吴茱萸次碱改善溶血性磷脂酰胆碱诱导的内皮细胞缝隙连接细胞间通讯功能障碍

目的探讨吴茱萸次碱(rutaecarpine,Rut)抗溶血性磷脂酰胆碱(LPC)损伤的内皮保护效应及对缝隙连接细胞间通讯功能(GJIC)的调节作用。方法在培养的人脐静脉内皮细胞(HUVEC),预先加入不同浓度的Rut(1.0、0.3、0.1μmol·L-1),处理10 min后加入LPC(10 mg·L-1)共同孵育24 h。应用辣椒素受体(TRPV1)竞争性拮抗剂CAPZ(10μmol·L-1)研究TRPV1是否介导Rut的保护效应。荧光定量PCR检测缝隙连接蛋白Cx37、Cx40的mRNA水平,Western blot检测Cx37和Cx40的蛋白水平,划痕负载试验测定GJIC功能。检测内皮细胞活力(MTT法)、活性氧(ROS)水平和细胞培养液中NO水平及单核细胞黏附,以评价内皮细胞损伤程度。结果 LPC明显下调HUVEC中Cx37和Cx40的mRNA和蛋白水平,抑制缝隙连接染料迁移。而Rut可明显恢复Cx37、Cx40的表达,改善GJIC功能,并减轻LPC诱导血管内皮损伤,表现为增加细胞活力和NO水平,抑制ROS生成和单核细胞黏附。预先给予CAPZ可取消这些效应。结论 Rut可抑制LPC诱导的内皮细胞损伤,恢复Cx37和Cx40的表达而改善GJIC,其机制与激活TRPV1有关。

异位和正常子宫内膜间质细胞对上皮细胞间隙连接细胞间通讯的影响

目的研究体外异位和正常子宫内膜间质细胞对内膜上皮细胞间隙连接细胞间通讯(gap junctional intercellular communication,GJIC)功能的不同影响。方法取24例卵巢处子宫内膜异位灶以及10例正常子宫内膜,分离、纯化上皮细胞和间质细胞,建立体外上皮细胞单独培养、上皮细胞与间质细胞共培养模型。在激光共聚焦显微镜下采用荧光漂白后恢复技术分别检测各组上皮细胞的GJIC功能。结果①异位内膜上皮、间质细胞纯度分别为92%、95%,对照组内膜上皮、间质细胞纯度分别为95%、98%;②单独培养的异位内膜上皮细胞与单独培养的正常内膜上皮细胞的GJIC功能无显著性差异(P>0.05);③与正常间质细胞共培养后,上皮细胞中GJIC功能明显上调,而与异位内膜间质细胞共培养的上皮细胞中GJIC功能未见明显变化。结论异位间质细胞丧失了调节上皮细胞GJIC的能力,这种调节能力的异常可能与子宫内膜异位症发生有关。

间隙连接细胞间通讯与胸苷激酶系统“旁观者效应”的关系及其调控

增强“旁观者效应”是提高单纯疱疹胸苷激酶/更昔洛韦(HSV-TK/GCV)基因系统治疗效果的关键手段。旨在探讨间隙连接细胞间通讯(GJIC)在HSV-TK/GCV系统“旁观者效应”中的作用及其化学调控。通过采用划痕标记染料示踪技术(SLDT)比较ACHN、HeLa、NIH-3T3、Cos-7及L-02等五种不同细胞系GJIC功能状况,四甲基偶氮唑盐酶反应比色法(MTT法)检测HSV-TK/GCV对其杀伤效应和“旁观者效应”,并比较GJIC上调剂apigenin和抑制剂18-α-glycyrrhetinic acid(AGA)对GJIC和“旁观者效应”的影响。结果表明,GJIC功能强大的NIH-3T3、Cos-7及L-02细胞对HSV-TK/GCV敏感性及“旁观者效应”程度远较GJIC功能低下的ACHN和HeLa细胞高(P<0.001)。Apigenin可显著提高ACHN细胞GJIC功能,对HeLa细胞则无影响;相反,AGA可显著抑制NIH-3T3、Cos-7和L-02等三种靶细胞的GJIC功能。相应地,apigenin可明显提高ACHN细胞的“旁观者效应”而对HeLa细胞的“旁观者效应”则无影响,AGA则可明显降低上述三种细胞的“旁观者效应”。因此认为,细胞内在的GJIC功能与靶细胞对HSV-TK/GCV的敏感性和“旁观者效应”程度有正向关系,人为调控细胞GJIC后,“旁观者效应”程度亦发生相应改变。

