缝隙连接蛋白Cx26/Cx32对依托泊苷抗肿瘤作用的影响

目的观察宫颈癌Hela细胞中缝隙连接蛋白Cx26/Cx32对依托泊苷抗肿瘤作用的影响。方法采用荧光示踪实验检测Hela细胞中由Cx26/Cx32形成的缝隙连接通讯功能,及药物(油酸酰胺,维甲酸)对其功能的影响;采用标准细胞集落形成分析法检测Hela细胞中由Cx26/Cx32形成的缝隙连接通讯功能改变后,依托泊苷对Hela细胞生长抑制作用的影响;采用Hoechst33258荧光染色检测缝隙连接通讯功能改变后,依托泊苷对Hela细胞诱导凋亡作用的影响。结果荧光示踪实验结果显示油酸酰胺可显著降低缝隙连接通讯功能,而维甲酸则可增强该功能;标准细胞集落形成实验结果表明,在缝隙连接形成的Hela细胞中,油酸酰胺显著降低依托泊苷对Hela细胞生长的抑制作用,而维甲酸则增强依托泊苷的细胞生长抑制作用;Hoechst 33258荧光染色结果显示,在缝隙连接形成的Hela细胞中,油酸酰胺显著降低依托泊苷对Hela细胞的诱导凋亡作用,而维甲酸则增强依托泊苷的诱导凋亡作用。结论宫颈癌Hela细胞中缝隙连接蛋白Cx26/Cx32形成的缝隙连接通讯功能降低,依托泊苷的抗肿瘤作用下降;而当通讯功能增强时,其抗肿瘤作用则增加。

乳腺癌中间隙连接蛋白Cx43和Cx26表达的意义

目的 研究间隙连接蛋白 Cx43和 Cx2 6在乳腺癌中的表达及其与乳腺癌生物学行为的关系。方法 应用 S- P免疫组化方法检测 Cx43和 Cx2 6在 5 0例乳腺癌组织中的表达。结果 间隙连接蛋白 Cx43和 Cx2 6蛋白阳性染色位于乳腺癌细胞的胞膜上和胞浆中 ,阳性表达率分别为 44 .0 %和 32 .0 % ,Cx43和 Cx2 6的阳性表达与乳腺癌恶性程度及转移呈密切相关 (P<0 .0 5 )。结论 间隙连接蛋白表达和细胞间隙连接通讯功能异常 ,可能是乳腺肿瘤发生、发展和恶性进程的一个重要事件 。

CX26/CX32缝隙连接蛋白的Tet-onHeLa细胞模型的建立及鉴定

目的体外建立一种特异性快速有效观察药物对细胞缝隙连接(GJ)作用的特异性细胞模型,为发现作用于GJ的药物以及GJ的特异性研究提供一种有力的技术手段。方法构建同时双向表达2种不同连接蛋白(CXs)的质粒;用表达CX26/CX32的质粒转染Tet-on HeLa细胞,建立稳定表达CX26/CX32并形成异质性GJ的HeLa细胞模型。设置多西环素(Dox)(1μg/mL)处理组和未处理组,分别用RT-PCR和Western blot法检测细胞CX26 mRNA和蛋白质表达;细胞接种荧光示踪法检测细胞GJ功能;丽丝胺罗丹明B(SRB)法检测细胞的增殖。在上述细胞模型上,用GJ抑制剂2-氨基乙酯二苯基硼酸(2-APB)和GJ激活剂维甲酸(RA)干预。结果 HeLa细胞无内源性CX的表达,Dox可诱导Tet-on HeLa细胞CX26 mRNA和蛋白质表达,并且被诱导表达的CX可形成有效的GJ。2-APB(50μmol/L)减少稳定表达CX26/CX32的HeLa细胞间的荧光传递数目,GJ抑制率为51.3%(P<0.01);RA(10μmol/L)增多细胞间的荧光传递数目,GJ增强率为60.3%(P<0.01)。结论成功建立Dox调控的、稳定表达CX26/CX32的Tet-on HeLa细胞模型,为寻找可调节GJ功能的药物、观察药物对GJ的特异性作用提供了有力的实验手段。

间隙连接蛋白CX26和CX43在食管鳞癌组织中的表达及意义

目的探讨间隙连接蛋白CX26和CX43在食管磷癌组织中的表达情况及意义。方法应用免疫组化S-P法检测食管鳞癌及相对应的正常食管黏膜组织42例、癌旁不典型增生组织17例中CX26和CX43蛋白水平表达。结果食管鳞癌组织中CX26、CX43阳性率分别为40.5%(17/42)和31.0%(13/42),均明显低于正常食管黏膜组织及癌旁不典型增生组织(P<0.05)。CX26、CX43蛋白水平表达与食管鳞癌的组织学分级、浸润深度以及淋巴结转移有关(P<0.05)。结论 CX26、CX43在食管鳞癌的发生、发展过程中存在表达缺失或减少,CX26、CX43异常表达与食管鳞癌的恶性程度有关。

