缝隙连接蛋白43经典与非经典作用在疾病治疗中的潜在价值

背景:缝隙连接蛋白43在维持组织代谢稳态平衡中发挥着重要作用,传统观点认为它参与了缝隙连接过程,为细胞与细胞之间建立直接的物质信号交换通道奠定结构基础。而近年来研究对于其独特的半通道作用提出了新的看法,并发现了其亚细胞定位、自身片段等对于细胞生理活动及病理过程的重要意义。目的:综述数据库中相关文献,系统性总结缝隙连接蛋白43分子特征及在多种细胞表达的研究进展,重点阐述通道依赖性与非通道依赖性缝隙连接蛋白43的生理与病理作用,并探讨其在疾病治疗中的潜在价值。方法:分别设置“gap junction,connexin 43(Cx43),hemichannel,channel-dependent Cx43,channel-independent Cx43,extracellular vesicles(EVs),mitochondria,GJA1-20k”为英文关键词,以“缝隙连接,缝隙连接蛋白43,半通道,通道依赖性Cx43,非通道依赖性Cx43,线粒体,细胞外囊泡,GJA1-20k”为中文关键词,分别在PubMed数据库及中国知网数据库进行文献检索,最终共入选81篇文献进行综述分析。结果与结论:(1)缝隙连接蛋白43的经典作用即构成缝隙连接通道,通道依赖性缝隙连接蛋白43主要可通过直接构成缝隙连接通道参与组织器官的生理或病理过程,应充分关注其结构和功能的完整性,而黏附是缝隙连接的重要特性,与屏障障碍类疾病密切相关。(2)缝隙连接蛋白43的非经典作用即非缝隙连接通道依赖性作用,缝隙连接蛋白43六聚体目前被发现定位于质膜、线粒体内膜和细胞外囊泡表面等结构,参与炎性疾病的正向促炎机制、线粒体功能代谢和细胞外囊泡的靶向摄取等,选择性截短片段则参与全长连接蛋白43靶向转运至胞内各结构域过程,并且通过促使线粒体周围肌动蛋白聚合,调控线粒体稳态。(3)以上两种作用为开发靶向治疗药物及基于组织工程技术的治疗手段中种子细胞转化机制等问题的解决提供了新思路,但现存的一些原始研究常不能全面考虑不同形式缝隙连接蛋白43的相互作用,从而混杂地描述了其总体特征,使得研究结果产生偏差。(4)未来研究需要系统地构架不同形式存在的缝隙连接蛋白43的生理特性及在各疾病中的潜在机制,为缝隙连接蛋白43完整性机制探索及多疾病的诊断和治疗提供参考依据。

连接蛋白43半通道介导NLRP3炎症小体激活在脑缺血中的作用

缝隙连接蛋白在脑缺血后的神经炎症扩散中发挥重要作用。连接蛋白43(connexin 43,Cx43)作为中枢神经系统中主要的连接蛋白,通常以寡聚形式形成六聚体的半通道,与相邻细胞上的半通道对接,形成缝隙连接通道。在正常生理条件下,细胞表面的半通道开放维持在正常生理水平;然而,在脑缺血的过程中,Cx43半通道的过度开放导致了大量的离子(Na^(+)、Cl^(−)、Ca^(2+)、K^(+))、谷氨酸、天冬氨酸和三磷酸腺苷(ATP)等物质的释放,引起相邻细胞功能紊乱,从而加重神经细胞的损伤。此外,Cx43半通道的开放还诱导炎症因子的释放,这与脑缺血后NLRP3炎症小体的激活密切相关。因此,通过调控Cx43半通道能够缓解脑缺血后神经炎症,进而减轻脑缺血损伤。本文重点综述了Cx43半通道蛋白与NLRP3炎症小体激活的关系,以及其在脑缺血中的作用,旨在为脑缺血的治疗提供新的思路和方法。

间隙连接蛋白43与呼吸系统疾病相关性的研究进展

间隙连接蛋白43(Cx43)与各系统性疾病的相关性已成为近年研究的热点。Cx43一直是多学科交叉研究的核心,广泛参与疾病的病理生理过程。Cx43通过与不同通路中的不同受体产生关联影响疾病的发生、进展及结局。目前的研究主要集中于完善单个疾病中Cx43的具体作用机制,但其与呼吸系统疾病的相关性仍需进一步研究阐明。未来明确Cx43与新型冠状病毒肺炎、肺癌等呼吸系统疾病的关系,可以为相关疾病的治疗提供新思路。

