰ和溶菌酶相互作用的荧光和共振瑞利散射光谱研究

在弱酸性介质中,Pd(Ⅱ)能分别与还原型辅酶Ⅰ(NADH)和溶菌酶(Lyso)形成1∶1和2∶1的复合物,并导致NADH和Lyso的荧光猝灭,但不能引起共振瑞利散射(RRS)的变化和增强.但是当Pd(Ⅱ)与NADH和Lyso同时作用并形成n(Pd(Ⅱ))∶n(NADH)∶n(Lyso)=2∶2∶1的三元复合物时,不仅能使Lyso的荧光猝灭,而且能引起RRS显著增强并出现最大散射波长位于309 nm附近的RRS光谱.研究了Pd(Ⅱ)-NADH-Lyso反应体系的荧光和RRS光谱特征,适宜的反应条件,探讨了反应机理及Pd(Ⅱ)与NADH和Lyso的结合位点和结合模式,考查了荧光猝灭和RRS增强的原因.当Pd(Ⅱ)和Lyso过量时,散射增强(ΔI)在一定范围内与NADH的质量浓度成正比,对NADH的检出限为5.7 ng/mL(8.6×10-9mol/L).同样当Pd(Ⅱ)和NADH过量时,散射增强(ΔI)在一定范围内与Lyso的质量浓度成正比,检出限为15.1 ng/mL(1.06×10-9mol/L).因此RRS光谱不仅可为研究金属离子与不同生物分子之间的相互作用提供新的信息,而且也为高灵敏度定量测定痕量NADH和Lyso这样的生物分子创造了条件.

还原型辅酶Ⅰ荧光特性的初步观察

目的 了解NADH的荧光特性。方法 用荧光光度计扫描NADH 340～ 4 2 0nm范围确定其激发波长 ,扫描 390～ 5 6 0nm范围确定其发射波长。扫描氧化型辅酶Ⅰ (NAD)标准品激发波长范围及发射波长范围 ,再于NADH中加入NAD ,观察其对NADH的干扰。加入LD液及乳酸反应体系 ,观察其对NADH的干扰。结果 NADH激发波长为 382nm ,发射波长为 4 6 0nm。NAD在 2 80～ 4 2 0nm处无激发波峰 ,4 0 0～ 5 0 0nm处无发射波峰。NADH中加入NAD后激发波峰有改变。加入LD液后NADH的激发波峰及发射波峰无改变。加入乳酸反应体系后激发波峰有改变。结论 利用NADH的荧光特性 ,在检测中只需固定其发射波长 ,通过观察NADH荧光强度的变化 ,就可以对一些微量物质进行检测 ,可将其测定灵敏度提高 2～

鼻咽癌组织中还原型辅酶Ⅱ氧化酶4和表皮生长因子受体的表达与调强放疗预后的相关性研究

目的 探讨鼻咽癌组织中还原型辅酶Ⅱ氧化酶4(reduced coenzyme II oxidase 4,NOX4)和表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)的表达与调强放疗预后的相关性。方法 回顾性收集2018年1月~2021年6月南阳市中心医院收治的82例拟接受调强放疗的鼻咽癌患者及30名健康志愿者的临床资料,分别设为研究组和对照组。免疫组织化学法检测并比较研究组鼻咽癌组织与对照组正常鼻黏膜中NOX4和EGFR的表达情况;分析研究组鼻咽癌组织NOX4和EGFR表达水平与临床病理特征的关系;采用Cox比例风险模型和Kaplan-Meier生存曲线分析NOX4和EGFR表达与鼻咽癌患者预后生存的关系。结果研究组鼻咽癌组织NOX4高表达率、EGFR高表达率均高于对照组鼻黏膜组织(P<0.05)。T分级、N分级、临床分期及放疗敏感性与NOX4的表达有统计学意义(P<0.05),性别、年龄、肿瘤体积与NOX4的表达无统计学意义(P>0.05);年龄、T分级、N分级、临床分期及放疗敏感性与EGFR的表达有统计学意义(P<0.05),性别、肿瘤体积与EGFR的表达无统计学意义(P>0.05)。截止2022年6月31日,中位随访时间24个月(9~52个月),10.98%(9/82)局部复发、19.51%(16/82)远处转移、14.63%(12/82)死亡。Cox多因素回归分析结果显示,年龄>60岁、T3~T4分级、NOX4高表达、EGFR高表达是影响总生存期的独立危险因素(P<0.05)。NOX4高表达与低表达患者3年累积生存率分别为55.1%、80.0%;EGFR高表达与低表达患者3年累积生存率分别为47.3%、80.2%,Kaplan-Meier生存曲线分析显示,NOX4、EGFR低表达患者的累积生存曲线分别优于NOX4、EGFR高表达患者(Log rank χ^(2)=3.805、4.664,P<0.05)。结论鼻咽癌组织中NOX4和EGFR均异常高表达,二者表达情况与T分级、N分级、临床分期及放疗敏感性关系密切,NOX4和EGFR高表达患者调强放疗预后更差。