乳腺癌中间隙连接蛋白Cx43、Cx26的表达及其预后意义

背景与目的:检测间隙连接蛋白Cx43(Connexin43,Cx43)、Cx26(Connexin26,Cx26)、血管内皮生长因子VEGF_C(Vascularendothelialgrowthfactor_C,VEGF_C)和雌激素受体(Estrogenreceptor,ER)、孕激素受体(Progesteronereceptor,PR)在乳腺癌中的表达及其与临床病理指标的关系。材料与方法:应用免疫组化S_P法检测乳腺癌、癌旁乳腺组织共125例石蜡包埋标本中各种蛋白的表达情况,并结合临床随访资料,用Cox比例风险模型分析其预后意义。结果:Cx43和Cx26在癌组织中的阳性表达率分别是38.74%、43.24%,低于癌旁正常组织的阳性表达率;VEGF_C蛋白在癌组织中的阳性表达率47.75%,显著高于癌旁正常组织的阳性表达率。53例VEGF_C阳性患者中,淋巴结转移阳性者37例(69.81%),高于无转移组。多因素Cox比例风险模型分析显示,VEGF_C、Cx26和淋巴结转移与预后密切相关,危险度分别为11.118、0.266和10.126。结论:间隙连接蛋白Cx43和Cx26的缺乏是人类乳腺癌的一个主要特点。随着Cx43和Cx26的阳性表达率降低,乳腺肿瘤的恶性程度增高。VEGF_C阳性表达、ER和PR阴性表达在淋巴结转移组明显高于无转移组。VEGF_C、Cx26和淋巴结转移均可能作为判断预后的独立因素。临床上联合检测这些基因产物的表达将有助于推测乳腺癌患者的预后和选择治疗方案。

维甲酸提高膀胱癌细胞缝隙连接蛋白Cx26的表达

目的:体外观察全反式维甲酸(ATRA)对人源膀胱移行细胞癌BIU-87细胞的缝隙连接蛋白Cx26表达的影响。方法:分别用终浓度为0μmol/L、1μmol/L和10μmol/L的ATRA作用72h后免疫细胞化学法和半定量RT-PCR观察连接蛋白Cx26的表达情况及mRNA水平。结果:对照组细胞Cx26表达为阴性,mRNA水平低,几乎不表达,经过维甲酸刺激后表达显著增高,mRNA水平也显著提高。结论:ATRA可以促进Cx26基因转录,提高mRNA水平,增加Cx26连接蛋白的表达。

过表达间隙连接蛋白CX26 Y155X突变体增加细胞对内质网应激的敏感性*

目的体外实验探讨间隙连接蛋白神经性耳聋相关突变CX26 Y155X突变体导致耳聋可能的致病机制。方法 HEK293细胞中过表达CX26 Y155X突变体质粒后,免疫印迹检测CX26的表达,流式细胞术检测细胞内活性氧物质的改变和内质网应激诱导剂诱导凋亡改变情况。结果过表达CX26 Y155X突变体能增加细胞内ROS的水平,同时能增加内质网应激诱导剂对细胞的促凋亡作用。结论 CX26Y155X突变体可能由于异常聚集于内质网,从而导致内质网应激,产生过多的ROS,增加细胞对内质网应激的敏感性,从而诱导细胞凋亡。

人类连接蛋白基因Cx26的上游调控部位

人类连接蛋白２６（Ｃｏｎｎｅｘｉｎ ２６，Ｃｘ２６）已被看作乳腺癌上皮细胞中的抑瘤基因候选者．为了阐明此基因的调控机理，对其转译起始点上游的一个具有启动功能的１．６ ｋｂ 片段采用ｅｘｏ Ⅲ构建１０个单向删除重组体后进行了ＣＡＴ报告基因分析．结果表明，此１．６ ｋｂ 片段其启动子功能部位位于５′端２００ ｂｐ 范围内．其中含有－ＴＧＴ盒（位于１８２～１８７ ｂｐ），一个ＴＴＡＡＡＡ 盒位于１５８～１６３ ｂｐ，这是人类Ｃｘ２６基因的又一启动区，这些发现无疑地对了解和阐明Ｃｘ２６基因在乳腺发育过程中及其病理生理作用的复杂调控具有特别重要的意义．