缝隙连接蛋白43在阿尔茨海默病中的研究进展

星型胶质细胞的功能异常与多种神经退行性疾病的发生发展关系密切,缝隙连接的异常是其中重要的机制之一。缝隙连接主要是由缝隙连接蛋白(connexin,Cx)构成,是相邻细胞间代谢和离子耦合以及电传递的主要结构。Cx43和Cx30是在脑中含量最多的Cx亚型,其中又以Cx43为主。Cx43在脑中含量或分布与阿尔兹海默病的发生发展关系密切。本文就以Cx43与阿尔兹海默病的关系进行综述。

抑制连接蛋白43介导半通道活性促进脂多糖诱导的人牙髓细胞成牙本质分化

目的:探讨连接蛋白43(connexin 43,Cx43)在脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的人牙髓细胞(human dental pulp cells,hDPCs)成牙本质分化过程中的作用和机制。方法:建立SD大鼠上颌第一磨牙损伤模型,免疫荧光(im munofluorescence,IF)染色检测Cx43在牙髓组织损伤后修复中的表达模式变化。分别采用0、1、10、100和1 000 ng/mL LPS刺激hDPCs 6 h,筛选最适浓度,随后抑制和过表达hDPCs中Cx43的表达。实时定量PCR(qRT-PCR)及免疫印迹法检测Cx43和成牙本质分化相关因子牙本质涎磷蛋白(dentin sialophosphoprotein,DSPP)、牙本质基质蛋白1(dental matrix protein-1,DMP-1)、成骨相关转录因子(osterix,Osx)表达及细胞外信号调节激酶(extracellular signalregulated kinase,ERK)活性变化。进一步对hDPCs施以特异性Cx43通道抑制剂,检测Cx43介导的通道活性在hDPCs成牙本质分化中的作用,初步探讨Cx43调节LPS诱导的hDPCs成牙本质分化的作用和机制。采用SPSS 26.0软件包对数据进行统计学处理。结果:IF结果显示,在健康牙髓组织中,Cx43主要表达于成牙本质细胞层,牙损伤3~24 h,Cx43表达减弱,随后逐渐上调,直至正常水平;损伤后3天~2周,表达呈下调趋势,并且表达于成牙本质细胞层和固有牙髓中。以10 ng/mL LPS刺激hDPCs 6 h,可显著上调DSPP的mRNA表达(P<0.01)。抑制Cx43,可显著上调hDPCs内LPS诱导的DSPP、DMP-1和Osx mRNA表达(P<0.05);过表达Cx43,则显著抑制LPS诱导的成牙本质分化相关因子表达(P<0.01)和DSPP荧光强度。以10 ng/mL LPS激活hDPCs内ERK信号,过表达Cx43可显著减弱LPS诱导的ERK信号活性(P<0.01)。抑制Cx43介导的半通道,促进LPS诱导的hDPCs成牙本质分化相关因子mRNA表达和ERK信号活性(P<0.05);而阻断Cx43介导的细胞间通道,则抑制成牙本质分化。结论:Cx43参与调控牙髓组织的损伤后修复,并且其表达整体呈下调趋势;抑制Cx43或阻断HC,可促进LPS诱导的ERK信号活性和hDPCs成牙本质分化。

老年结肠癌患者癌组织中COX-2、FOXA1和Cx43蛋白表达及与病理特征的关系

目的探讨老年结肠癌患者癌组织中环氧化酶(COX)-2、叉头盒蛋白(FOX)A1和缝隙连接蛋白(Cx)43蛋白表达及与病理特征的关系。方法选择结肠癌根治术切除标本及癌旁组织157例,采用免疫组化法测定COX-2、FOXA1和Cx43蛋白表达并比较癌组织与癌旁组织的差异;比较不同病理特征COX-2、FOXA1、Cx43蛋白表达。结果癌组织COX-2、FOXA1蛋白阳性率显著高于癌旁组织,Cx43蛋白阳性率显著低于癌旁组织(P<0.05)。不同性别、肿瘤直径和分化程度COX-2、FOXA1、Cx43蛋白阳性率比较无显著差异(P>0.05);不同TNM分期、淋巴结转移、浸润深度FOXA1、Cx43蛋白阳性率差异有统计学意义(P<0.05)。结论老年结肠癌患者癌组织中COX-2和FOXA1高表达,而Cx43蛋白低表达,且与TNM分期、淋巴结转移和浸润深度密切相关。

