甘蔗SPSⅢ基因启动子5’侧翼缺失的GUS表达载体构建

蔗糖磷酸合成酶是调节植物蔗糖合成的关键酶之一。本研究根据该段序列上预测的顺式作用元件将SPSⅢ5'侧翼序列不同长度的片段与GUS基因融合,成功构建了3个缺失表达载体,为进一步的甘蔗SPSⅢ启动子活性区域鉴定提供基础。

猪Dlx5基因多态性及其与猪体尺和胸椎数的关系

为探讨猪远端缺失基因5(distal-less homeobox 5,Dlx5)的多态性、群体分布特性及其与体尺和胸椎数的关系,采用PCR-RFLP方法检测了猪Dlx5基因g.394C>T位点在6个中外猪品种中的多态性分布,并分析了该位点与猪体尺和胸椎数的关系。检测结果表明,经HhaⅠ酶切后在6个猪品种群体均发现了CC、CT和TT 3种基因型,其中C等位基因在莱芜黑猪中为优势等位基因,而T等位基因在里岔黑猪、鲁莱黑猪、杜洛克猪、大约克猪和长白猪中占优势。在该多态性位点,莱芜黑猪、里岔黑猪、鲁莱黑猪、杜洛克和长白猪群体均处于哈代—温伯格平衡(P>0.05),而大约克猪群体偏离平衡状态(P<0.05);基因型在群体间的分布差异极显著(P<0.01)。群体遗传特性分析表明,有效等位基因数在1.254～1.991之间;杜洛克猪的多态信息含量为0.182,属于低度多态,其余品种均在0.254～0.374之间,属于中度多态。关联分析结果表明,该多态性位点对莱芜黑猪体长、体高、屠前活重、腹围、胸围、腿臀围和胸椎数以及里岔黑猪胸椎数的影响均不显著(P>0.05)。Dlx5基因g.394C>T位点在猪群中存在多态,基因型分布在莱芜黑猪与其他猪种间不同,与猪体尺和胸椎数无显著关联。

微RNA-141靶向Dlx5基因对骨形态发生蛋白2诱导人主动脉瓣钙化的调控作用

目的探讨miRNA-141对骨形态发生蛋白2(BMP-2)诱导人主动脉瓣钙化的调控作用及机制。方法收集24例人退行性主动脉瓣,用qRT-PCR及蛋白质印迹法检测miRNA-141和BMP-2的mRNA及蛋白表达水平。在人主动脉瓣膜间质细胞(HAVIC)中上/下调miRNA-141表达,通过Von Kossa染色比较细胞钙化,并比较远端缺失同源盒5(Dlx5)mRNA和BMP-2蛋白表达;双荧光素酶报告基因实验验证Dlx5是否为miRNA-141的靶基因。在主动脉瓣钙化小鼠和Dlx5基因敲除主动脉瓣钙化小鼠中,上/下调miRNA-141表达,通过Von Kossa染色比较主动脉瓣钙化,并检测BMP-2蛋白表达。结果与正常主动脉瓣膜组织相比,人退行性主动脉瓣miRNA-141的表达降低(1.00±0.02 vs 0.35±0.06,P=0.01),BMP-2的mRNA及蛋白表达增加(P均=0.01)。在HAVIC中,上调/下调miRNA-141可抑制/促进钙化(P=0.02或P=0.01),并降低/升高Dlx5 mRNA表达(P均=0.01)及BMP-2蛋白的表达(P=0.02或P=0.01)。双荧光素酶报告基因实验验证了Dlx5为miRNA-141的靶基因。上调/下调主动脉瓣钙化小鼠miRNA-141可抑制/促进钙化(P均=0.01),并降低/升高Dlx5、BMP-2 mRNA及蛋白的表达(P均<0.05);Dlx5基因敲除小鼠中,上/下调miRNA-141不影响瓣膜钙化和BMP-2的表达。结论miRNA-141靶向Dlx5基因抑制BMP-2蛋白诱导的人主动脉瓣钙化。

