远志总皂苷对AD模型大鼠学习记忆及海马AchE、ChAT活性的影响

目的建立阿尔茨海默病(AD)的大鼠模型,并观察远志总皂苷对AD模型大鼠学习记忆及胆碱能系统的影响。方法将70只大鼠随机分为模型组,远志总皂苷高、中、低剂量组,盐酸多奈哌齐组,正常组和假手术组共7组,每组10只。采用双侧海马内一次性注射β-淀粉样多肽25-35片断(Aβ25-35)制作大鼠AD模型;连续给药5周后采用水迷宫检测各组大鼠的学习记忆能力;采用生化法检测各组大鼠脑组织匀浆中乙酰胆碱酯酶(AchE)、胆碱乙酰转移酶(ChAT)活性变化。结果与模型组相比,远志总皂苷干预治疗组大鼠进入盲端的次数明显减少、游泳时间明显缩短,同时脑内ChAT活性增强,AchE活性降低,差异均具有统计学意义(P<0.01、P<0.05)。结论远志总皂苷对AD模型大鼠的学习记忆能力减退具有改善作用,其作用机制可能与保护中枢胆碱能系统有关。

超声提取-分光光度法测定远志总皂苷的含量

目的:超声提取远志总皂苷,并用分光光度计进行总皂苷含量的测定。方法:超声提取远志总皂苷,以远志皂苷元为对照品,香草醛-冰醋酸-高氯酸为显色剂,采用分光光度法在585nm处测定远志总皂甙含量。结果:对照品在28～63μg范围内线性良好(r^2=0.9984),平均回收率为100.45%,RSD=1.59%(n=5)。超声提取和热回流提取的远志总皂苷含量分别为1.63%,1.50%。结论:超声提取法用时短,提取率高,能达到比传统回流法更理想的效果。分光光度法测定含量简便、快速、准确、可靠。

远志总皂苷对AD模型大鼠学习记忆及海马nAChRα7亚基的影响

目的观察远志总皂苷(TEN)对阿尔茨海默病(AD)模型大鼠学习记忆及烟碱型乙酰胆碱受体α7(nAChRα7)亚基的影响,探讨TEN对AD干预作用的机制。方法将雄性Wistar大鼠随机分为对照组、模型组、TEN低剂量组(12.5mg/mL)和TEN高剂量组(37.5mg/mL),每组8只。模型组予腹腔注射D-半乳糖(D-gal)致衰联合IBO损毁双侧基底前脑Meynert核建立AD模型。TEN低、高剂量组在建立AD模型的同时分别予12.5mg/mL、37.5mg/mL的TEN灌胃8周。对照组用等体积的生理盐水代替D-半乳糖(D-gal)和IBO注射。采用Morris水迷宫实验检测各组大鼠的逃避潜伏期(EL)、跨越原平台次数和原平台象限停留时间;用免疫组化法测各组大鼠海马区nAChRα7表达水平。结果与对照组比较,模型组EL延长、跨越原平台次数减少、原平台象限停留时间降低、海马区nAChRα7的表达水平减小(P<0.05);与模型组比较,TEN高、低剂量组EL缩短、跨越原平台次数增加、原平台象限停留时间延长、海马区nAChRα7的表达水平增高(P<0.05)。与TEN低剂量组比较,TEN高剂量组EL时间缩短(但实验第2天两组间比较无统计学差异)、跨越原平台次数增加、原平台象限停留时间延长、海马区nAChRα7表达水平均明显升高(P<0.05)。结论 TEN可显著提高AD模型大鼠海马区nAChRα7表达,这可能是TEN改善学习记忆和认知功能的机制之一。

远志总皂苷干预β-淀粉样蛋白致伤神经干细胞Caspase-3及Par-4的表达

背景:远志总皂苷具有良好的神经保护作用。目的:分析远志总皂苷对β-淀粉样蛋白致伤海马神经干细胞的保护作用及机制。方法:自昆明小鼠海马分离培养神经干细胞,取第3代神经干细胞,用含不同质量浓度远志总皂苷与β-淀粉样蛋白致伤体外培养的神经干细胞共孵育。结果:应用免疫组织化学法检测Caspase-3阳性神经干细胞,与对照组相比,远志总皂苷组Caspase-3阳性细胞率及Par-4的表达明显降低,差异具有显著性意义(P<0.05)。提示远志总皂苷能够降低β-淀粉样蛋白致伤神经干细胞中Caspase-3及Par-4的表达。