模拟失重下缝隙连接蛋白43对血管平滑肌细胞增殖与凋亡的影响

目的探究模拟失重下缝隙连接蛋白43(Cx43)对血管平滑肌细胞增殖及凋亡的影响。方法将人主动脉平滑肌细胞(HASMCs)作为研究对象,分为正常重力组(Con组)、模拟失重组(SMG组),并建立细胞模拟失重模型。两组细胞培养48 h后采用qRT-PCR和Western blotting检测HASMCs中Cx43的表达变化情况;加入缝隙连接蛋白抑制剂18-α-甘草次酸(18α-GA)后,两组再分成Con组、正常重力加抑制剂组、SMG组、模拟失重加抑制剂组(SMG+inhibitor组)。采用Western blotting检测模拟失重对HASMCs中的增殖相关蛋白增殖细胞核抗原(PCNA)以及凋亡相关蛋白B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(BAX)等蛋白水平表达的影响,采用EdU检测HASMCs的增殖能力,采用流式检测HASMCs的凋亡情况。采用免疫荧光检测尾部悬吊大鼠颈动脉平滑肌细胞中Cx43的表达情况。结果SMG组HASMCs回转失重培养48 h后,与Con组相比,HASMCs中Cx43的mRNA和蛋白表达水平明显升高(P<0.05)。SMG+inhibitor组中的PCNA蛋白表达水平显著下降(P<0.05),Bcl-2蛋白水平显著降低(P<0.05),BAX水平显著增高(P<0.05);与SMG组相比,SMG+inhibitor组HASMCs中EdU阳性细胞比率显著下降(P<0.05);流式结果表明,SMG+inhibitor组中HASMCs中的凋亡率显著升高(P<0.05)。尾吊大鼠免疫荧光结果表明,尾吊大鼠与正常大鼠相比,颈动脉平滑肌细胞中Cx43表达显著增多。结论Cx43在模拟失重条件下促进HASMCs的增殖,抑制HASMCs的凋亡。

乌司他丁通过上调Cx43表达减轻缺氧/复氧诱导的心肌细胞铁死亡的作用机制

目的探讨乌司他丁(UTI)对缺氧/复氧(H/R)诱导的心肌细胞铁死亡的影响,并分析其保护机制。方法体外培养大鼠H9c2心肌细胞,分为对照组、H/R组、铁死亡诱导剂(Erastin)组、UTI组、UTI+Erastin组、UTI+小干扰RNA(siRNA)阴性对照(si-NC)组、UTI+连接蛋白43(Cx43)siRNA(si-Cx43)组,各组给予相应干预后,检测各组细胞活力、乳酸脱氢酶(LDH)活性、活性氧、Fe^(2+)、丙二醛、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性及Cx43、谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)、铁蛋白重链1(FTH1)、酰基辅酶A合成酶长链家族成员4(ACSL4)mRNA和蛋白水平。结果与对照组比较,H/R组细胞活力、SOD、CAT活性和Cx43、GPX4、FTH1mRNA及蛋白水平显著降低,LDH活性、活性氧、丙二醛、Fe^(2+)和ACSL4mRNA及蛋白水平显著升高(P<0.01)。与H/R组比较,UTI组细胞活力[(71.40±8.05)%vs(42.63±6.71)%]、SOD、CAT活性和Cx43、GPX4、FTH1mRNA及蛋白水平显著升高,LDH活性、活性氧、丙二醛、Fe^(2+)和ACSL4mRNA及蛋白水平显著降低(P<0.05)。与UTI组比较,UTI+Erastin组和UTI+si-Cx43组细胞活力、SOD、CAT活性和Cx43、GPX4、FTH1mRNA及蛋白水平显著降低,LDH活性、活性氧、丙二醛、Fe^(2+)和ACSL4mRNA及蛋白水平显著升高(P<0.05)。结论UTI可能通过上调Cx43抑制H/R诱导的心肌细胞铁死亡。

