成年哺乳动物皮肤上皮层细胞间的连接通讯

用细胞内注射羧基荧光素示踪法我们观察到成年小鼠和家兔皮肤上皮深层细胞间的连接通讯好于表层,并呈一定的方向性。在小鼠躯干右侧肝经线各段和家兔右股内侧肝经线中段的皮肤,按每次测定所表现出来的方向性进行的接力测定表明,这些部位上皮深层的细胞间连接通讯在与肝经大致相符的方向上是连续延伸的,且在小鼠观察到它与肝细胞的状态有一定关系。

脉冲磁场对细胞缝隙连接通讯功能影响的研究

本文用细胞内微注射法对不同强度的脉冲磁场对细胞缝隙连接通讯 (GJIC)功能的效应进行了研究 ,并与正弦磁场的作用以及脉冲磁场所感生的不同电场的作用进行了比较和探索。研究发现 0 .41mT以上强度的脉冲磁场具有抑制GJIC的作用 ,这种作用与磁场强度有关。其抑制GJIC的效应比正弦磁场为强。经相同磁场不同强度感应电场作用的比较 ,得出 ,GJIC的抑制主要由磁场引起 ,而与感应电场关系不大。

双参通冠方对急性心肌缺血再灌注模型核因子-κB信号途径及细胞间隙连接通讯的影响

目的观察双参通冠方 (SSTG)对急性心肌缺血再灌注损伤动物模型心肌梗死面积及重量 ,心肌核因子 κB(nuclearfactor- kappaB ,NF-κB)信号途径及心肌细胞间隙连接蛋白Cx4 3的影响。方法用冠状动脉结扎 /放松法复制大鼠心肌缺血再灌注损伤模型 ,N-BT染色法测量心肌梗死范围 ;免疫组织化学法检测心肌组织NF-κBp6 5表达 ;双抗体夹心ABC-ELISA法测定各组血清肿瘤坏死因子 (TNF α)和细胞间黏附分子- 1(ICAM-1)含量 ;免疫组织化学法测定心肌细胞通讯间隙连接蛋白Cx4 3表达。结果模型组大鼠心肌梗死面积及梗死区重量、NF-κBp6 5表达、血清中TNF-α及ICAM-1含量明显升高 (P <0.0 5 ) ;心肌连接蛋白Cx4 3大量降解。SSTG处理后心肌梗死面积及重量减轻 ;血清中TNF α、ICAM 1水平下调 (P <0 0 5 ) ;NF κBp6 5表达及Cx4 3降解抑制。 结论缺血再灌注时 ,心肌梗死严重 ,NF κB信号途径可被激活 ,Cx4 3降解严重。SSTG能抑制NF-κB的活化 ,抑制血清中TNF-α、ICAM-1的过量分泌和抑制Cx4 3的降解 。

茶多酚对高转移性人肺癌细胞间隙连接通讯功能的上调研究

应用MTT法体外观察不同浓度茶多酚对PG细胞的杀伤作用 ,激光共聚焦显微镜和流式细胞仪检测用药后PG细胞内Ca2 +浓度、细胞间隙连接通讯(GJIC)、Cx4 3表达和细胞增殖周期分布的变化。结果显示 ,4个浓度的茶多酚对PG细胞均有杀伤作用 ,呈剂量依赖关系。细胞增殖受到明显抑制 ,使细胞阻滞于G0 /G1期 ,不能进入S期及G2 /M期 ,细胞增殖指数明显下降。与对照组相比 ,随着茶多酚浓度的增加 ,细胞内Ca2 + 浓度、GJIC和Cx4 3表达水平逐渐上升。提示茶多酚对PG细胞具有生长抑制作用 。

沙利度胺对前列腺癌PC-3细胞的增殖及细胞缝隙连接通讯的影响

目的:观察沙利度胺对前列腺癌PC-3细胞增殖和凋亡的作用及对PC-3细胞中Cx43表达水平的影响。方法:将处于对数生长期的前列腺癌PC-3细胞分别给予递增浓度的沙利度胺(0、12.5、25、50、100μg/mL)处理24 h和48 h。采用CCK-8法检测不同浓度沙利度胺对PC-3细胞的增殖抑制影响,Annexin V-FITC/PI双染色法检测细胞凋亡情况,RT-PCR法检测Cx43mRNA的表达及Westernblot检测Cx43蛋白的表达。结果:沙利度胺浓度在25～100μg/mL能明显抑制PC-3细胞体外增殖,随着时间、浓度增加,抑制率相应升高。不同浓度组沙利度胺处理PC-3细胞24～48 h后,Cx43 mRNA和蛋白有不同程度的升高(P<0.05)。结论:沙利度胺可通过抑制人前列腺癌PC-3细胞增殖、诱导其凋亡,产生抗肿瘤作用。沙利度胺可上调前列腺癌PC-3细胞Cx43mRNA及蛋白的表达水平,并可能促进前列腺癌PC-3细胞的细胞缝隙连接通讯功能的恢复,从而抑制肿瘤生长。