远志总皂苷增强鹅膏蕈氨酸诱导阿尔茨海默病大鼠的突触可塑性研究

目的观察远志提取物远志总皂苷(TEN)对D-半乳糖致衰鹅膏蕈氨酸(IBO)诱导阿尔茨海默病(AD)模型大鼠突触可塑性的影响,并探讨其可能机制。方法将雄性Wistar大鼠随机分为对照组、AD模型组及TEN高、低剂量组,每组8只。通过电生理实验测定各组大鼠长时程增强(LTP)的变化,用免疫组织化学方法测定海马CA1区神经元N-甲基-D-天冬氨酸受体2A亚基(NR2A)积分吸光度(IOD)值,间接观察其表达情况,并进行各组间比较。结果高频刺激(HFS)后1 min、30 min和60 min对照组LTP值为(203.17±7.468)%、(178.15±8.110)%和(164.17±7.026)%,AD模型组LTP值〔(168.63±10.809)%、(120.12±7.382)%和(102.88±2.357)%〕较对照组显著降低(均P<0.05)。TEN低剂量组LTP值为(177.67±14.038)%、(141.83±4.956)%和(121.17±4.792)%,TEN高剂量组LTP值为(192.00±2.449)%、(168.00±2.449)%和(141.75±9.251)%,均较AD模型组升高(P<0.05)。与对照组(30.12±3.45)比较,AD模型组IOD值(11.74±1.69)显著降低(P<0.05);与AD模型组比较,TEN组低剂量组、高剂量组IOD值(分别为20.78±2.66、25.86±2.98)均明显增高(P<0.05),且TEN高剂量组高于TEN低剂量组(P<0.05)。结论 TEN可能使海马CA1区LTP升高和NR2A表达增加,从而改善AD大鼠突触可塑性。

远志总皂苷对癫痫模型大鼠NMDA受体表达的影响

目的观察远志总皂苷(Tenuigenin,TEN)对癫痫模型大鼠N-甲基-D天门冬氨酸(NMDA)受体表达的影响,探讨TEN对癫痫继发认知障碍干预作用的机制。方法 32只雄性Wistar大鼠,随机分为对照组(8只)、模型组(12只)、远志总皂苷防治组(12只)。采用腹腔注射戊四氮(PTZ)溶液制作癫痫大鼠模型,远志总皂苷防治组在腹腔注射戊四氮的同时给予灌服远志总皂苷,对照组分别注射及灌服等剂量的生理盐水。采用免疫组化方法检测大鼠海马CA1区NMDA受体表达。结果模型组大鼠海马CA1区NMDA受体平均灰度值显著高于对照组,远志总皂苷防治组大鼠海马CA1区NMDA受体平均灰度值显著低于模型组。结论远志总皂苷可显著提高癫痫模型大鼠海马CA1区NMDA受体表达,这可能是其减轻癫痫继发认知障碍的部分机制。

远志总皂苷对神经干细胞向神经元分化的影响

目的:观察远志总皂苷对神经干细胞(NSCs)向神经元分化的影响。方法:分离、培养并鉴定新生大鼠海马区NSCs,分别添加终浓度5μg/mL、20μg/mL及100μg/mL的远志总皂苷进行诱导1 d或3 d。免疫细胞化学法检测神经元特异性烯醇化酶(NSE)阳性细胞。结果:原代与传代培养的细胞均可持续分裂增殖形成悬浮生长的神经球,经远志总皂苷诱导后1 d、3 d,NSE阳性神经元数量较未接受诱导的细胞明显升高(P<0.01)。结论:远志总皂苷对海马NSCs向神经元分化有一定的促进作用。

远志总皂苷大孔吸附树脂纯化工艺研究

目的:优选远志总皂苷大孔树脂纯化工艺。方法:在以细叶远志皂苷的纯度为指标,考察多种型号大孔树脂纯化远志总皂苷的吸附及洗脱条件。结果:HPD-100型大孔吸附树脂为最佳纯化远志总皂苷的大孔树脂。最佳纯化工艺为上样液细叶远志皂苷的质量浓度为0.5 g/ml,以蒸馏水3 BV、30%乙醇、70%乙醇各4 BV以1 BV/h速度依次洗脱,收集70%乙醇洗脱部位。结论:该法工艺可较好地纯化远志总皂苷且稳定可行,为新药研发提供了一定的依据。