布托啡诺通过微小RNA-1-3p(miR-1-3p)上调连接子蛋白43(Cx43)通路减轻SD大鼠缺血性心律失常

目的探讨布托啡诺减轻缺血性心律失常的作用及其对微小RNA 1-3p/连接子蛋白43(miR-1-3p/Cx43)通路的调控作用。方法SD大鼠分为对照组(处理和造模相同但不进行冠状动脉结扎操作)、布托啡诺组(在针穿过心肌表层后股静脉注射50μg/kg布托啡诺)、抑制剂组(实验前5 d经尾静脉给予80 mg/kg的miR-1-3p的抑制物,其他同对照组);模型组(采用结扎法制备大鼠缺血性心律失常模型)、布托啡诺预处理组(在缺血处理前5 min给予50μg/kg的布托啡诺,其他同模型组)、抑制剂预处理组(实验前5 d给予80 mg/kg的miR-1-3p的抑制物,其他同模型组)。根据心电图结果对各组大鼠进行室性心律失常评分,Targetscan数据库预测Cx43的上游微小RNA(miRNA),利用实时定量PCR检测Cx43 mRNA及miR-1-3p水平,Western blot法检测心肌组织中Cx43表达,通过双荧光素酶报告实验验证Cx43 mRNA与miR-1-3p的结合。结果布托啡诺明显降低缺血性心律失常大鼠的室性早搏次数、室性心律失常评分、室颤持续时间、室速持续时间,并且明显提高Cx43蛋白在心肌组织中的表达;随后检测发现miR-1-3p和Cx43 mRNA的3′非翻译区(3′UTR)存在2个结合位点;布托啡诺显著下调心肌组织中miR-1-3p水平;而抑制miR-1-3p水平显著降低缺血性心律失常大鼠的室性心律失常评分的总分,同时显著上调Cx43 mRNA和蛋白的表达。结论布托啡诺通过miR-1-3p介导上调Cx43表达而改善大鼠缺血性心律失常。

CX43蛋白表达对晚期结直肠癌奥沙利铂联合5-FU衍生物化疗疗效和预后影响

目的 分析结直肠癌组织中连接蛋白43(connexin43, CX43)的表达与临床病理特征的关系,以及对短期疗效与长期预后的影响。方法 选取本院2015年1月~2017年4月期间收治的58例接受奥沙利铂联合5-FU衍生物化疗的晚期结直肠癌患者为研究对象,免疫组织化学染色法分析患者结直肠癌组织中CX43蛋白的表达情况。探讨CX43蛋白表达水平与临床病理特征、化疗疗效及生存期之间的关系。结果 58例患者癌组织中,CX43蛋白阳性表达33例,阴性表达25例。CX43表达阳性的患者其组织分化程度为高、中分化的比率明显高于CX43表达阴性患者(P<0.05)。在CX43表达阳性的结直肠癌患者中,Dukes分期为A、B期的比率显著高于CX43表达阴性的患者,Dukes分期为C+D期的比率显著低于CX43表达阴性的患者(P<0.05)。CX43表达阳性的结直肠癌患者存在淋巴结转移阳性的比率明显低于CX43表达阴性的患者,Ki67高表达的比率显著高于CX43表达阴性的患者(P<0.05)。CX43阳性表达组患者的化疗有效率、中位PFS和OS均显著高于CX43阴性表达组(P<0.05)。结论 CX43蛋白表达与结直肠癌分化程度、Dukes分期、淋巴结转移、短期疗效、长期预后等均有密切关系。CX43蛋白表达异常可能是结直肠癌发生发展过程中的重要影响因素。

