白藜芦醇通过ERK1/2和NF-κB通路调节NADPH氧化酶表达改善急性肺损伤

目的探讨白藜芦醇对急性肺损伤大鼠NADPH氧化酶的影响,并分析相关信号通路机制。方法将50只雄性SPF级SD大鼠随机分为对照组、模型组、地塞米松组、低剂量白藜芦醇组和高剂量白藜芦醇组,每组10只。对照组和模型组给予生理盐水干预,地塞米松组、低剂量白藜芦醇组和高剂量白藜芦醇组分别给予2 mg/kg地塞米松、100 mg/kg白藜芦醇、500 mg/kg白藜芦醇干预,1次/d,连续干预14 d。干预结束后,除对照组外,其余组别大鼠构建急性肺损伤模型。比较各组大鼠肺组织病理状态、肺湿重/干重比(W/D)、肺损伤评分,采用ELISA法检测肺泡灌洗液白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;试剂盒检测丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平;采用RT-PCR法检测各组NADPH氧化酶亚基p47^(phox)、p22^(phox),及ERK、NF-κB mRNA水平;采用Western bloting法检测各组p47^(phox)、p22^(phox)、p-ERK1/2、ERK1/2、p-NF-κB、NF-κB蛋白水平。结果模型组、地塞米松组、低剂量白藜芦醇组和高剂量白藜芦醇组W/D及肺损伤评分、MDA水平、p22^(phox)、p47^(phox)、ERK1/2、NF-κB mRNA、p47^(phox)蛋白、p-ERK/ERK、p-NF-κB/NF-κB、IL-6、IL-8、TNF-α水平高于对照组,而SOD、GSH-Px水平低于对照组(P<0.05)。结论白藜芦醇可改善LPS诱导的急性肺损伤大鼠NADPH氧化酶及氧化应激状态,其作用机制可能与ERK1/2-NF-κB通路有关。

没食子酸联合顺铂通过下调环氧化酶-2抑制食管癌的实验研究

目的:探究没食子酸(GA)和顺铂(DDP)是否能对食管癌细胞产生协同抗肿瘤作用。方法:将人食管癌细胞株KYSE150细胞接种于裸鼠左侧肋腹皮下,建立KYSE150细胞荷瘤裸鼠模型,待肿瘤生长至直径约5~7 mm时,将裸鼠随机分为对照组、GA组、DDP组及联合(GA+DDP)组。分别于干预后1、2、3、4周给各组裸鼠称重并测定各组肿瘤体积,计算肿瘤抑制率。干预后4周处死裸鼠,取肿瘤组织及血清。采用RT-qPCR、Western blot和ELISA法检测环氧化酶(COX)-2及其衍生物前列腺素E_(2)(PGE_(2))的表达水平。体外研究方面,分别用GA、DDP及联合组处理食管癌细胞系EC9706和KYSE150,用MTT实验检测细胞活力变化;用RT-qPCR、Western blot和ELISA法分别检测COX-2及PGE_(2)的表达。结果:与对照组相比,各给药组体重在喂养过程中都在增加,但无统计学差异。GA组、DDP组和联合组肿瘤体积均比对照组显著减小,且三组显著降低食管癌组织中COX-2 mRNA及COX-2蛋白的表达及血清中PGE_(2)的含量(P<0.05)。与GA和DDP单独使用相比,联合用药抑瘤效果更好(P<0.05)。GA组、DDP组和联合组均能显著降低食管癌细胞的增殖、COX-2 mRNA及COX-2蛋白表达以及PGE_(2)含量(P<0.05)。与GA和DDP单独使用相比,联合用药抑制作用更明显(P<0.05)。结论:GA联合DDP在体内、外均具有协同抗食管癌的活性,且可能成为一个非常有前景的食管癌临床治疗策略。