可吸入颗粒物PM_(10)对细胞间隙连接通讯的抑制作用

[目的 ]研究直径≤ 1 0 μm的可吸入大气颗粒物 (PM1 0 )对细胞间隙连接通讯的影响 ,探讨PM1 0 的非遗传毒性作用。 [方法 ]用大流量采样器 ,采集城区交通干道旁约 1 8m高度处大气中的PM1 0 。超纯水超声提取、低温真空冷冻干燥制备PM1 0 悬液。采用细胞代谢协同试验和染料划痕试验观察PM1 0 对中国仓鼠肺成纤维V79细胞以及人肺成纤维细胞间隙连接通讯的影响。 [结果 ]PM1 0 抑制V79细胞的代谢协同作用 ,使V79- 细胞的存活率增高 ,在 1 0～ 1 0 0mg/L剂量范围内 ,与对照组比较 ,克隆形成数明显增高 ,有剂量 反应关系 (r=0 94,P <0 0 5)。细胞划痕实验结果显示 ,在PM1 01 0～ 1 0 0mg/L剂量范围内 ,在人肺成纤维细胞中荧光染料扩散距离随剂量的增加而减小 (7 5～ 2 1 61mm) ,与对照组(2 6 56mm)比较 ,差异显著。 [结论 ]PM1 0 能抑制细胞间隙连接通讯 ,提示可能在癌症的发生过程中起促进作用。

细胞间隙连接通讯与肿瘤

由连接蛋白构成的细胞间隙连接通讯(GJIC)广泛存在于脊椎动物中,可以直接介导细胞间小分子物质的传递,而不需要通过细胞间质。GJIC与肿瘤密切相关,多数肿瘤GJIC能力降低或丧失,连接蛋白不表达或胞内定位,而恢复GJIC可以抑制肿瘤, GJIC已成为肿瘤预防与治疗研究的潜在靶点之一。

6种类胡萝卜素对人乳腺癌细胞株细胞间隙连接通讯功能影响的比较

目的:探讨类胡萝卜素对乳腺癌细胞MDA-MB-435S和MCF-7细胞的细胞间隙连接通讯功能的影响。方法:类胡萝卜素分别与乳腺癌细胞MDA-MB-435S、MCF-7共培养,划痕标记染料示踪技术检测类胡萝卜素对乳腺癌细胞间隙连接通讯功能的影响。结果:β-胡萝卜素、虾青素和番茄红素对MDA-MB-435S细胞的细胞间隙连接通讯功能具有较强的促进作用;角黄素、玉米黄素和玉米黄素双棕榈酸酯对MDA-MB-435S细胞的细胞间隙连接通讯功能的影响不明显;β-胡萝卜素、虾青素和角黄素对MCF-7细胞的细胞间隙连接通讯功能具有较强的促进作用;番茄红素、玉米黄素和玉米黄素双棕榈酸酯对MCF-7细胞间隙连接通讯功能的影响不明显。

大气细颗粒物对心肌细胞缝隙连接通讯的影响

目的探讨大气细颗粒物(PM2.5)对原代培养大鼠心肌细胞的急性毒性作用及对缝隙连接通讯的影响。方法对出生24h的SPF级SD大鼠乳鼠分离心肌细胞进行原代培养,以不同浓度(0、1、10、100μg/ml)的PM2.5染毒24h,采用划痕染料标记示踪法(SLTD)测定细胞缝隙连接通讯(GJIC)水平,采用间接免疫荧光细胞化学方法测定缝隙连接蛋白Cx43分布及密度,采用免疫印迹法测定连接蛋白Cx43的表达。结果随PM2.5浓度的上升,细胞间荧光扩散面积减少,细胞膜连接处Cx43绿色荧光减弱,Cx43蛋白表达量稍有减少。与对照组比较,10和100μg/ml染毒组细胞间荧光扩散面积减少,差异有统计学意义(P<0.01);10和100μg/ml染毒组Cx43荧光强度下降,差异有统计学意义(P<0.01)。结论PM2.5可抑制心肌细胞的缝隙连接通讯功能,其机制可能是通过影响心肌细胞的Cx43表达和分布。