还原型辅酶NADH对辐射后小鼠外周血及脾组织学改变的影响

目的 探讨NADH对小鼠受照后 ,外周血白细胞和免疫器官脾组织学改变。方法 采用 6 .0Gy 6 0 Co一次性辐射小鼠 ,尾静脉采血计数外周血白细胞 ,观察受照后第 7天脾组织学改变和 30d小鼠存活率。结果 NADH能够对抗受照后小鼠外周血白细胞减小 ,增加脾重量和脾指数 ,减小脾中央动脉出血 ,提高小鼠 30d存活率。结论 NADH具有明显的抗辐射作用 。

一种简便、准确的血清氧化及还原型辅酶II的分光光度测定法的建立

由于辅酶 II在正常细胞稳态及许多代谢异常中均非常重要 ,寻找一个简便而可靠的方法测定氧化型及还原型辅酶 II对于了解机体的氧化还原稳态将非常有益。本法是对 Nisselbam法稍加改进 ,运用一个敏感的酶循环反应以分光光度法测定血清中的辅酶 II,结果显示标准曲线线性关系良好 ,加样回收较完全。用本法测定的 2 7例健康献血员 ,血清 NADPH、NADP+ 及其比值 NADPH/ NADP+ 分别为 8.385± 1.5 16 nm ol/ ml,3.6 2 4± 0 .985nmol/ m l,2 .36 12± 0 .80 5 ,男女性别无明显差异。本法灵敏、准确、重现性好、费用低、操作简便 ,是测定氧化型及还原型辅酶

还原型辅酶Ⅱ组化方法的研究

为了提高还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶组化方法的效果和敏感性 ,选用合适的操作条件 ,观察和比较操作中各种参数改变对反应结果的影响。发现操作过程中各个环节和因素的变化均会不同程度地影响试验结果。为此对整个操作过程 ,从组织的取材、固定、切片、反应和反应后处理过程等操作步骤的最佳条件进行了探讨。

流动注射化学发光法测定还原型辅酶Ⅰ

将还原型辅酶Ⅰ（ＮＡＤＨ）还原Ｆｅ３＋生成Ｆｅ２＋的化学反应与Ｆｅ２＋催化溶解氧氧化Ｌｕｍｉｎｏｌ的化学发光反应相偶合，同时采用试剂固定化技术将体系中的分析试剂Ｆｅ３＋及Ｌｕｍｉｎｏｌ全部电价固定在离子交换柱中，建立了一种测定还原型辅酶Ⅰ的流动注射化学发光新方法．该法对于ＮＡＤＨ响应的线性范围为１．０×１０－７～１．０×１０－４ｍｏｌ／Ｌ，检出限为５．５×１０－８ｍｏｌ／Ｌ，相对标准偏差小于５％（１．０×１０－７ｍｏｌ／Ｌ，ｎ＝７）．