吸附树脂纯化远志总皂苷的研究

目的:分析不同吸附树脂对远志总皂苷的纯化效果,为吸附树脂的筛选提供指导。方法:采用静态吸附与解吸实验对吸附树脂的纯化性能进行考察,运用紫外-分光光度法和高效液相色谱法分析树脂纯化后的解吸液中的总皂苷类成分的色谱变化情况。结果:D101和X-5型吸附树脂对远志总皂苷的吸附和解吸能力优于其他树脂,色谱法分析结果表明X-5型吸附树脂纯化后的解吸液的水解液,完整地保留了远志皂苷元标准品色谱图中的一系列吸收峰。结论:X-5型吸附树脂纯化远志皂苷的效果好。

二苯乙烯苷和远志总皂苷配伍对Aβ25-35诱导PC12细胞损伤的影响

目的探讨二苯乙烯苷(tetrahydroxy stilbene glycoside,TSG)和远志总皂苷(Tenuigenin,TEN)配伍对Aβ25-35诱导的PC12细胞损伤的影响。方法PC12细胞除空白组外运用Aβ25-35诱导建立阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)模型,被随机分成模型组、TSG(200 mmol/L)组、TEN组(100 mg/L)、TSG-TEN配伍组(TSG200 mmol/L+TEN100 mg/L)、多奈哌齐组(10μmol/L)。采用MTT比色法检测各组细胞存活率;取细胞上清液分别测各组的乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)含量及乙酰胆碱酯酶(AchE)、超氧化物歧化酶(SOD)活力;统计各组的细胞分化率。结果(1)细胞存活率的高低为:TSG-TEN组>TSG组>多奈哌齐组>TEN组(P<0.01);TSG组、TEN组、多奈哌齐组均低于TSG-TEN配伍组(P<0.01,P<0.05);(2)与模型组比较,TSG组、TEN组、TSG-TEN配伍组可降低LDH含量、MDA含量、抑制AchE活力及增强SOD活力(P<0.05)。且TSG-TEN配伍组对降低LDH含量、MDA含量、抑制AchE活力及增强SOD活力效应比TSG或TEN单用组效应更好(P<0.01);(3)PC12细胞的分化率高低为:TSG-TEN组>多奈哌齐组>TSG组>TEN组(P<0.01,P<0.05);TSG组、TEN组、多奈哌齐组均低于TSG-TEN配伍组(P<0.01,P<0.05)。结论TSG和TEN配伍对Aβ25-35诱导的PC12细胞损伤具有显著的协同保护作用,其作用机制可能与改善胆碱能系统、抗氧化应激、降低突触可塑性损伤有关,且TSG优于TEN。

复合酶法提取远志总皂苷的工艺研究

目的:研究酶法结合传统回流法提取远志总皂苷工艺条件。方法:利用可见分光光度法测定远志总皂苷含量;考察植物复合酶的酶解时间、酶解温度对传统提取工艺的强化效果;通过显微结构图和红外光谱图说明了复合酶法强化传统提取法的作用方式及提取物的结构。结果:酶用量为0.4%时,适宜酶解温度为55℃,最优酶解时间为0.5h。结论:复合酶法结合传统回流提取后,可提高远志总皂苷提取率、缩短提取时间、减少乙醇使用量,对于远志流浸膏的高效提取具有一定指导意义。

远志总皂苷对癫痫模型大鼠学习记忆及海马LTP的影响

目的观察远志总皂苷(TEN)对戊四氮(PTZ)点燃癫痫模型大鼠空间学习记忆能力及海马长时程增强(LTP)的影响。方法雄性Wister大鼠随机分为对照组、癫痫模型组、TEN组,利用水迷宫法观察各组大鼠的空间学习记忆能力,利用电生理学方法通过对高频刺激前后海马CA1区场兴奋性突触后电位(fEPSP)幅度比较检测大鼠海马LTP变化。结果与对照组相比较,癫痫模型组空间学习记忆能力显著下降,海马CA1区LTP受到显著抑制(P<0.05);TEN可改善上述指标的异常变化(P<0.05)。结论TEN可改善癫痫模型大鼠空间学习记忆能力及海马LTP的抑制。