健骨颗粒对去卵巢小鼠miR-141及成骨基因Dlx5/Msx2/Runx2的影响

目的:观察健骨颗粒对去卵巢小鼠骨组织中miR-141、Dlx5、Msx2、Runx2表达的影响,探讨健骨颗粒防治绝经后骨质疏松的作用机制。方法:30只C57小鼠按照随机数字表法分为假手术组、生理盐水组和健骨颗粒组,每组10只。假手术组只切除卵巢周围脂肪,不切除卵巢;生理盐水组和健骨颗粒组均手术切除双侧卵巢,并分别灌服生理盐水和健骨颗粒。干预8周后处死取材,采用micro CT观察胫骨形态并计量;realtime PCR检测骨组织miR-141、Dlx5、Msx2、Runx2等mRNA的表达;Western blot法检测骨组织Dlx5、Msx2、Runx2等蛋白含量。结果:与生理盐水组比较,健骨颗粒组骨小梁数量、宽度、长度、形态和分布部分恢复,密度和联结性有所增加,仍无法恢复到假手术组水平,但皮质骨面积增加,骨髓腔缩小,基本恢复到假手术组水平;骨矿物质含量(BMC)、骨密度(BMD)、骨体积分数(BV/TV)、骨表面积和骨组织体积比值(BS/TV)、骨小梁数量(Tb.N)均明显升高;骨小梁分离度(Tb.Sp)、结构模型指数(SMI)指标均明显降低;小鼠骨组织miR-141、Msx2相对含量明显降低;骨组织Runx2、Dlx5相对含量明显升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:健骨颗粒可以有效降低miR-141的表达,并通过影响骨髓间充质干细胞(BMSCs)成骨分化BMP信号通路Dlx5/Msx2/Runx2信号轴来提高Dlx5、Runx2等成骨关键因子的表达,提高成骨能力,达到预防和治疗骨质疏松的目的。

5p缺失综合征合并11q远端三体综合征胎儿一例

孕妇女,37岁,G2P1.第1胎足月顺产一女,已10岁,表型正常。现第2次怀孕,因年龄风险于孕19周来我院行产前诊断。孕妇平素体健,月经规则。孕期无有毒有害物接触史。夫妇非近亲结婚,丈夫无不良嗜好,双方家族无遗传病史。

SD大鼠下颌第一磨牙DLX5、RUNX2、OSX、DSP的表达分析

目的:观察远端缺失同源盒5(distal-less homeobox5,DLX5)、核心结合蛋白因子2(runt-related transcription factor-2,RUNX2)、成骨细胞特异性转录因子Osterix(OSX)和牙本质涎蛋白(dentin sialoprotein,DSP)在出生后SD大鼠下颌第一磨牙不同发育阶段的表达情况,探讨其在SD大鼠出生后下颌第一磨牙发育矿化的作用机制。方法:采用免疫组化法分析出生后1、7、14、28d SD大鼠下颌第一磨牙中DLX5、RUNX2、OSX、DSP的表达分布。结果:DLX5在出生后1、7、14d中均有表达,表达量呈现出上升趋势,但是在28d时不表达;RUNX2在出生后1、7、14、28d均表达,表达量在7d时呈现最低;OSX在出生后1、7、14、28d均有表达,表达量在14d时呈现最低;DSP在出生后1、7、14、28d均有表达,表达量呈上升趋势。结论:DLX5、RUNX2、OSX、DSP在大鼠出生后各阶段的表达量不同,具有时空特异性,表明DLX5、RUNX2、OSX、DSP可能对出生后SD大鼠下颌第一磨牙发育及矿化具有一定的调控作用。