N-6/N-3多不饱和脂肪酸不同比例对乳腺癌细胞缝隙连接细胞通讯的影响

目的观察n-6／n-3多不饱和脂肪酸（polyunsaturated fatty acid，PUFA）不同比例对乳腺癌细胞缝隙连接细胞通讯的影响。方法n-6／n-3PUFA不同比例（1～10）处理MCF-7（ER^＋）和MDA-MB-231（ER^-）乳腺癌细胞，采用免疫细胞化学观察细胞核Ki-67表达，Western blot检测细胞膜和细胞质缝隙连接蛋白Cx26、Cx43表达，划痕负载染料迁移法分析细胞缝隙连接通讯功能。结果免疫组化结果显示，单纯n-6和10：1n-6／n-3 PUFA增强两种乳腺癌细胞Ki-67表达（P〈0．05），5：1 n-6／n-3 PUFA虽无明显变化，但单纯n-3和1：1n-6／n-3 PUFA抑制细胞Ki-67表达（P〈0．01）。免疫印迹发现，单纯n-3和1：1n-6／n-3 PUFA能明显上调MCF-7细胞膜和细胞质的Cx26、Cx43蛋白表达，单纯n-6 PUFA却下调两种蛋白表达；在MDA-MB-231细胞，n-6／n-3 PUFA不同比例对膜和细胞质的Cx43蛋白表达与MCF-7细胞具有相同趋势，但对Cx26蛋白则无明显作用。用划痕负载染料迁移法却发现，n-6／n-3 PUFA不同比例对细胞缝隙连接通讯功能均无明显影响。结论单纯n-3和1：1n-6／n-3PUFA对MCF-7和MDA-MB-231乳腺癌细胞增殖活性的抑制作用，可能是Cx26和Cx43蛋白通过独立于缝隙连接细胞通讯功能的调节所致。

高糖对人晶状体上皮细胞缝隙连接细胞间通讯的影响

【目的】研究高糖对人晶状体上皮细胞缝隙连接细胞通讯活性(GJIC)的影响。【方法】将人晶状体上皮细胞(SRA01/04)培养于正常葡萄糖浓度(5.5mmol/L),传代时将其接种于16个35mm的培养皿中,实验分为4组(每组4个培养皿):正常糖浓度组(培养基葡萄糖含量是5.5mmol/L)、高糖组(培养基葡萄糖含量是30mmol/L)、佛波酯(TPA)组(阳性对照)及二甲基亚砜(DMSO)组(阴性对照)。当细胞生长至90%融合时,用划痕荧光染料示踪技术(SL/DT)检测其缝隙连接细胞间通讯活性。【结果】在高糖培养的人晶状体上皮细胞划痕荧光黄向两侧传递的细胞列数为2.23±0.33,明显少于正常糖浓度培养的人晶状体上皮细胞(3.75±0.57,P<0.01)。TPA显著抑制晶状体上皮细胞的GJIC,与正常糖浓度组比较差异具有显著性(1.65±0.26vs3.75±0.57,P<0.01)。【结论】人晶状体上皮细胞缝隙连接细胞间通讯活性在高糖中受到抑制,可能在糖尿病晶状体渗透水肿和离子代谢紊乱中发挥作用。

吴茱萸碱对大鼠肝癌细胞缝隙连接细胞通讯功能及连接蛋白表达的影响

目的探讨吴茱萸碱抗肿瘤的作用机制。方法用终浓度为0.1,0.2,0.3μmol/L的吴茱萸碱作用于CBRH7919细胞,同时设不加吴茱萸碱的空白对照组。采用划痕标记染料示踪技术检测各组细胞缝隙连接细胞通讯(gap junctional intercellular communication,GJIC)功能;异硫氰酸荧光素间接免疫荧光法检测连接蛋白(connexin,Cx)26、Cx32表达的变化。结果与空白对照组相比,吴茱萸碱各浓度组CBRH7919细胞Cx26、Cx32表达显著增加,GJIC功能增强,并呈一定的剂量效应依赖关系。结论吴茱萸碱上调CBRH7919细胞Cx26和Cx32的表达及促进CBRH7919细胞的GJIC功能,可能是其抗肿瘤的机制之一。