血管紧张素Ⅱ上调连接子蛋白43(Cx43)促进人肺动脉平滑肌细胞的增殖和迁移

目的以人肺动脉平滑肌细胞(HPASMC)为研究对象,探讨连接子蛋白43(Cx43)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的细胞增殖、迁移的影响。方法体外培养的对数生长期HPASMC,分为对照组、AngⅡ处理组、AngⅡ联合二甲基亚砜(DMSO)处理组及AngⅡ联合坎地沙坦处理组。采用CCK-8法检测HPASMC增殖,TranswellTM小室检测HPASMC的迁移能力,划痕实验检测其迁移能力;Western blot法检测HPASMC的Cx43蛋白及其磷酸化、骨桥蛋白(OPN)、增殖细胞核抗原(PCNA)、SMAD家族成员2(SMAD2)、SMAD3的蛋白水平。结果与对照组相比,AngⅡ处理组OPN、PCNA蛋白表达增加,细胞增殖和迁移能力增强;与AngⅡ处理组相比,AngⅡ联合坎地沙坦处理组细胞的增殖和迁移能力降低。与对照组相比,AngⅡ处理组Cx43蛋白及其磷酸化水平均明显增加,SMAD2、SMAD3的蛋白表达增加,而AngⅡ联合坎地沙坦组各蛋白表达较AngⅡ组均明显降低。结论AngⅡ上调Cx43蛋白的表达促进HPASMC增殖和迁移,可能与激活SMAD2/3信号通路有关。

血管紧张素Ⅱ通过激活连接子蛋白43(Cx43)诱导小鼠巨噬细胞M1型极化

目的观察连接蛋白43(Cx43)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的小鼠RAW264. 7单核巨噬细胞M1型极化中的影响。方法将RAW264. 7巨噬细胞分为对照组、AngⅡ处理组和Cx43特异性阻断剂Gap26预处理组,其中AngⅡ处理组给予10^(-6)mol/L AngⅡ作用12 h,Gap26预处理组先给予10^(-5)mol/L Gap26预处理30 min,再给予10^(-6)mol/L AngⅡ作用12 h。实时定量PCR检测M1型标志分子CD86、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的mRNA水平,Western blot法检测巨噬细胞上Cx43、CD86、iNOS的蛋白水平,激光共聚焦显微镜观察巨噬细胞CD86、iNOS表达和共定位。结果与对照组相比,AngⅡ处理组CD86、iNOS及TNF-α水平显著升高;与AngⅡ处理组相比,Gap26预处理后CD86、iNOS及TNF-α的水平明显降低,但仍高于对照组。CD86主要表达于细胞膜上,iNOS则在全细胞均有表达。结论 AngⅡ可以诱导小鼠巨噬细胞向M1型极化,Cx43特异性阻断剂Gap26对AngⅡ诱导的M1型极化具有抑制作用。

阻断连接子蛋白43(Cx43)抑制脂多糖诱导的小鼠RAW264.7巨噬细胞M1型极化

目的研讨连接子蛋白43(Cx43)在脂多糖(LPS)诱导的小鼠RAW264.7巨噬细胞M1型极化中的作用。方法将体外培养的小鼠RAW264.7巨噬细胞分为对照组、LPS组、LPS联合Cx43阻断剂模拟肽19(Gap19)或模拟肽26(Gap26)预处理组(LPS联合Gap19组、LPS联合Gap26组)。Western blot法检测小鼠RAW264.7巨噬细胞Cx43和M1型极化标志物CD86、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的蛋白水平,免疫荧光细胞化学染色观察CD86在RAW264.7巨噬细胞的表达和定位,流式细胞术检测小鼠RAW264.7巨噬细胞M1型极化标志物CD86的表达频数。结果与对照组相比,LPS组中CD86、iNOS和Cx43的蛋白表达明显升高,CD86的表达频数明显升高;与LPS组相比,在LPS联合Gap19组和LPS联合Gap26组中CD86和iNOS的蛋白表达均显著降低,CD86的表达频数均显著降低。因此,LPS可以诱导小鼠RAW264.7巨噬细胞向M1型极化,而Gap19和Gap26能够降低M1型极化标志物的表达。结论通过阻断Cx43可以抑制巨噬细胞M1型极化。