还原型辅酶Ⅰ对抗肿瘤药物抑制人胃癌细胞的影响

[目的]研究还原型辅酶Ⅰ(NADH)对抗肿瘤药物抑制人胃癌SGC鄄7901细胞活性的影响。[方法]用MTT法观察NADH和抗肿瘤药物氟尿嘧啶、鬼臼乙叉甙、顺铂、表阿霉素、丝裂霉素对人胃癌SGC鄄7901细胞活性的抑制率。[结果]NADH可明显降低氟尿嘧啶、鬼臼乙叉甙、顺铂、表阿霉素的肿瘤细胞抑制率(P<0.05)。并且可显著提高人胃癌细胞对丝裂霉素的化疗敏感性(P<0.01)。[结论]NADH可能是肿瘤化疗过程中的重要调节剂。

还原型辅酶Ⅰ对缺氧复氧诱发大鼠脑皮层神经元凋亡的保护作用

目的通过建立大鼠脑皮层神经元缺氧复氧模型,探讨还原型辅酶Ⅰ(reduced nicotinamide adenine dinu-cleotide,NADH)对缺氧复氧诱发神经元凋亡的保护作用。方法原代培养新生大鼠脑皮层神经元,随机分成正常对照组,缺氧复氧组和NADH组。用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL法)检测细胞凋亡,计算凋亡率,检验各试验组细胞凋亡率的差异。用透射电镜观察凋亡细胞超微结构。结果正常对照组各阶段细胞凋亡率间差别无统计学意义(P>0.05)。缺氧复氧组和NADH组凋亡率均较正常对照组调亡率大,差异有统计学意义(P<0.01),缺氧复氧组较NADH组凋亡率大,差异有统计学意义(P<0.01)。在复氧12 h内给予NADH,对于神经元凋亡抑制作用优于其余复氧时间点。结论缺氧复氧可诱发体外培养神经元发生凋亡,NADH对此有明显抑制作用。在复氧12 h内给予NADH对凋亡的抑制作用较明显。

还原型辅酶Ⅱ氧化酶2(Nox2)介导缺血/再灌注损伤

缺血/再灌注损伤（IRI）和活性氧的生成可引发移植物功能延迟恢复（DGF）,我们推测还原型辅酶Ⅱ氧化酶2（Nox2）在此过程中起重要作用。我们用野生型和Nox2（-/-）小鼠IRI模型和具有DGF的患者体外验证这个假设。在缺氧条件下,Nox2（-/-）小鼠的近端小管上皮细胞减少了基质金属蛋白酶-2（MMP2）、波形蛋白和热休克蛋白27（HSP27）的表达。

还原型辅酶Q_(10)的合成研究

2,3-二甲氧基-5-甲基-1,4-苯酚与异癸异戊二烯醇在改性BF3.OEt2的催化下发生傅克烷基化反应合成还原型辅酶Q10。经过优化,在n(氢化辅酶Q0)∶n(异癸异戊二烯醇)∶n(催化剂)=5∶1∶0.2,反应温度30℃,反应时间10 m in的条件下收率达75%。

