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2种PCR方法扩增盐藻肌动蛋白基因3’旁侧序列比较
被引量:
6
1
作者
姜国忠
谢华
+2 位作者
郭玉忠
范天黎
薛乐勋
《郑州大学学报(医学版)》
CAS
北大核心
2004年第1期41-44,共4页
目的 :比较扩增盐藻肌动蛋白基因 3’旁侧序列的 2种PCR方法。方法 :用pvuⅡ、EcoRⅤ和StuⅠ 3种限制性内切酶消化盐藻基因组DNA后 ,供 2种PCR用 ,一种是连接介导法PCR(LMPCR) ,与用人工合成的适配子相连并用适配子引物和盐藻肌动蛋白...
目的 :比较扩增盐藻肌动蛋白基因 3’旁侧序列的 2种PCR方法。方法 :用pvuⅡ、EcoRⅤ和StuⅠ 3种限制性内切酶消化盐藻基因组DNA后 ,供 2种PCR用 ,一种是连接介导法PCR(LMPCR) ,与用人工合成的适配子相连并用适配子引物和盐藻肌动蛋白基因特异引物扩增未知序列 ;另一种是反向PCR(IPCR) ,酶切后的DNA自身环化做模板 ,用 2对基因特异引物反向扩增。结果 :2轮PCR后 ,LMPCR中得到大量的非特异扩增产物 ,测序结果发现许多产物是由适配子引物AP2单独扩增引起。而反向PCR在得到pvuⅡ和StuⅠ消化的自连文库中扩增得到 2 .5kb特异产物 ,经测序发现 ,片段两侧为基因特异引物 ,部分序列与已知序列相一致。Southern也进一步证实了IPCR扩增片段来源于盐藻基因组DNA。结论 :IPCR技术在克隆基因旁侧序列时优于LMPCR方法。
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关键词
反向
pcr
连接介导法pcr
盐藻
肌动蛋白
旁侧序列cDNA
简并引物
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职称材料
LPA法克隆嗜盐菌Halobacterium species xz515古紫质基因(英文)
2
作者
王奕然
洪洁
+3 位作者
明明
丁建东
李庆国
黄伟达
《复旦学报(自然科学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2003年第4期576-583,共8页
Halobacteriumspeciesxz515是从中国西藏分离到的嗜盐菌,所含古紫质(古细菌视紫红质的简称命名为AR4)具有与其他已知菌视紫红质相反的质子释放和吸收的顺序而引起重视.连接反应介导的PCR扩增法(LPA)是一种克隆部分序列已知的基因的新型...
Halobacteriumspeciesxz515是从中国西藏分离到的嗜盐菌,所含古紫质(古细菌视紫红质的简称命名为AR4)具有与其他已知菌视紫红质相反的质子释放和吸收的顺序而引起重视.连接反应介导的PCR扩增法(LPA)是一种克隆部分序列已知的基因的新型克隆方法.LPA法利用"酶切-连接-PCR"之组合,首先选定一组限制性内切酶,各自单独地酶切细菌总DNA样品,然后酶切产物分别与相应的寡聚核苷酸片段接头连接.连接液混合起来,作为扩增未知序列DNA的模板.通过这种方法,克隆到了包括完整AR4基因开放阅读框和0.4kb上游调控区域的总长度1.3kb的DNA片段.实验结果表明LPA法可以代替传统的构建基因组DNA文库的方法,可以快速有效地获得目标基因相关的序列.
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关键词
克隆
古紫质
连接
反应
介导
的
pcr
扩增
法
接头
半嵌套式
pcr
原文传递
题名
2种PCR方法扩增盐藻肌动蛋白基因3’旁侧序列比较
被引量:
6
1
作者
姜国忠
谢华
郭玉忠
范天黎
薛乐勋
机构
郑州大学细胞生物学研究室
出处
《郑州大学学报(医学版)》
CAS
北大核心
2004年第1期41-44,共4页
基金
河南省重大科技攻关基金资助项目 0 12 2 0 3 2 5 0 0
河南省杰出人才创新基金资助项目 0 2 2 10 0 190 0
文摘
目的 :比较扩增盐藻肌动蛋白基因 3’旁侧序列的 2种PCR方法。方法 :用pvuⅡ、EcoRⅤ和StuⅠ 3种限制性内切酶消化盐藻基因组DNA后 ,供 2种PCR用 ,一种是连接介导法PCR(LMPCR) ,与用人工合成的适配子相连并用适配子引物和盐藻肌动蛋白基因特异引物扩增未知序列 ;另一种是反向PCR(IPCR) ,酶切后的DNA自身环化做模板 ,用 2对基因特异引物反向扩增。结果 :2轮PCR后 ,LMPCR中得到大量的非特异扩增产物 ,测序结果发现许多产物是由适配子引物AP2单独扩增引起。而反向PCR在得到pvuⅡ和StuⅠ消化的自连文库中扩增得到 2 .5kb特异产物 ,经测序发现 ,片段两侧为基因特异引物 ,部分序列与已知序列相一致。Southern也进一步证实了IPCR扩增片段来源于盐藻基因组DNA。结论 :IPCR技术在克隆基因旁侧序列时优于LMPCR方法。
关键词
反向
pcr
连接介导法pcr
盐藻
肌动蛋白
旁侧序列cDNA
简并引物
Keywords
inverse
pcr
(I
pcr
)
ligation-mediated
pcr
(LM
pcr
)
Dunaliella salina
Genome walking
Actin Flanking sequences
分类号
Q754 [生物学—分子生物学]
下载PDF
职称材料
题名
LPA法克隆嗜盐菌Halobacterium species xz515古紫质基因(英文)
2
作者
王奕然
洪洁
明明
丁建东
李庆国
黄伟达
机构
复旦大学生命科学学院生物化学系
复旦大学高分子科学系
复旦大学生命科学学院生理学和生物物理学系
出处
《复旦学报(自然科学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2003年第4期576-583,共8页
文摘
Halobacteriumspeciesxz515是从中国西藏分离到的嗜盐菌,所含古紫质(古细菌视紫红质的简称命名为AR4)具有与其他已知菌视紫红质相反的质子释放和吸收的顺序而引起重视.连接反应介导的PCR扩增法(LPA)是一种克隆部分序列已知的基因的新型克隆方法.LPA法利用"酶切-连接-PCR"之组合,首先选定一组限制性内切酶,各自单独地酶切细菌总DNA样品,然后酶切产物分别与相应的寡聚核苷酸片段接头连接.连接液混合起来,作为扩增未知序列DNA的模板.通过这种方法,克隆到了包括完整AR4基因开放阅读框和0.4kb上游调控区域的总长度1.3kb的DNA片段.实验结果表明LPA法可以代替传统的构建基因组DNA文库的方法,可以快速有效地获得目标基因相关的序列.
关键词
克隆
古紫质
连接
反应
介导
的
pcr
扩增
法
接头
半嵌套式
pcr
Keywords
cloning
archaerhodopsin
ligation-mediated
pcr
amplification(LPA)
adapter
semi-nested
pcr
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
2种PCR方法扩增盐藻肌动蛋白基因3’旁侧序列比较
姜国忠
谢华
郭玉忠
范天黎
薛乐勋
《郑州大学学报(医学版)》
CAS
北大核心
2004
6
下载PDF
职称材料
2
LPA法克隆嗜盐菌Halobacterium species xz515古紫质基因(英文)
王奕然
洪洁
明明
丁建东
李庆国
黄伟达
《复旦学报(自然科学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2003
0
原文传递
已选择
0
条
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