缝隙连接蛋白43在舒芬太尼预处理减轻大鼠离体心肌缺血再灌注损伤中的作用

目的探究缝隙连接蛋白(Cx)43在舒芬太尼预处理减轻大鼠离体心肌缺血再灌注损伤(MIRI)中的作用。方法健康成年雄性SD大鼠40只,随机分为缺血再灌注(I/R)组、舒芬太尼预处理(Sufen)组、线粒体ATP敏感性钾通道(mito-KATP)特异性阻断剂5-羟基葵酸钠(5-HD)组、舒芬太尼预处理+5-HD(SH)组,每组10只。利用Langendorff离体心脏灌注装置制备离体心脏灌注模型,其中I/R组持续灌注30 min后停止灌注,然后恢复灌注2 h;Sufen组与5-HD组分别灌注含舒芬太尼(10 nmol/L)、5-HD(100μmol/L)的K-H液30 min;SH组于舒芬太尼预处理前10 min至缺血5 min灌注含舒芬太尼(10 nmol/L)和5-HD(100μmol/L)的K-H液30 min。分别于平衡末(T1)、缺血前(T2)、再灌注末(T3)记录各组心率(HR)、左心室收缩压(LVSP)、左心室舒张压(LVDP)、左室内压最大上升/下降速率(±dp/dtmax)。再灌注结束后,采用2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色法测定各组心肌梗死面积,采用免疫荧光共聚焦技术检测Cx43的平均光密度(AOD)值,采用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术检测各组Cx43 mRNA表达情况,采用Western印迹法检测各组心肌组织Cx43蛋白及磷酸化(p)-Cx43蛋白相对表达量。结果T3时,与Sufen组比较,I/R组、5-HD组、SH组HR、LVSP、±dp/dtmax均下降,LVDP均升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与Sufen组比较,I/R组、5-HD组、SH组心肌梗死面积均增大,差异有统计学意义(P<0.05)。与Sufen组比较,I/R组、5-HD组、SH组Cx43 AOD值和Cx43 mRNA、Cx43、p-Cx43蛋白相对表达量均减小,差异有统计学意义(P<0.05)。结论Cx43参与MIRI的病理生理过程,舒芬太尼预处理对于大鼠离体MIRI的保护作用机制可能是通过开放mito-KATP通道促使Cx43蛋白表达增加来实现。

连接子蛋白43(Cx43)抑制氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的大鼠胸主动脉平滑肌细胞自噬

目的探讨连接子蛋白43(Cx43)在氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞(VSMC)自噬中的作用。方法采用α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)免疫荧光细胞化学染色鉴定原代VSMC,ox-LDL处理后,采用油红O染色鉴定泡沫细胞;Western blot法检测(0、40、80、160)μg/mL ox-LDL处理0、6、12、24 h,VSMC中微管相关蛋白1轻链3(LC3)蛋白的表达以及80μg/mLox-LDL干预24 h,Cx43蛋白的表达;将VSMC随机分为对照组、ox-LDL组和ox-LDL联合Cx43特异性阻断剂Gap26组,Western blot法检测各组细胞LC3、beclin 1的表达。结果分离的细胞α-SMA阳性率达95%以上,与对照组相比,ox-LDL处理的细胞油红O阳性细胞明显增加,ox-LDL呈浓度依赖及时间依赖地降低LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的比值及beclin 1蛋白表达,Cx43蛋白的表达明显升高;给予Gap26后,可上调LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的比值及beclin 1蛋白表达。结论Cx43抑制ox-LDL引起的自噬。

硫氢化钠抑制大鼠外周血淋巴细胞TNF-α和IL-6的释放并下调连接子蛋白40(Cx40)和Cx43水平

目的探讨硫氢化钠(NaHS)对淋巴细胞连接子蛋白40(Cx40)和Cx43表达及肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素6(IL-6)释放的影响。方法选取清洁级Wistar京都(WKY)大鼠6只,采集腹主动脉外周血;密度梯度法分离淋巴细胞,分为对照组、伴刀豆球蛋白A (ConA)组、ConA联合NaHS组。ELISA检测培养细胞上清中IL-6和TNF-α的水平,免疫荧光染色技术检测淋巴细胞Cx40、Cx43表达和定位,流式细胞术检测淋巴细胞Cx40、Cx43表达频数,Western blot法检测淋巴细胞Cx40、Cx43的蛋白水平。结果与对照组相比,ConA组IL-6和TNF-α水平升高,ConA联合NaHS组较ConA组降低; Cx40主要表达在细胞质和细胞核,而Cx43主要表达在细胞膜上;与对照组相比,ConA组淋巴细胞Cx40和Cx43表达均明显增强、Cx40和Cx43表达频数及蛋白水平均升高;与ConA组相比,ConA联合NaHS组淋巴细胞Cx40和Cx43表达均降低、Cx40和Cx43表达频数及蛋白水平均降低。结论 NaHS处理抑制ConA处理引起的TNF-α和IL-6释放,下调淋巴细胞上Cx40和Cx43的表达。