赖氨酰氧化酶LOXL2稳定性的理论计算研究

赖氨酰氧化酶LOXL2是一种依赖于铜离子的胺氧化酶,催化胶原蛋白和弹性蛋白的赖氨酸残基侧链发生氧化脱氨,发挥着稳固细胞外基质的作用。而稳定性是蛋白质的一个重要特性,直接影响蛋白质的分子动态及其正常功能发挥,这与人类的健康和疾病密切相关。然而,关于LOXL2的稳定性目前鲜有报道,哪些位点对其稳定性有显著影响尚不清楚。本研究采用冷冻电镜和Alphafold2的数据,建立LOXL2的全长结构,通过分子动力学模拟得到其优化构象。再通过4种方法(mCSM,PremPS,DeepDDG和FoldX),计算所有位点的稳定性属性,筛选出对稳定性有显性影响的位点(定义为关键位点)。结果表明,95个关键位点对LOXL2的稳定性具有显著影响,在5个结构域上的分布数量依次为14、13、8、11和26,而结构域间的连接肽段上也有23个关键位点。在这些关键位点中,类型及数量分别为Leu(24个)、Val(20个)、Ile(12个)、Trp(11个)、Phe(11个)、Tyr(6个)、Cys(6个)、Met(4个)和Arg(1个)。其中大部分关键位点(88个)为疏水性质,这与蛋白质折叠的主要力量为疏水作用的情况是一致的,而Cys两两成对,构成二硫键,对LOXL2的结构及功能发挥重要作用。讨论中,我们将预测结果与实验值进行比较,并用自由能微扰方法,对部分关键位点进行比较,从多方面论证此项工作的可信度。此项研究,可为靶向LOXL2的疾病治疗研究,提供重要指导。

慈苓化浊方对痛风大鼠滑膜组织环氧化酶-2、热休克蛋白70表达的影响

目的:分析慈苓化浊方对痛风大鼠滑膜组织中环氧化酶-2(COX-2)、热休克蛋白70(HSP70)表达的影响。方法:选取50只SPF级SD大鼠,10只大鼠作为对照组,另外40只建立痛风模型,将30只建模成功的大鼠分为模型组、药物对照组、慈苓化浊方组,每组10只。观察各组大鼠组织病理学、关节肿胀度、COX-2、HSP70表达、炎症因子、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)/叉头框转录因子O亚族1(FoxO1)通路相关因子及其mRNA表达量。结果:与对照组相比,模型组、药物对照组、慈苓化浊方组关节肿胀度、COX-2、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)、PI3K mRNA、AKT mRNA、FoxO1 mRNA表达量升高,HSP70 mRNA、Caspase-3 mRNA表达量降低(均P<0.05)。与模型组相比,药物对照组、慈苓化浊方组关节肿胀度、COX-2、TNF-α、IL-1β、IL-6、PI3K mRNA、AKT mRNA、FoxO1 mRNA表达量降低,HSP70 mRNA、Caspase-3 mRNA表达量升高(均P<0.05)。与药物对照组相比,慈苓化浊方组关节肿胀度、COX-2、TNF-α、IL-1β、IL-6、PI3K mRNA、AKT mRNA、FoxO1 mRNA表达量降低,HSP70 mRNA、Caspase-3 mRNA表达量升高(均P<0.05)。结论:采用慈苓化浊方干预痛风大鼠,可降低大鼠关节肿胀程度,降低滑膜组织COX-2、HSP70表达,抑制炎症反应,其作用机制可能与抑制PI3K/AKT/FoxO1通路有关。

烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶2对老年颅脑损伤患者的影响

目的 探讨血清还原烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶2(nicotinamide adenine dinucleotide phosphate reduced oxidase 2,NOX2)水平与老年颅脑损伤患者脑组织血供和预后的相关性。方法 选取2019年1月至2022年12月邯郸市人民医院神内一科收治的老年颅脑损伤患者86例作为颅脑损伤组,另选取同期年龄、性别相匹配的老年健康体检者80例作为对照组。颅脑损伤组根据入院时格拉斯哥昏迷评分(Glasgow coma score, GCS)分为轻型组22例,中型组35例和重型组29例。颅脑损伤组治疗后6个月根据格拉斯哥预后评分(Glasgow outcome score, GOS)分为预后良好组54例和预后不良组32例。比较各组血清NOX2水平和脑血流指标动态变化,分析其与预后GOS评分的相关性。结果 与对照组比较,颅脑损伤组1、3、5、7、10 d的平均血流速度(mean blood flow velocity, Vm)、局部脑血流量(region cerebral blood flow, rCBF)、局部脑血容量(region cerebral blood volume, rCBV)显著降低,血清NOX2水平显著升高(P<0.01)。不同程度颅脑损伤组1、3、5、7、10 d血清NOX2水平比较,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。颅脑损伤组1、3、5、7、10、14 d血清NOX2水平与入院时GCS评分呈负相关(r=-0.413、-0.427、-0.515、-0.592、-0.566、-0.338,P<0.01),1、3、5、7、10 d的Vm、rCBV、rCBF与GCS评分呈正相关(r=0.392、0.379、0.407、0.418、0.420,P<0.01;r=0.404、0.414、0.429、0.419、0.428,P<0.01;r=0.412、0.427、0.432、0.428、0.393,P<0.01)。颅脑损伤组1、3、5、7、10 d血清NOX2水平与Vm、rCBV、rCBF呈负相关(P<0.01)。预后不良组1、3、5、7、10、14 d血清NOX2水平显著高于预后良好组,Vm、rCBV、rCBF显著低于预后良好组(P<0.05,P<0.01)。颅脑损伤组1、3、5、7、10、14 d血清NOX2水平与治疗后6个月GOS评分呈负相关,Vm、rCBV、rCBF与GOS评分呈正相关(P<0.01)。结论 血清NOX2水平升高与老年颅脑损伤患者脑组织血供不足和预后不良密切相关,动态监测血清NOX2水平和脑血流指标变化对颅脑损伤预后评估有重要临床意义。

超声弹性成像联合血清miR-26b-5p及环氧化酶-2检测对早期子宫肌瘤的临床诊断价值

目的:探讨超声弹性成像联合血清微小RNA-26b-5p(miR-26b-5p)、环氧化酶-2(COX-2)检测对早期子宫肌瘤的诊断价值。方法:选取2020年10月至2022年9月在无锡联勤保障中心第九〇〇医院诊断的228例疑似子宫肌瘤患者,以病理切片检查结果为“金标准”,将其分为阳性组(124例)和阴性组(104例),两组均行超声弹性成像检查,采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)法检测患者血清miR-26b-5p表达水平,酶联免疫吸附法检测血清COX-2水平,通过受试者工作特征(ROC)曲线下面积(AUC),分析血清miR-26b-5p、COX-2对子宫肌瘤的诊断价值,采用四表格法分析超声弹性成像以及超声弹性成像联合血清miR-26b-5p、COX-2对子宫肌瘤的诊断价值。结果:经病理切片检查,228例患者中子宫肌瘤阳性124例,阴性104例;超声弹性成像结果显示阳性117例,阴性111例,超声弹性成像检查诊断的灵敏度为74.19%,特异度为75.96%,准确率为75.00%。阳性组患者血清miR-26b-5p水平明显低于阴性组,COX-2水平明显高于阴性组,两组比较差异有统计学意义(t=4.519、5.601,P<0.05)。血清miR-26b-5p诊断子宫肌瘤的AUC为0.749,灵敏度为95.97%,特异度为46.15%,最佳截断值为1.10;血清COX-2诊断子宫肌瘤的AUC为0.835,灵敏度为66.13%,特异度为84.62%,最佳截断值为40.58 mg/L;超声弹性成像联合血清miR-26b-5p、COX-2诊断的灵敏度为93.55%,特异度为86.54%,准确率为90.35%,与单独诊断比较差异有统计学意义(χ^(2)=23.158、17.169,P<0.05)。结论:超声弹性成像联合血清miR-26b-5p、COX-2诊断早期子宫肌瘤具有较高的效能。