非综合征性耳聋患者连接蛋白26基因突变的研究

目的 探讨中国人非综合征性耳聋患者连接蛋白 2 6 (connexin 2 6 ,Cx2 6 )基因突变频率和特性。方法 收集中国散发先天性聋哑儿童 16例 ,常染色体隐性遗传性聋 39例 (39个家系 ) ,10岁前开始听力下降的常染色体显性遗传性聋 30例 (30个家系 )和健康对照组 10 0例。聚合酶链反应 单链构象多态 (singlestrandconformationalpolymorphismanalysisofpolymerasechainreaction ,PCR SSCP)分析初筛可疑突变者 ,SSCP分析发现异常构象带后再行DNA测序。结果 健康对照组中 15例发现 5种多态性改变 ,耳聋患者中 10例发现 6种多态性改变。散发先天性聋哑和常染色体隐性遗传非综合征性耳聋中未发现致病突变。 1个常染色体显性遗传性聋家系发现所有患者 (3例 )Cx2 6基因的编码区2 99 30 0位碱基AT杂合性缺失 ,导致移码突变 ,翻译的蛋白质截短 ,该家系听力正常者无此突变。结论 蒙古人种中常染色体隐性遗传性非综合征性耳聋的Cx2 6基因突变率可能低于其他人种。Cx2 6基因编码区 2 99 30

连接蛋白26在肝细胞癌中的表达及意义

目的：研究Cx26在肝细胞癌及正常肝组织中的表达情况。方法：免疫组化和RT-PCR检测Cx26和PCNA的表达。结果：①Cx26mRNA在正常肝组织组和肝癌组的表达水平分别为0．82±0．37和0．38±0．10；Cx26mRNA在HCC高分化组中的表达高于其在低分化组中的表达水平，分别为0．48±0．12和0．21±0．05。②Cx26在所有正常肝组织中均高表达，其在肝癌组织中的阳性率为64．71％，Cx26的表达随着肝癌分化程度的增加而增强。③在肝癌组织中，PCNA-LI在Cx26蛋白阳性表达组和阴性表达组分别为32．72％±4.21％和56．67％±7．21％，Cx26蛋白阳性者的PCNA-LI明显低于阴性者，PCNA表达水平与Cx26蛋白表达呈负相关。结论：①在肝癌组织中，Cx26的表达随着组织分化程度的降低而降低。②Cx26可作为评价肝癌预后的指标之一。

细胞间隙连接蛋白26、32的研究现状

细胞间隙连接通讯（gap junction intercellular communication,GJIC）是生物体内相邻细胞间通过细胞间隙连接通道互相传递离子、代谢物质极小的信号分子等的一种通讯方式,从而控制细胞间的协调生长,在细胞增殖、分化、内环境稳定及机体的新陈代谢、生长发育等生理过程中起重要作用。

Stathmin与间隙连接蛋白26相互作用并在小鼠耳蜗表达

目的筛选和鉴定连接蛋白26(connexin26,CX26)的相互作用蛋白质,分析其在小鼠内耳的表达,探讨与听觉的关系。方法酵母双杂交技术筛选CX26的相互作用蛋白质。在体外真核细胞表达系统HEK293细胞内过表达人CX26和相互作用蛋白质,观察它们的定位,并用免疫共沉淀实验观察在体外真核细胞中是否存在相互作用。进一步在小鼠脑组织中用免疫共沉淀方法验证CX26和相互作用蛋白质在真核生物体内的相互作用。逆转录聚合酶链反应(Reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)和蛋白质印迹法(Western blot)分析相互作用蛋白质在小鼠耳蜗的表达。结果酵母双杂交实验筛选和鉴定到stathmin与CX26相互作用,两者在体外过表达系统HEK293真核细胞中有共定位,免疫共沉淀实验证实在体外真核细胞和真核生物体内存在相互作用,而且stathmin在小鼠耳蜗表达。结论stathmin与CX26相互作用,并且在小鼠耳蜗表达。

连接蛋白26在肿瘤中的研究进展

近年来,研究证明连接蛋白形成的间隙连接(Gap junction,GJ)在介导肿瘤细胞间通讯起到不可忽视的作用。而异常的连接蛋白26(Connexin 26,Cx26)表达也被证实与肿瘤的发生进展和不良预后相关,因此对Cx26进行生物标记物分析以及深入研究如何介导不同癌症表型,有利于开发临床上基于Cx26的可行诊断和治疗方法。在这篇综述中,我们对不同癌症中Cx26的表达和功能进行了概述,并进一步讨论当前临床上利用Cx26进行肿瘤早期诊断和治疗的可能性。

耳聋易感基因——间隙连接蛋白26基因

耳聋易感基因——间隙连接蛋白２６基因高琳童坦君（北京医科大学生物化学与分子生物学系，北京１０００８３关键词耳聋易感基因间隙连接蛋白２６基因耳聋和听力损伤是常见的遗传性感觉障碍，大约影响０．１％的儿童。近年已发现一些基因突变与Ｗａａｒｄｅｎｂｕｒｇ综合...