唑来膦酸对大鼠不同胚胎来源骨骼Dlx-5和Msx-1表达的影响

目的:探讨唑来膦酸对远中缺失同源盒基因5(Distal-Less homeobox 5,Dlx-5)和肌节同源盒基因1(Msh homeobox 1,Msx-1)在大鼠下颌骨和髂骨表达水平的影响,以期为进一步研究双膦酸盐类药物导致颌骨骨坏死的致病机制提供理论基础。方法:选用24只8周龄雌性SD大鼠,实验组腹腔注射唑来膦酸持续12周,对照组腹腔注射等量生理盐水12周,采集下颌骨以及髂骨样本,应用免疫组化及RT-PCR检测大鼠上述两个部位Dlx-5和Msx-1在蛋白水平和基因水平的表达情况。结果:免疫组化及RT-PCR结果显示实验组中下颌骨Dlx-5的蛋白和基因表达水平均高于对照组(P<0.01),髂骨Dlx-5的蛋白和基因表达水平低于对照组(P<0.05),实验组中下颌骨和髂骨Msx-1的蛋白和基因表达水平均低于对照组(P<0.01)。对照组中与髂骨比较,下颌骨的Dlx-5基因表达水平降低(P<0.01),下颌骨的Msx-1基因表达水平升高(P<0.01)。结论:在唑来膦酸作用下,大鼠下颌骨和髂骨Dlx-5和Msx-1的表达水平存在差异性变化。在一定程度上解释了双膦酸盐类药物导致颌骨骨坏死特异性发生于颌骨的原因。

周期性张应力作用下人牙周膜干细胞Dlx5和Msx2表达的变化

目的探讨周期性张应力对人牙周膜干细胞(hPDLSCs)远中缺失同源盒基因5(Dlx5)和肌节同源盒基因2(Msx2)表达变化的影响。方法采用四点弯曲加力装置对hPDLSCs施加3000μstrain的周期性张应力刺激(3h、6h、12h、24h),通过实时定量RT-PCR方法,对hPDLSCs表达的Dlx5、Msx2和Dlx5/Msx2进行定量研究。结果在周期性张应力作用下,hPDLSCs Msx2mRNA的表达随着时间的延长逐步下调,Dlx5mRNA随着时间的延长而逐步上调,Dlx5/Msx2逐步上调。结论 Dlx5和Msx2都对张压应力作用敏感但变化效应不一致:周期性张应力可以促进Dlx5mRNA的表达,抑制Msx2mRNA的表达。

猪速激肽3基因启动子活性及其表达调控的初步研究

为了确定猪速激肽3基因（tachykinin3,TAC3）核心启动子区域,探索作用于该区域的转录因子对TAC3的调控作用,以猪耳组织DNA为模板,PCR扩增TAC3基因5＇端不同长度缺失片段,并构建至p GL3-basic载体,转染猪卵巢颗粒细胞,通过双荧光素酶活性分析确定核心启动子区域,染色质免疫共沉淀技术（Ch IP）验证转录因子与基因启动子区的作用,构建转录因子超表达载体和小干扰RNA（siRNA）转染至猪卵巢颗粒细胞,qRT-PCR检测TAC3基因mRNA表达变化。结果显示：成功构建了TAC3基因5＇端不同长度缺失片段,通过双荧光素酶报告系统分析发现,-1 310/-544区域为TAC3基因的核心启动子区,-2 486/-1 633区域可能存在负向调控元件,-1 310/-544区域可能存在正向调控元件。Ch IP检测发现转录因子C/EBPβ和YY1分别结合在TAC3基因的-653/-639和-873/-856区域;超表达C/EBPβ和YY1后,TAC3基因启动子活性显著升高（P〈0.05）、mRNA表达水平显著上调（P〈0.01）;干扰C/EBPβ后,TAC3基因mRNA表达水平显著下调（P〈0.01）;干扰YY1后,TAC3基因启动子活性显著降低（P〈0.05）。结果表明：转录因子C/EBPβ、YY1结合在TAC3基因的核心启动子区域,促进TAC3基因的转录活性。