慢性氟中毒大鼠脑组织中依赖还原型辅酶/醌氧化还原酶1及血红素氧合酶1的表达

目的 观察慢性氟中毒大鼠脑组织中依赖还原型辅酶/醌氧化还原酶1 （quinone oxidoreductase-1,NQO1）和血红素氧合酶1（heme oxygenase-1,HO1）mRNA和蛋白表达水平的改变,以及对转录因子NF_E2相关因子2/抗氧化反应元件（Nrf2/ARE）信号通路的影响,探讨氟中毒性脑损伤的机制.方法 SD大鼠60只,采用随机数字表法,按照体质量分为对照组（饮水氟含量＜ 0.5 mg/L）、染氟组（饮水氟含量为50.0 mg/L）,每组30只,雌雄各半;实验期为10个月,观察氟斑牙情况,并收集大鼠24 h尿液;心脏灌流处死大鼠后,取后肢股骨和大脑组织.用氟离子选择电极法测定大鼠尿氟及骨氟;用蛋白印迹方法和实时荧光定量PCR分别检测脑组织中NQO1、HO1蛋白和mRNA表达水平.结果 染氟组大鼠出现不同程度的氟斑牙,对照组大鼠牙齿无异常改变;染氟组大鼠尿氟[（2.16±0.39）mg/L]及骨氟[（211.07±40.52）mg/kg]均高于对照组[（1.70±0.24）mg/L,（34.67±11.15）mg/kg,t=2.11、3.23,P均＜0.05].染氟组大鼠脑组织中NQO1、HO1蛋白表达[（255.2±14.3）％、（187.2±11.1）％]高于对照组[（100.0±12.2）％、（100.0±8.9）％,t=2.14、2.05,P均＜0.05].染氟组脑组织中NQO1、HO1 mRNA表达[（210.2±9.8）％、（154.5±7.4）％]高于对照组[（100.0±10.4）％、（100.0±9.7）％,t=2.33、2.75,P均＜0.05].结论 慢性氟中毒导致脑组织中NQO1及HO1表达水平升高,可能与Nrf2/ARE信号通路的开启有关,对代偿性增强细胞抗氧化能力有一定作用.

还原型辅酶Ⅱ氧化酶NOX家族在急性肺损伤中的作用

急性肺损伤(ALI)及其严重形式急性呼吸窘迫综合征(ARDS)是临床常见危重症,发病诱因复杂多样,主要病理特征是气血屏障破坏导致的弥漫性炎性、蛋白性肺水肿。活性氧(ROS)可氧化脂质、蛋白质、核酸等大分子物质从而介导氧化损伤。在产生ROS的诸多体系中,还原型辅酶Ⅱ(NADPH)氧化酶介导的ROS是其主要来源,其功能亚基、跨膜亚基NOX家族在肺组织中的分布具有细胞类型依赖性。NOX来源的ROS参与肺组织的防御功能并且与ALI/ARDS的发生发展相关。本文主要从NOX家族在肺组织中的细胞分布、活化因素及与ALI发生发展的关系进行综述。

反硝化除磷中胞内还原型辅酶Ⅰ的荧光光谱分析

采用三维荧光技术对反硝化除磷工艺中微生物胞内还原型辅酶Ⅰ(NADH)进行了分析,并建立了NADH特征峰荧光强度与PO3-4-P和NO-3-N浓度变化的关系。工艺运行结果表明:进水COD和PO3-4-P分别为180 mg/L和7.5 mg/L时,厌氧反应结束后,COD降至22.3 mg/L,而PO3-4-P上升至22.4 mg/L;缺氧反应结束后,PO3-4-P和NO-3-N浓度分别由22.4 mg/L和12.1 mg/L降为0.65 mg/L和0.41 mg/L。三维荧光光谱显示:微生物胞内NADH特征峰中心位置为Ex/Em=350 nm/450 nm,NADH特征峰荧光强度在厌氧阶段由343.8增加到987.1,在缺氧阶段由987.1减少到381.8。NADH特征峰荧光强度与水中PO3-4-P和NO-3-N浓度的相关性分析结果表明:在厌氧和缺氧阶段NADH特征峰荧光强度与PO3-4-P浓度的相关系数(r2)分别达到0.909和0.916,在缺氧阶段NADH特征峰荧光强度与NO-3-N浓度的r2达到了0.921,即可以通过测定NADH的特征峰荧光强度来预测反硝化除磷工艺中PO3-4-P和NO-3-N浓度变化,为间接测定PO3-4-P和NO-3-N浓度提供了一种可行的方法。