环氧化酶-2及12-脂氧化酶在宫颈病变进展中的临床意义

目的 研究宫颈病变组织中环氧化酶-2(COX-2)以及12-脂氧化酶(12-LOX)的表达在宫颈病变进展中的意义。方法 选择电子阴道镜检查宫颈活检患者200例作为研究对象,进行回顾性分析,根据病理诊断结果将其分为慢性宫颈炎组43例、宫颈低级别病变组(LSIL)57例、宫颈高级别病变组(HSIL)54例、宫颈癌组46例,使用免疫组化染色法检测COX-2、12-LOX在各级别宫颈病变组织中的表达情况及其在临床中的意义。结果 经分析后,宫颈癌组及宫颈高级别病变组宫颈组织COX-2、12-LOX表达阳性率高于宫颈低级别病变组及慢性宫颈炎组(P<0.05),阳性率由低到高分别为慢性宫颈炎组、LSIL组、HSIL组、宫颈癌组,根据疾病的进展其阳性率呈现出逐渐上升的趋势;宫颈癌组宫颈组织COX-2、12-LOX表达阳性率高于宫颈高级别病变组(P<0.05)。结论 宫颈组织COX-2、12-LOX表达的阳性率与宫颈病变的进展有关,表明检测宫颈组织COX-2、12-LOX对宫颈恶性病变有一定的诊断和预测意义。

环氧化酶2在心肌缺血再灌注损伤中的研究进展

环氧化酶(cycloxygenase,COX)包括有2种异构酶:其中1种为COX-1,其对机体具有正常的生理保护性功能;另外1种为COX-2,主要参与机体的镇痛和抗炎作用。COX-2是心肌缺血再灌注损伤(myocardial ischemia-reperfusion injury,MI/RI)过程中炎症、动脉粥样硬化斑块、中毒性休克和细胞凋亡的重要介质,并导致多个组织出现功能障碍及损伤。非甾体的抗炎作用则主要与COX-2抑制剂有关,因此COX-2抑制剂可应用于MI/RI的临床治疗。

环氧化酶2抑制剂parecoxib对C2C12骨骼肌细胞分化的影响及机制研究

目的:探讨环氧化酶2抑制剂帕瑞昔布(parecoxib)对C2C12小鼠骨骼肌细胞分化的影响及其分子机制。方法:CCK-8法检测不同浓度的parecoxib处理后C2C12细胞的活力;分化培养基诱导C2C12小鼠骨骼肌细胞48 h后,将细胞分为对照组(control组)和parecoxib组继续分化48 h。免疫荧光检测肌管细胞分化成熟的标志蛋白肌球蛋白重链(MyHC),qPCR和Western印迹分别检测My HC、肌原纤维Ⅰ型(Myh7)、Ⅱa型(Myh2)、Ⅱb型(Myh4)、Ⅱx型(Myh1)、肌生成决定因子(MyoD)、肌生成因子5(Myf5)、肌生成素(myogenin)的基因和蛋白表达。结果:0、100、150、200、250、300μmol/L的parecoxib均不影响细胞活力。与对照组相比,parecoxib组MyHC阳性肌纤维数量减少,肌管融合受损,分化程度降低,MyHC、MyHCⅡa、MyHCⅡb、MyHCⅡx、MyoG、MyoD和Myf5的mRNA水平降低(t=19.04、53.93、72.38、33.72、15.32、3.061、18,均P<0.05),MyHCⅠ的mRNA水平升高(t=17.12,P<0.01)。Western印迹结果显示,与对照组相比,parecoxib组MyHC、MyHCⅡa、MyHCⅡb、MyHCⅡx、MyoG和MyoD蛋白水平降低(t=7.297、7.852、11.43、227、80.14、11.76,均P<0.01),MyHCⅠ蛋白水平升高(t=5.891,P<0.01)。结论:Parecoxib可能通过下调MyoG、MyoD和Myf5的表达,抑制C2C12骨骼肌细胞的分化。