远志总皂苷对AD模型大鼠海马nAChRα4及PSD-95表达的影响

目的:通过观察中药远志总皂苷(Tenuigenin,TEN)对阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)模型大鼠烟碱型乙酰胆碱受体α4亚基(nicotinic acetylcholine receptor subunit alpha-4,nAChRα4)和突触后致密蛋白95(postsynaptic density 95,PSD-95)表达的影响,旨在探讨TEN对AD干预作用的机制。方法:32只雄性Wistar大鼠随机分为对照组,模型组,TEN 12.5,37.5 mg.mL-1剂量组,应用D-半乳糖致衰老的基础上定向Meynert基底核损毁建立AD大鼠模型,TEN 12.5,37.5 mg.mL-1治疗组则在造模的同时用远志总皂苷灌胃(ig)治疗,采用免疫组化方法来检测大鼠海马CA1区nAChRα4及PSD-95的表达。结果:模型组大鼠海马CA1区nAChRα4及PSD-95平均灰度值显著高于对照组,平均光密度值显著降低(P<0.01);TEN 12.5,37.5 mg.mL-1剂量组大鼠海马nAChRα4及PSD-95平均灰度值显著低于模型组,两组平均光密度值均显著增高(P<0.05);且TEN 37.5 mg.mL-1剂量组的平均灰度值比TEN 12.5 mg.mL-1剂量组降低显著,平均光密度值增高显著(P<0.01)。结论:TEN可显著提高AD模型大鼠海马CA1区nAChRα4及PSD-95的表达,并具有剂量依赖性,这可能是其改善认知功能的部分机制。

远志总皂苷抗皮肤光老化作用

目的 研究远志总皂苷（Polygala total saponins,PTS）抗皮肤光老化作用。方法 采用体外清除羟自由基、超氧自由基、DPPH氧自由基等实验,考察远志总皂苷对氧自由基的影响;建立小鼠皮肤光老化模型,观察远志总皂苷对小鼠皮肤病理变化的影响。结果 在体外抗氧化实验中,远志总皂苷乳液在6.0、12.0mg/m L浓度具有显著的清除羟自由基（P〈0.05,P〈0.001）、超氧自由基（P〈0.01）和DPPH自由基的作用（P〈0.001）。在光老化实验中,B组（模型＋基质茶油）成功建立了小鼠皮肤光老化模型,与B组相比较,D组（照射前30min给药,模型＋PTS 6mg/m L剂量组）小鼠皮肤表皮致密增厚,弹力纤维排列均匀致密,胶原纤维显著增生,致密,分布均匀,未见炎性细胞浸润,治疗效果最为显著;G组（照射后30min给药,模型＋PTS 12mg/m L剂量组）小鼠皮肤表皮增厚,弹力纤维排列均匀,胶原纤维有一定增生,分布均匀,未见炎性细胞浸润,表明PTS有显著治疗效果。结论 远志总皂苷具有显著抗氧化活性及对抗光老化作用。

远志总皂苷对AD模型大鼠海马Ng及pCaMKⅡα表达的影响

目的观察远志总皂苷(TEN)对阿尔茨海默病(AD)模型大鼠海马CA1区神经颗粒素(Ng)以及磷酸化的钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱα亚基(pCaMKⅡα)表达的影响,探讨TEN防治AD的作用机制。方法将60只雄性Wistar大鼠随机分为对照组,模型组,TEN低剂量治疗组(12.5mg/ml)和TEN高剂量治疗组(37.5 mg/ml),每组15只,模型组予以腹腔注射D-半乳糖(D-gal)致衰并联合鹅膏覃氨酸(IBO)定向Meynert基底核损毁法建立AD大鼠模型,TEN低、高剂量治疗组则在造模的同时TEN灌胃治疗8w,对照组则用等体积的生理盐水代替D-gal和IBO。采用免疫组化方法来检测大鼠海马CA1区Ng及pCaMKⅡα的表达。结果模型组大鼠海马CA1区Ng及pCaMKⅡα平均吸光度值比对照组显著降低(P<0.01);TEN治疗组两组平均吸光度值均较模型组显著增高(P<0.01);且TEN高剂量治疗组(37.5 mg/ml)的平均吸光度值比TEN低剂量治疗组(12.5mg/ml)显著增高(P<0.01)。结论 TEN可显著升高AD模型大鼠海马CA1区Ng及pCaMKⅡα的表达,且具有剂量依赖性。