还原型辅酶Ⅱ氧化酶抑制剂夹竹桃麻素对重症急性胰腺炎大鼠肠道损伤的保护作用

目的探讨还原型辅酶Ⅱ（NADPH）氧化酶抑制剂夹竹桃麻素（Apocynin）对大鼠重症急性胰腺炎（SAP）大鼠肠道损伤的的保护作用及其机制。方法雄性Wistar大鼠48只，随机分为假手术组（SO组，n=8）、重症急性胰腺炎组[SAP组，按时间分3、12、24h亚组（n=8）]、Apocynin预处理组（APO组，n=8）、Apocynin药物对照组（APO-CON组，n=8）。SAP大鼠胆胰管逆行注射5％牛磺胆酸钠制备SAP模型。APO组造模同SAP组，在造模前30rnin股静脉注射Apocynin（50mg/kg），SO组仅翻动胰腺后关腹，APO-CON组仅行股静脉注射Apocynin（50mg／kg），余同S0组。全自动生化仪检测各组大鼠血清淀粉酶（AMY）及脂肪酶（HP）水平。苏木素一伊红（HE）染色观察各组胰腺组织及回肠组织病理改变。采用免疫组织化学法检测p38丝裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）、磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶（p—p38MAPK）及核转录因子-κB（NF—κB）回肠组织的表达。透射电镜下观察回肠黏膜上皮细胞超微结构改变。结果与SO组AMY、LIP胰腺病理评分及回肠病理评分（1236．00±155．72、90．50±9．60、0．24±0．07、0．34±0．18）比较，SAP组大鼠血清AMY、HP、胰腺和回肠病理评分升高明显（4918．20±389．63、1712．90±103．80、12．45±1．01、3．50±0．31，P〈0．05）。APO组上述指标明显下降（3698．00±386．93、659．40±92．40、8．76±1．34、2．20±0．36）。APO—CON组上述指标与SO组比较差异无统计学意义（P〉0．05）。SAP组肠组织光镜下可见损伤严重，APO组光镜下回肠组织病理损伤较SAP组减轻。免疫组织化学检查显示SAP组大鼠回肠组织p38、P-p38及NF—κB表达较SO组与APO—CON组升高明显（P〈0．05），APO组上述指标均明显下降（P〈0．05）。电镜下可见APO组大鼠回肠黏膜上皮细胞超微结构改变较SAP组减轻。光镜下及电镜下，SO组及APO—CON组均无明显改变。结论Apoeynin通过减少重症急性胰腺炎肠组织p38MAPK、NF—κB表达，对重症急性胰腺炎肠损伤具有保护作用。

还原型辅酶Ⅱ氧化酶抑制剂Apocynin对急性坏死性胰腺炎大鼠肾损伤的保护作用

目的探讨还原型辅酶Ⅱ氧化酶(NADPH oxidase,NOX2)抑制剂夹竹桃麻素(Apocynin)对急性坏死性胰腺炎(acute necrotic pancreatitis,ANP)模型大鼠肾损伤的保护作用。方法 30只Wistar大鼠随机分为3组:假手术组(SO组)、急性坏死性胰腺炎组(ANP组)、Apocynin治疗组(APO组),每组各10只大鼠。ANP组采用逆行胆胰管注射牛磺胆酸钠溶液1 ml/kg(STC)制备ANP模型。APO组在造模前30 min股静脉注射Apocynin(50 mg/kg),其余同ANP组。SO组开腹后仅翻动十二指肠和胰腺。造模后12 h处死大鼠,下腔静脉采血,留取各组大鼠肾组织以4%多聚甲醛固定。全自动生化仪检测血清淀粉酶(AMY)、脂肪酶(LIPA)、肌酐(Cr)、尿素(BUN)水平,肾脏组织固定行HE染色,光学显微镜下观察肾脏病理改变,免疫组化及免疫荧光法检测肾脏组织半胱天冬酶-3(Caspase-3)、核转录因子-κB(NF-κB)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、肠黏膜髓过氧化酶(MPO)水平。结果 (1)ANP组大鼠血清AMY、LIP、Cr、BUN水平及组织病理改变较SO组明显升高(P<0.05),应用Apocynin后降低(P<0.05)。(2)ANP组大鼠Caspase-3、NF-κB、TNF-α表达水平较SO组升高(P<0.05),应用Apocynin后有所降低(P<0.05)。(3)ANP组大鼠髓过氧化酶(MPO)表达水平较SO组升高(P<0.05),应用Apocynin后有所降低(P<0.05)。结论 NOX2抑制剂Apocynin可减轻ANP模型大鼠肾脏损伤。