基于FAERS数据库对选择性环氧化酶-2抑制剂不良事件信号的挖掘和分析

目的挖掘3种选择性环氧化酶-2抑制剂(塞来昔布、罗非昔布、依托昔布)的药物不良事件(ADE)信号,为临床安全用药提供一定的参考。方法提取美国药品不良事件报告系统(FAERS)数据库2004年第1季度至2023年第3季度中塞来昔布、罗非昔布、依托昔布的ADE报告数据,分别以首选术语(PT)、按系统器官分类(SOC)对ADE进行排序。分析3种药物ADE报告的基本情况、严重ADE报告比例及累及系统器官、ADE信号的相同和不同。结果提取到塞来昔布的报告患者40087例,PT数107198个;罗非昔布的报告患者35827例,PT数239848个;依托昔布的报告患者295例,PT数954个。3种药物中,塞来昔布ADE报告数较多,但严重ADE比例较低(占66.40%),其他2种药物报告数少,但严重ADE报告占比均>99%。3种药物共得到1457个有效ADR信号,其中塞来昔布有效信号447个,罗非昔布有效信号960个,依托昔布有效信号50个。信号累及27个不同的SOC,其中塞来昔布排名前4位的为全身性疾病及给药部位各种反应(占17.18%)、心脏器官疾病(占10.96%)、各类神经系统疾病(占10.34%)、胃肠系统疾病(占9.52%);罗非昔布排名前4位的为心脏器官疾病(占22.73%)、各类神经系统疾病(占13.07%)、全身性疾病及给药部位各种反应(占8.80%)、血管与淋巴管类疾病(占6.72%);依托昔布排名前4位的为胃肠系统疾病(占17.51%)、皮肤及皮下组织类疾病(占12.58%)、全身性疾病及给药部位各种反应(占11.64%)、呼吸系统、胸及纵隔疾病(占7.55%)。3种药物共同的ADE信号为:高血压、呼吸困难。结论塞来昔布、罗非昔布、依托昔布发生ADE的累及系统器官各不相同,临床使用中应根据患者实际情况合理选择。

超声弹性成像联合血清Mac-2结合蛋白糖基化异构体、NADPH氧化酶2对慢性乙型肝炎患者肝纤维化的诊断价值

目的探讨超声弹性成像联合血清Mac-2结合蛋白糖基化异构体(Mac-2 binds protein glycosylated isomers,M2BPGi)、还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶2(NADPH oxidase 2,NOX2)对慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B,CHB)患者肝纤维化的诊断价值。为肝纤维化的诊断提供参考依据。方法选取宜昌市第三人民医院于2021年1月—2023年3月期间收治的175例CHB患者为研究对象,并根据肝纤维化程度分为非显著性肝纤维化组(n=67)和显著性肝纤维化组(n=108)。多因素Logistic回归分析法分析发生显著性肝纤维化的影响因素;超声弹性成像联合血清M2BPGi、NOX2水平对显著性肝纤维化的诊断价值采用受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线分析。结果非显著性肝纤维化组和显著性肝纤维化组丙氨酸氨基转移酶(alanine transaminase,ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)、白蛋白(albumin,ALB)和血小板计数(platelet count,PLT)比较差异均具有统计学意义(P均<0.05);与非显著性肝纤维化组比较,显著性肝纤维化组患者应变均值(mean strain value,MEAN)和峰度明显较低(P<0.05),偏度、复杂度(complexity,COMP)、对比度、标准差、蓝色区域面积比(ratio of blue area,AREA)和血清M2BPGi和NOX2水平均明显较高(P<0.05)。血清M2BPGi、NOX2、ALT、COMP、AREA是影响CHB患者发生显著性肝纤维化的独立危险因素,而PLT和MEAN是其保护因素(P<0.05)。ROC分析结果显示,M2BPGi、NOX2、MEAN、COMP和AREA联合诊断显著性肝纤维化的AUC为0.933,显著大于各指标单独诊断的AUC(P<0.05)。结论M2BPGi和NOX2在发生显著性肝纤维化的CHB患者血清中的水平较高,2者联合超声弹性成像对显著性肝纤维化具有较高的诊断价值。