基于缝隙连接蛋白-43调控的运动预处理促进大鼠脑缺血再灌注后神经血管单元重构的机制研究

目的:探讨运动预处理通过影响缝隙连接蛋白-43(Cx43),促进脑缺血再灌注损伤(CIRI)后血管神经单元重构的作用。方法:将72只雄性SD大鼠分为假手术组、模型组、运动预处理组,并用线栓法制作大脑中动脉缺血/再灌注模型。在恢复灌注的1天、3天后分别进行神经功能缺损评分、Western Blot及免疫荧光染色检测Cx43蛋白表达水平、免疫组化法检测CD34表达水平。结果:与假手术组相比,模型组神经功能缺损评分、缺血侧皮层脑组织中Cx43蛋白表达水平显著升高(P<0.01),CD34细胞阳性率显著下降(P<0.01)。与模型组相比,运动预处理组神经功能缺损评分、缺血侧皮层脑组织中Cx43蛋白表达水平较低,CD34细胞阳性率上升,差异均有显著性意义(P<0.01)。结论:作为CIRI和神经血管单元重构机制靶点之一,基于Cx43调控的运动预处理可通过抑制CIRI后Cx43的激活,上调CD34表达,发挥作用。

牙周炎患者血清LTB4、Cx43水平及其临床意义

目的分析白三烯B4(leukotriene B4,LTB4)、连接蛋白43(connexin43,Cx43)在牙周炎患者血清中的表达水平,并探究其临床意义。方法选择2020年1月至2022年1月我院口腔科收治的98例牙周炎患者为牙周炎组,根据其病情严重程度分为轻度组34例,中度组36例,重度组28例;同期牙周健康的口腔志愿者95例为对照组。采用酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)法检测血清中LTB4、Cx43的表达水平。采用Pearson相关性分析血清LTB4、Cx43表达水平相关性以及二者与牙周探诊深度(probing depth,PD)、附着丧失(attachment loss,AL)、菌斑指数(plaque index,PLI)的相关性;Logistic回归分析牙周炎发生的影响因素。ROC曲线分析血清LTB4、Cx43表达水平对牙周炎患者的预测价值。结果牙周炎组不正规刷牙方式、每日刷牙时间<3min、次数<2次、夜磨牙的人数显著多于对照组,PD、AL、PLI的水平显著高于对照组(P<0.05);与对照组相比,牙周炎组血清中LTB4、Cx43的表达水平显著升高(P<0.05);重度组牙周炎患者的LTB4、Cx43的表达水平高于中度组和轻度组,中度组高于轻度组(P<0.05);Pearson相关性分析显示,血清中LTB4与Cx43水平以及二者与PD、AL、PLI的值均呈正相关(P<0.05);Logistic回归分析显示,PD、AL、PLI、LTB4、Cx43为牙周炎发生的影响因素(P<0.05)。血清LTB4、Cx43预测牙周炎患者发生的曲线下面积均大于单一指标预测(Z=13.582,P<0.001;Z=8.103,P<0.001)。结论牙周炎患者血清中LTB4、Cx43表达水平显著增加,二者表达呈正相关,是牙周炎发生的影响因素。