远志总皂苷对癫痫模型大鼠nAChRɑ7亚基表达的影响

目的观察远志总皂苷(Tenuigenin,TEN)对癫痫模型大鼠海马CA1区烟碱型乙酰胆碱受体ɑ7(nAChRɑ7)亚基表达的影响,探讨TEN对癫痫继发认知障碍改善的可能机制。方法雄性Wistar大鼠随机分为对照组、癫痫模型组和TEN防治组3组。采用免疫组化方法对各组大鼠海马CA1区nAChRɑ7表达进行检测。结果与对照组相比,癫痫模型组大鼠海马CA1区nAChRɑ7表达减少(P<0.05),与癫痫模型组相比,TEN防治组大鼠海马CA1区nAChRɑ7表达明显升高(P<0.05)。结论TEN能够显著提高癫痫模型大鼠海马CA1区nAChRɑ7表达,这可能是其改善癫痫继发认知障碍的部分机制。

远志总皂苷的提取分离及鉴定

目的:研究远志皂苷的提取分离及鉴定方法。方法:采用萃取及柱层析技术对远志皂苷进行分离,并采用液质联用技术对其进行鉴定。结果:通过此方法获得的远志皂苷含量在85%以上。结论:此方法易制得远志皂苷且测定方法简单、迅速、灵敏度高。

大孔吸附树脂吸附远志总皂苷的吸附热力学与动力学研究

目的研究大孔吸附树脂吸附远志总皂苷这一过程的吸附热力学和吸附动力学特征。方法以香草醛-冰醋酸-高氯酸为显色剂,采用可见光分光光度法测定了不同温度时的吸附等温线和不同起始浓度下的吸附动力学曲线。结果吸附平衡数据符合Freund lich方程、Lagergren一级速率方程和Dumwald-W agner颗粒内扩散方程,相关性均良好。结论该吸附过程为吸热过程,自发进行,高温有利于吸附,吸附速率主要由颗粒内扩散控制。

单扫描极谱法测定远志中总皂苷元的含量

目的:建立单扫描极谱法测定中药材远志中总皂苷元含量的新方法。方法:采用单扫描示波极谱法,在硼砂+Cd^(2+)介质中,远志皂苷元在-680 mV(vs.SCE)产生一波形较好的二阶倒数极谱波。结果:该二阶倒数极谱波峰电流 ip″与远志总皂苷元浓度分别在0.57～5.13 mg·L^(-1),6.27～10.83 mg·L^(-1)范围呈良好线性关系。检出限为0.342 mg·L^(-1)。结论:所建立的电化学分析方法灵敏、简便、快速、经济、重现性好,可用于远志药材中总皂苷元的含量测定。

远志总皂苷对海马神经干细胞定向分化的作用及对Mash1表达的影响

目的观察远志总皂苷（TEN）对体外培养海马神经干细胞向胆碱能神经元定向分化的作用，并进一步分析其对神经干细胞Mash1表达的影响。方法分离新生24h内昆明小鼠海马，悬浮培养神经干细胞，取第3代神经干细胞进行分化诱导。实验分4组：空白对照组、5mg／LTEN组、20mg／LTEN组、100mg／LTEN组。应用免疫组织化学法检测神经干细胞中神经元特异性烯醇化酶（NSE）及胆碱乙酰转移酶（CHAT）阳性细胞比率；采用RT-PCR半定量法检测各组神经干细胞Mash1的表达。结果免疫组化结果显示：与对照组比较．TEN组神经干细胞向神经元及胆碱能神经元分化的比率明显升高，以20mg／L剂量最明显，差异均有统计学意义（P〈0．05）；20mg／L组Mash1的表达（0．9426±0．07286）亦明显高于对照组（0.7141±0．04016），差异具有统计学意义（P〈0．05）。结论TEN能够促进体外培养的海马神经干细胞向神经元及胆碱能神经元定向分化，能够促进神经于细胞中Mash1的表达。