经鼻高流量氧气联合布地奈德福莫特罗治疗慢阻肺急性发作患者效果及其对环氧化酶-2与α2-巨球蛋白水平影响

目的:探讨经鼻高流量氧气联合布地奈德福莫特罗治疗慢阻肺急性加重期(Acute exacerbation of chronic obstructive pulmonary disease,AECOPD)患者效果及其对环氧化酶-2(Cyclooxygenase-2,COX-2)与α2-巨球蛋白(Alpha2-macroglobulin,α2-MG)水平影响.方法:选取2021年3月至2023年3月本院治疗的AECOPD病人84例,随机分为对照组和研究组,每组各42例.对照组采用雾化吸入布地奈德福莫特罗粉治疗;研究组在对照组基础上联合采用经鼻高流量氧气疗法.分析比较两组治疗4 w的临床疗效;采用肺功能测试仪测定治疗前及治疗后4 w肺功能相关指标;采用酶联免疫吸附法检测治疗前及治疗后4 w血清COX-2及α2-MG水平.结果:研究组治疗后的总有效率显著高于对照组(P<0.05).治疗后,两组的第1 s用力的具体呼气量情况(Forced expiratory volume in one second,FEV_(1))、FEV_(1)与预计值之间的比值百分数(FEV_(1)%)、FEV_(1)与用力肺活量(forced vital capacity,FVC)之间的具体比值(FEV_(1)/FVC)均比治疗前显著提升,且研究组的FEV_(1)%、FEV_(1)和FEV_(1)/FVC均比对照组显著提高(P<0.05).治疗后,两组血清的COX-2水平均较治疗前显著降低,α2-MG水平均较治疗前显著升高,且观察组的变化幅度显著大于对照组(P<0.05).结论:AECOPD病人在实施雾化吸入布地奈德福莫特罗结合经鼻高流量氧气可改善其肺功能,提高治疗效果,并降低COX-2、α2-MG水平.

次苷酸查尔酮对LPS诱导的RAW264.7细胞iNOS和COX-2表达的影响

补骨脂为豆科植物补骨脂(Psoraleacorylifolia L.)果实,具有温肾助阳、温脾止泻的功效[1],临床上被用于治疗皮肤病、肾炎、骨折等[2-3]。次苷酸查尔酮(corylifol A,CYA)是中药补骨脂的活性成分之一,是一种异黄酮类化合物,具有抗炎、抗菌、抗氧化、抗骨质疏松的特性[4-5]。有研究表明,CYA能明显抑制破骨细胞的分化,且能明显降低LPS诱导的巨噬细胞一氧化氮(NO)的生成[6-7]。

miRNA-137及其靶蛋白COX-2在扁平苔藓中的表达

目的 探讨环氧化酶-2(COX-2)及其靶向miRNA-137在扁平苔藓(LP)中的表达及潜在作用。方法采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)法检测40例LP皮损组织中miRNA-137表达情况,以35例正常皮肤组织作为对照。采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测COX-2在LP组织及正常皮肤组织中的表达水平。结果 与正常皮肤组织相比,LP组织样本COX-2表达明显升高(t=2.163,P=0.034),miRNA-137表达显著下调(t=2.122,P=0.037)。Spearman秩相关分析结果显示,LP组织中miRNA-137与COX-2的表达呈负相关(r=-0.244,P=0.035)。结论 miRNA-137表达下调导致其靶蛋白COX-2的表达上调,这可能在LP发病机制中发挥重要作用,miRNA-137可能会成为LP分子治疗的潜在工具。

黑逍遥散调控p38MAPK/ATF2/COX-2信号通路对阿尔茨海默病大鼠神经炎症的影响

目的 观察黑逍遥散对Aβ_(1-42)所致阿尔茨海默病(AD)大鼠学习记忆能力的影响,并从p38MAPK/ATF2/COX-2信号通路介导的炎症级联反应探讨其作用机制。方法 双侧海马注射1μL Aβ_(1-42)溶液复刻AD大鼠模型。筛选造模成功的大鼠50只,随机分为模型组、盐酸多奈哌齐组(0.5 mg/kg)和黑逍遥散低、中、高剂量组(4.25、8.5、17 g/kg),连续给药42 d。Morris水迷宫实验检测定位航行与空间探索能力,HE染色观察海马神经元病理结构改变,ELISA法检测海马组织Aβ_(1-42)、iNOS、PGE_(2)表达,RT-qPCR法检测海马组织p38、ATF2、COX-2 mRNA表达,Western blot法检测海马组织p-p38、p-ATF2、COX-2蛋白表达。结果 与模型组比较,黑逍遥散中、高剂量组和盐酸多奈哌齐组逃避潜伏期缩短(P<0.01),有效区域运动距离、目标象限滞留时间百分比增加(P<0.01),海马CA1区神经元排列有序,胞体清晰,凋亡细胞减少,海马组织Aβ_(1-42)、iNOS、PGE_(2)水平降低(P<0.05,P<0.01),p38、COX-2 mRNA表达降低(P<0.05,P<0.01),p38、p-p38、p-ATF2、COX-2蛋白表达降低(P<0.01)。结论 黑逍遥散可改善Aβ_(1-42)所致AD大鼠的认知能力,其机制可能与阻断p38MAPK/ATF2/COX-2信号通路传导,进而减轻炎症反应有关。