三七总皂苷对心肌缺血再灌注损伤大鼠心肌ZO-1、Occludin、Cx43蛋白表达的影响

目的探究三七总皂苷(PNS)对大鼠心肌缺血再灌注损伤(MIRI)的保护作用及机制。方法将40只SD雄性大鼠随机分为正常组、模型组、曲美他嗪组(对照组)、三七总皂苷组。正常组及模型组给予等体积生理盐水灌胃,曲美他嗪组给予5.4 mg·kg-1灌胃,三七总皂苷组给予50 mg·(kg·mL)-1腹腔注射。除正常组外,模型制备均采用冠状动脉左前降支结扎术。心电图检测ST段以评价造模情况;苏木素-伊红(HE)染色观察心肌组织损伤情况;比色法测定血清中肌酸激酶(CK)含量,酶联免疫吸附法(ELISA)测定血清中肌钙蛋白T(cTnT)、肌红蛋白(MYO)、白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量;蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测闭锁小带蛋白-1(ZO-1)、紧密连接蛋白(Occludin)、缝隙连接蛋白43(Cx43)蛋白含量的表达。结果与正常组相比,模型组血清中CK、cTnT、MYO、IL-1β、IL-6、TNF-α含量显著增多(P<0.01);心肌细胞排列紊乱,存在炎性浸润,细胞核散乱无序,心肌纤维扭曲断裂;心肌组织中ZO-1、Occludin、Cx43蛋白表达均显著降低(P<0.01)。与模型组相比,三七总皂苷组与曲美他嗪组血清中cTnT、MYO含量均显著降低(P<0.01),三七总皂苷组CK含量显著降低(P<0.01),曲美他嗪组CK含量降低(P<0.05);三七总皂苷组血清中IL-1β、IL-6、TNF-α含量均显著降低(P<0.01),曲美他嗪组IL-1β、IL-6含量降低(P<0.05);三七总皂苷及曲美他嗪组心肌细胞结构完整,炎性细胞明显减少,细胞间质水肿程度降低,肌纤维排列整齐;三七总皂苷与曲美他嗪组ZO-1、Occludin、Cx43的蛋白表达均显著升高(P<0.01)。结论本实验结果表明,三七总皂苷可以降低MIRI大鼠心肌损伤标志物CK、cTnT、MYO的含量,降低血清中炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α含量,减轻病理损伤,可以通过调控缝隙链接蛋白Cx43、紧密连接蛋白ZO-1及Occludin的蛋白表达水平来改善血管紧密连接的结构,调节血管内皮功能,保护MIRI大鼠受损心肌。

稳心颗粒调节心肌梗死大鼠心肌缝隙连接蛋白43表达及自噬的研究

目的:探讨稳心颗粒对心肌梗死大鼠心肌缝隙连接蛋白43表达及自噬水平变化的影响。方法:通过心脏左冠状动脉前降支结扎法构建心肌梗死大鼠模型后,随机分为模型组、稳心颗粒低剂量组、稳心颗粒高剂量组及美托洛尔组,连续给药4周,另设正常组作为空白对照,每组8只大鼠。超声心动图检测各组大鼠左室短轴收缩末期前壁厚度(LVAWs)、左室舒张末期前壁厚度(LVAWd)、左室收缩末期内径(LVIDs)、左室舒张末期内径(LVIDd)以及左室射血分数(LVEF);心脏生理电刺激检测各组大鼠的心室颤动阈值;苏木精-伊红(HE)染色观察心脏组织病理学改变;采用免疫组织化学染色及蛋白免疫印迹法检测心肌缝隙连接蛋白43(CX43)、自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3(LC3)、酵母自噬相关基因6哺乳动物同源体(Beclin1)、P62蛋白的表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠LVAWs、LVAWd、LVEF降低,LVIDs、LVIDd升高(P<0.01);与模型组比较,稳心颗粒低剂量组、稳心颗粒高剂量组、美托洛尔组LVAWs、LVAWd、LVEF升高,LVIDs、LVIDd降低(P<0.05或P<0.01)。模型组大鼠心室颤动阈值明显低于正常组(P<0.01);与模型组比较,稳心颗粒低剂量组、稳心颗粒高剂量组、美托洛尔组心室颤动阈值有所增高(P<0.01)。与正常组比较,模型组LC3、Becli1蛋白平均光密度值明显增加,CX43蛋白平均光密度明显降低(P<0.01);与模型组比较,稳心颗粒高剂量组、美托洛尔组自噬正相关蛋白LC3、Beclin1平均光密度值均明显降低,CX43蛋白平均光密度值增加(P<0.01)。与正常组比较,模型组自噬正相关蛋白LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin1表达增加,自噬负相关蛋白P62表达以及CX43蛋白表达降低(P<0.05);与模型组比较,稳心颗粒低剂量组Beclin1蛋白表达明显减少,P62蛋白表达明显升高(P<0.05),稳心颗粒高剂量组及美托洛尔组LC3Ⅱ、Beclin1蛋白表达明显降低,P62及CX43蛋白表达明显升高(P<0.05)。结论:稳心颗粒可改善心肌梗死大鼠的心功能并预防心律失常,其机制与调节心脏自噬水平和缝隙连接蛋白43表达有关。