连接蛋白/缝隙连接细胞间通讯对大鼠肝卵圆细胞增殖调控作用

背景:缝隙连接蛋白介导的缝隙连接细胞间通讯(gap junction intercellular communication,GJIC)是细胞间最重要的信息交流形式。目的:验证CX/GJIC对卵圆细胞的增殖调控作用。方法:Wistar大鼠分为4组。对照组正常饮食;2-AAF/PH组按改良Solt-Farber法建立卵圆细胞增殖动物模型;苯巴比妥组予以苯巴比妥饮水7d,第8天按2-AAF/PH组建模,苯巴比妥饮水持续至实验结束;三七总皂苷组按2-AAF/PH组建模时予以三七总皂苷25mg/(kg?d)腹腔内注射,并持续实验结束。结果与结论:造模后肝脏连接蛋白呈时空特异性表达,先下调后逐渐恢复,连接蛋白43表达于卵圆细胞,先升高后逐渐恢复;采用苯巴比妥改变大鼠2-AAF/PH模型肝脏的连接蛋白32、连接蛋白43时空表达模式后,可下调肝脏的GJIC,减少卵圆细胞与偶联细胞间GJIC,解除卵圆细胞生长抑制,促进卵圆细胞的增殖;三七总皂苷可以增加大鼠2-AAF/PH模型肝脏的连接蛋白32表达、滞后连接蛋白43的表达,增加卵圆细胞与偶联细胞间GJIC,使卵圆细胞增殖峰低、滞后、持续时间长;通过下调大鼠2-AAF/PH模型肝脏的GJIC,可使卵圆细胞增殖早、增殖水平高;上调GJIC使卵圆细胞增殖峰低、滞后、持续时间长,CX/GJIC可以调节体内卵圆细胞的增殖、分化过程。

间隙连接细胞间通讯在造血调控中的作用

间隙连接是相邻细胞间允许细胞间离子，代谢产物和其他信号分子交换的通道。这些细胞间通道由独特的结构单位间隙连接蛋白（Cx）组成。在脊椎动物中，Cx由多基因家族编码而成至少20种成员，在造血组织中主要是Cx43。Cx43在很多造血器官中均有表达，但主要表达在骨髓、胸腺、脾脏和其他淋巴组织。胸腺和骨髓上的基质细胞中Cx43蛋白组装成有功能的间隙连接已经得到证实。

全反式维甲酸对脑胶质瘤细胞缝隙连接细胞间通讯功能的影响

目的 观察大鼠脑胶质瘤C6细胞缝隙连接细胞间通讯(GJIC)功能,并研究全反式维甲酸(ATRA)对C6 细胞GJIC功能的影响。方法 (1)全反式维甲酸(ATRA)上调C6胶质瘤细胞GJIC功能;(2)划痕荷载染料传输 实验(SLDT)检测C6细胞ATRA处理前、后的细胞GJIC功能强弱;(3)光学显微镜观察ATRA处理前、后的细胞 形态学变化。结果 (1)C6细胞GJIC功能低下;(2)ATRA上调C6胶质瘤细胞GJIC功能;(3)上调C6胶质瘤细 胞GJIC功能后细胞增殖受到抑制。结论 (1)ATRA是C6细胞GJIC功能上调剂之一;(2)GJIC功能强弱可影响 肿瘤细胞增殖。

缝隙连接细胞间通讯在炎症、损伤修复和疾病中的作用

缝隙连接是相邻细胞间的通道结构,其主要功能是细胞通讯,又称缝隙连接细胞间通讯。缝隙连接细胞间通讯是细胞间最重要的信息交流形式,可调节组织细胞的生长、分化,在组织保持内稳态中处于核心地位。本文就缝隙连接细胞间通讯在炎症、损伤修复和疾病中的作用等方面作一综述。

缝隙连接细胞间通讯与肿瘤转移

缝隙连接(gap junctions,GJs)是细胞之间的一种连接方式,参与离子和其它小分子信号物质的转运。缝隙连接细胞间通讯(gap junction intercellular communication,GJIC)对细胞的生长、增殖和分化起重要调控作用,并影响肿瘤的浸润和转移过程。它对于阐明肿瘤的转移机理及防治肿瘤转移有重要意义。