皮损组织Cx26蛋白及信使RNA表达与PV患者PASI评分的关联性

目的分析皮损组织Cx26蛋白含量及信使RNA表达与寻常型银屑病(PV)患者皮损面积和严重程度指数(psoriasis area and severity index,PASI)评分的关联性。方法2018年7月-2019年7月选取本院PV患者60例作为研究组,另选同期健康体检者32例作为对照组,分析皮损组织Cx26蛋白、信使RNA水平与PV患者PASI评分的关联性。结果研究组Cx26蛋白含量及信使RNA表达水平均高于对照组(P<0.05);研究组轻度患者Cx26蛋白含量及信使RNA表达水平低于中度,中度患者Cx26蛋白含量及信使RNA表达水平低于重度(P<0.05);经Spearman分析可知,PASI评分与Cx26蛋白含量(r=0.625)及信使RNA表达水平(r=0.541)存在明显正相关关系(P<0.05)。结论PV患者Cx26蛋白含量及信使RNA表达水平与PASI评分密切相关,可作为评判疾病进展、预后指标,为临床治疗提供指导依据。

皮肤瘢痕上皮及瘢痕癌癌巢中Cx26 Cx26 mRNA的表达及意义

目的探讨连接蛋白26在皮肤瘢痕上皮及瘢痕癌癌巢中的表达及其意义。方法对15例皮肤瘢痕和22例瘢痕癌,用免疫组织化学方法(SP法)检测Cx26蛋白,用原位杂交技术检测Cx26 mRNA。利用计算机图像分析系统采集、分析图像,并对数据进行统计学处理。结果 Cx26蛋白、Cx26 mRNA在正常皮肤表皮的表达呈阳性,在病理性皮肤瘢痕上皮呈强阳性表达,在瘢痕癌癌巢中呈弱阳性或阴性表达。正常皮肤组、皮肤瘢痕组及瘢痕癌组两两比较,其表达(阳性面积和平均光密度)差异均有统计学意义(P<0.05)。结论①Cx26蛋白及Cx26 mRNA的高表达,对皮肤瘢痕上皮增生具有促进作用;②Cx26蛋白及Cx26 mRNA的低表达,与皮肤瘢痕癌的发生相关。

CX26不同结构域错义突变体的表达和定位

目的探讨CX26蛋白质的9个结构域上的不同错义突变体在细胞内的表达及功能改变的异同,初步研究CX26不同错义突变体的致聋机理。方法在CX26的9个结构域中各选择1个致聋的错义突变(p.S19T、p.R32H、p.E47K、p.V84L、p.V95M、p.R143W、p.R165W、p.S199F、p.L214P),应用重叠区扩增基因拼接法和长引物快速法,构建成与增强型绿色荧光蛋白(EGFP)融合表达的载体,野生型CX26-EGFP作对照,脂质体转染HeLa细胞,Westernblot分析蛋白的表达,共聚焦显微镜下观察各突变体在细胞膜上有无间隙连接斑形成。结果 CX26的9个结构域上的各1个错义突变体在HeLa细胞中均有表达,其中p.S19T、p.E47K、p.V84L、p.V95M和p.vR165W突变体能在细胞膜上表达并形成间隙连接斑,p.R32H、p.R143W、p.S199F和p.L214P突变体在细胞浆中表达,在细胞膜无表达,无间隙连接斑形成。结论 CX26的p.S19T、p.E47K、p.V84L、p.V95M和p.R165W突变体在细胞内能被转运到细胞膜并形成间隙连接,而p.R32H、p.R143W、p.S199F和p.L214P突变体失去被转运到细胞膜的功能,不能形成间隙连接。CX26的不同错义突变的致聋机制可能不同,与突变点所在的结构域可能没有相关性。

Cx26与胃癌预后的关系

目的研究细胞间隙连接蛋白26(connexin 26,Cx26)表达与胃癌临床病理特点及预后间的关系。方法治疗性切除患者84例,组织样本经Cx26抗体免疫组织化学染色后的表达情况及与病理分型的相关性。并与正常组织做对照。结果胃癌患者中Cx26阳性表达率为54.8%,Cx26表达与生存、病理分型有相关性(P<0.05),Cx26表达阳性的肿瘤患者比Cx26表达阴性的肿瘤患者有更长的生存时间。Kaplan-Meier生存分析显示,Cx26表达是一个独立预后因素。结论在胃癌切除术后患者中,Cx26表达是一个独立预后因素。