灵芝双向发酵液冻干粉抑制环氧化酶-2及抗氧化活性的研究

该研究通过液体深层发酵制备灵芝、灵芝-玉竹、灵芝-桦树茸、灵芝-人参以及灵芝-三七发酵液冻干粉,采用显色法结合紫外分光光度法测定发酵液冻干粉总糖、总皂苷及总多肽的含量,同时测定其对DPPH自由基及ABTS阳离子自由基清除能力以及环氧化酶-2(cyclooxygenase,COX-2)的抑制能力,评价其体外抗氧化及抑制COX-2的活性,以此筛选出抑制COX-2及抗氧化活性最优的灵芝发酵组合方式。研究结果表明,相较于灵芝发酵液冻干粉,灵芝-玉竹发酵液冻干粉的DPPH自由基及ABTS阳离子自由基清除能力及COX-2抑制能力最强,并且其总皂苷及总多肽的含量分别为灵芝发酵液冻干粉的1.26、1.27倍,含量显著升高(P<0.05)。因此该研究得出结论,灵芝-玉竹发酵液冻干粉抑制COX-2及抗氧化活性能力的显著增强,与其总皂苷及总多肽含量的显著升高存在一定的关系,通过添加玉竹进行灵芝发酵为最优的抑制COX-2及抗氧化发酵组合方式,这为灵芝双向发酵工业化生产提供了思路,也为进一步研究发酵液各个成分含量与其活性的关系奠定了基础。

孤儿核受体NR4A1通过NF-κB/COX-2对氧化应激诱导的血栓形成的保护作用及机制研究

目的 分析孤儿核受体NR4A1对氧化应激诱导的血栓形成的保护作用及机制。方法 选取健康SD大鼠30只,随机分为对照组、模型组和NR4A1组,每组10只。用FeCl_3构建颈动脉血栓大鼠模型,用NR4A1激动剂促进大鼠NR4A1的表达。称取3组小鼠的血栓重量;采用苏木精-伊红染色观察颈动脉组织切片的血栓形成情况;采用蛋白质印迹法检测核转录因子-κB(NF-κB)/环氧合酶-2(COX-2)信号轴相关蛋白表达水平;采用硝酸还原酶法检测NO水平;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测内皮素-1(ET-1)、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)、纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI-1)水平;采用放射免疫分析法测定血栓素(TX)B2、6-酮-前列腺素F1α(6-keto-PGF1α)水平。结果 对照组未形成血栓,NR4A1组大鼠血栓重量明显低于模型组,3组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。模型组与NR4A1组大鼠颈动脉组织NR4A1蛋白表达水平均低于对照组,且模型组低于NR4A1组,差异均有统计学意义(P<0.05);模型组与NR4A1组大鼠颈动脉组织p-NF-κB p65及COX-2蛋白表达水平均高于对照组,且模型组高于NR4A1组,差异均有统计学意义(P<0.05)。模型组、NR4A1组大鼠血清NO、eNOS、6-keto-PGF1α水平及NO/ET-1均低于对照组,且模型组均低于NR4A1组,差异均有统计学意义(P<0.05);模型组、NR4A1组大鼠血清ET-1、PAI-1、TXB2水平及TXB2/6-keto-PGF1α均高于对照组,且模型组均高于NR4A1组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 NR4A1对NF-κB/COX-2信号通路相关蛋白表达具有负向调控作用,进而减轻大鼠深静脉血栓模型中的血栓和炎症。

COX-2在骨骼肌纤维化中的机制探究

目的:探究环氧化酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)在骨骼肌纤维化机制中的作用及其与Wnt/β-catenin信号通路的关系。方法:72只20周雄性C57小鼠,随机分为正常组、模型组、干预组。采用定点击打法造骨骼肌损伤模型。正常组不进行造模,模型组和干预组进行造模处理。造模成功后,正常组、模型组给予每日1 mL生理盐水灌胃处理,干预组给予每日COX-2特异性抑制剂塞来昔布灌胃处理,剂量为100 mg/kg溶于1 mL生理盐水中。每组根据取材时间又分为3 d、7 d、14 d、21 d四个亚组(n=6)。采用免疫组织化学染色方法检测各组骨骼肌组织切片中COX-2和β-catenin的表达情况。结果:正常组小鼠骨骼肌组织中COX-2和β-catenin呈少量表达。与正常组相比,模型组COX-2和β-catenin表达均明显增加(P<0.01)。与模型组相比,干预组COX-2和β-catenin表达明显减少(P<0.01)。结论:COX-2在骨骼肌纤维化中可能通过干预β-catenin的表达来产生影响。