黄芪甲苷减轻镉致TM3细胞Cx43表达下降及缝隙连接细胞间通讯功能减退

目的探讨黄芪甲苷(As)对镉(Cd)致TM3细胞连接蛋白43(Cx43)表达改变及由Cx43介导的缝隙连接细胞间通讯(GJIC)功能改变的保护作用。方法用TM3细胞系作为研究对象,设对照组、As(20 mg/L)组、Cd(10μmol/L)组、Cd加As组,免疫组织化学方法分析Cx43阳性产物表达,荧光定量PCR检测Cx43 mRNA表达,Western blot检测Cx43蛋白表达,划痕标记染料示踪技术(SLDT)检测GJIC功能。结果与对照组相比,Cd组TM3细胞Cx43阳性产物表达的平均吸光度值(A_(OD))显著降低(P<0.01),Cx43 mRNA和蛋白表达下降(P<0.01),TM3细胞GJIC功能降低(P<0.01);Cd+As组TM3细胞Cx43阳性产物表达虽较对照组减弱但明显高于相应Cd组(P<0.01),Cx43 mRNA、蛋白表达及GJIC功能虽比对照组降低,但较Cd组高(P<0.01)。结论黄芪甲苷对镉致TM3细胞Cx43表达下降及GJIC功能减退有明显的拮抗作用。

缝隙连接细胞间通讯与肿瘤相关研究

近年来,缝隙连接细胞间通讯与连接蛋白对肿瘤发生发展的影响越来越受到关注,并成为当今研究热点之一。本文就缝隙连接细胞间通讯与肿瘤的发生发展机制、抗肿瘤药物及肿瘤治疗等方面作一简要讨论。

人眼Tenon囊成纤维细胞缝隙连接细胞间通讯的检测

目的:观察体外培养的人眼Tenon囊成纤维细胞(human Tenon's capsule fibroblasts,HTFs)缝隙连接细胞间通讯(gap junctional intercellular communication,GJIC)功能及其构成蛋白connexin43(Cx43)的表达及分布。方法:锐刀划痕罗氏黄(lucifer yellow)荧光染料传输法观察GJIC功能;RT-PCR及Western blot分别检测Cx43 mRNA及蛋白表达;免疫细胞化学方法检测Cx43的分布。结果:荧光染料自划痕线向邻近未损伤细胞传输达6级细胞以上,同时检测到Cx43 mRNA与蛋白的表达;免疫细胞化学法观察到Cx43分布于细胞膜。结论:培养的HTFs具有较强的GJIC功能,通过Cx43介导GJIC赋予细胞能够相互之间传递信息的能力,提示在创伤愈合过程中GJIC对成纤维细胞功能同步化方面发挥重要作用。

缝隙连接细胞间通讯与肝细胞癌关系的研究进展

缝隙连接(gap junction,GJ)是相邻细胞之间由缝隙连接蛋白(connexin,Cx)组成的一种特殊膜结构,小分子物质通过GJ在相邻细胞间进行物质和能量的直接交换现象称为缝隙连接细胞间通讯(gap junctional intercellular communication,GJIC)。研究证明GJIC功能的异常与肿瘤,包括肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)的发生、发展关系密切。本文拟对GJIC与HCC的关系,以及GJIC作为HCC治疗新靶点的潜在价值作一综述。

间隙连接细胞通讯与肿瘤的抑制

间隙连接细胞通讯(gap junctional intercellular communication,GJIC)是多细胞生物体内普遍存在的一种通讯方式,在胚胎发育、生长控制、自身稳定的维持等方面发挥着重要作用.近来的研究显示,肿瘤组织中常伴有GJIC的异常,主要表现为肿瘤细胞间的同型GJIC减少,肿瘤细胞与周围正常细胞间的异型GJIC选择性丧失,从而使肿瘤细胞脱离机体的调控,导致肿瘤细胞无限增殖.而另一方面,共同培养、药物作用或连接蛋白(connexin,Cx)基因转染引起肿瘤细胞GJIC的恢复,又可作为抑瘤措施而发挥作用,逆转恶性表型,这将是一种温和的新型疗法,可能在今后的肿瘤治疗中发挥重要的辅助作用.

缝隙连接细胞间通讯对顺铂疗效的影响研究进展

缝隙连接（gapjunction，GJ）是细胞间直接进行信息交换的重要通道，由其介导的通讯方式缝隙连接细胞间通讯（gapjunction intercellular communication，GJIC）在细胞的新陈代谢、内环境稳定、增殖和分化等生理过程中发挥着关键的调节作用^[1]。