滇鸡血藤红色素的提取工艺优化及其抑制COX-2活性研究

目的:研究滇鸡血藤红色素的最佳提取条件,考察其基本性质与环氧化酶-2(COX-2)抑制活性,为滇鸡血藤的临床用药及相关制剂开发提供参考。方法:以吸光度为指标,采用单因素试验和正交试验对滇鸡血藤红色素提取工艺中的液料比、浸提时间、乙醇体积分数进行优化,确定滇鸡血藤红色素的最佳提取工艺,对提取得到的红色素光、热、pH稳定性进行考察,进一步采用COX-2抑制剂筛选试剂盒考察滇鸡血藤红色素对COX-2的抑制作用。结果:在50%乙醇、液料比为110、浸提12 h的条件下提取的滇鸡血藤红色素吸光度最大;其在室温避光、pH 1~9条件下有较好的稳定性;滇鸡血藤红色素对COX-2有较好的抑制作用,半数抑制浓度(IC50)为2.04 ng·mL^(-1)(生药质量浓度)。结论:明确了滇鸡血藤红色素的最佳提取条件和稳定性条件,可为滇鸡血藤资源的综合开发利用与临床用药研究提供参考。

基于COX-2/PGE2信号通路探讨温肾消癥汤减轻子宫内膜异位症小鼠疼痛的作用机制

[目的]基于环氧合酶-2/前列腺素E2(cyclooxyfenase-2/prostaglandin E2,COX-2/PGE2)信号通路,探讨温肾消癥汤对子宫内膜异位症(endometriosis,EMS)模型小鼠疼痛的影响及其作用机制。[方法]采用腹腔注射法建立EMS小鼠模型40只作为造模组,并随机将造模组分为EMS模型组(0.2 mL无菌蒸馏水)、温肾消癥汤组(0.2 mL温肾消癥汤浓缩液)、阳性对照组(0.2 mL阿司匹林混悬液),其他10只小鼠设为假手术组。造模21 d中,以Von Frey纤维丝实验与热板实验检测造模组与假手术组小鼠机械疼痛与热敏疼痛阈值。给药的21 d中,以Von Frey纤维丝实验与热板实验检测EMS模型组、温肾消癥汤组、阳性对照组小鼠机械疼痛与热敏疼痛阈值。给药21 d后,每天阴道涂片确定小鼠动情周期。在同一动情周期处死小鼠,并留取血清,腹腔冲洗液(peritoneal fluid,PF),内膜组织(在位、异位),丘脑,脊髓,背根神经节(dorsal root ganglion,DRG)。以酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)测定各样本中COX-2、PGE2、瞬时电位受体V1(transient receptor potential vanilloid 1,TRPV1)、钠电压门控通道α亚基11(sodium channel protein type 11 subunit alpha,SCN11A)含量。[结果]与假手术组比较,造模后小鼠足部与腹部痛阈均降低(P<0.05)。与EMS模型组比较,温肾消癥汤组小鼠给药后足部痛阈、腹部痛阈均提高(P<0.05)。与EMS模型组比较,温肾消癥汤组小鼠血清,在位内膜,PF,神经系统(丘脑、脊髓、DRG)中COX-2、PGE2,中枢神经系统(丘脑、脊髓)中TRPV1和外周神经系统(DRG)中SCN11A含量均降低(P<0.05)。与阳性对照组比较,温肾消癥汤组小鼠给药后血清、异位病灶、脊髓中PGE2含量均降低(P<0.05)。[结论]温肾消癥汤能够缓解子宫内膜异位症模型小鼠疼痛,其机制可能与抑制COX-2/PGE2信号通路的过度表达有关。