玉米赤霉烯酮对细胞间隙连接通讯的影响

目的 了解真菌性雌激素玉米赤霉烯酮 (ZEA)对细胞间隙连接通讯 (GJIC)的影响。方法 用荧光漂白后恢复 (fluorescenceredistributionafterphotobleaching ,FRAP)技术 ,在激光扫描共聚焦显微镜下观察ZEA对HaCaT细胞GJIC功能的影响。结果 ZEA在 0 1μmol/L对HaCaT细胞的GJIC没有明显影响 ,但在 1～ 10 0 μmol/L浓度下都有明显的抑制作用。ZEA不能有效地拮抗TPA引起的GJIC抑制。结论 ZEA在 1μmol/L以上就能抑制GJIC功能 ,提示它在一定条件下可能有促癌作用。

细胞间隙连接通讯与肿瘤

细胞间隙连接通讯 (GJIC)在多细胞动物细胞的生长、分化和凋亡等生理过程中发挥着重要调节作用。研究表明大多数转化细胞和肿瘤细胞GJIC功能减弱或消失。阻止肿瘤促进剂对细胞GJIC功能的抑制或恢复癌细胞GJIC功能将对肿瘤的预防和治疗具有重要意义。

肝癌细胞中connexin32、connexin43的表达及其与间隙连接通讯功能的相关性

目的 :研究肝细胞肝癌和正常肝细胞间隙连接蛋白connexin 32 (Cx32 )、connexin 4 3(Cx4 3)的表达 ,及其对间隙连接通讯功能 (GJIC)的影响。方法 :应用细胞培养及流式细胞分析技术 (FCM) ,研究肝癌细胞系HHCC、SMMC 772 1和正常肝细胞系QZG细胞中Cx32和Cx4 3的表达。结合LuciferYellow划痕标记荧光传输技术 (SLDT) ,检测上述细胞的间隙连接通讯功能。结果 :流式细胞仪分析证实 ,Cx32蛋白在肝癌细胞系HHCC、SMMC 772 1和正常肝细胞系QZG细胞中表达的阳性率分别为 1 9%、0 7%和 99.0 % ;Cx4 3蛋白在HHCC、SMMC 772 1和QZG细胞中表达的阳性率分别为 7 3%、2 6 5 %和 99 1%。SLDT检测发现肝癌细胞HHCC ,SMMC - 772 1的间隙连接通讯功能较正常肝细胞QZG明显减弱。结论 :Cx32、Cx4 3蛋白在正常肝细胞中具有较高水平的表达 ,在肝癌细胞中表达水平显著降低 ;肝癌细胞的间隙连接通讯功能较正常肝细胞亦明显减弱。Cx32、Cx4 3表达调控异常引起的间隙连接通讯障碍可能与肝癌的发生密切相关。

纳秒脉冲诱导肿瘤细胞缝隙连接通讯恢复的实验研究

将纳秒脉冲作用于人肝癌细胞(Hep-G2),通过荧光漂白恢复(FRAP)技术,检测荧光萃灭后肿瘤细胞的荧光强度变化情况,以研究纳秒脉冲对肿瘤细胞缝隙连接通讯(GJIC)功能变化的影响。经纳秒脉冲处理后,与对照组相比,处理组荧光恢复率显著增加,且随着时间的推移,所有处理组的荧光恢复率都达到对照组的3倍以上。此外,处理组肿瘤细胞的荧光漂白恢复率随脉冲个数的增加而升高。实验结果表明,纳秒脉冲促进了肿瘤细胞缝隙连接通讯功能的恢复,且在固定的脉冲宽度和幅值下,GJIC对纳秒脉冲作用的响应程度与施加的脉冲个数呈正相关。研究结果不仅为纳秒脉冲用于GJIC障碍性疾病的治疗提供了一条全新的途径,而且也深化了纳秒脉冲诱导肿瘤细胞凋亡机制的研究。

缺血再灌注后心肌细胞缝隙连接通讯改变与其凋亡及坏死的关系

目的:了解不同缺血再灌注时间心肌细胞缝隙连接通讯改变情况,分析心肌细胞缝隙连接通讯与心肌细胞坏死、凋亡的关系以及卡维地洛、庚醇的干预作用。方法:实验于2004-10/2005-03在中日友好医院临床研究所完成。取培育7d心肌细胞缺氧30min后换用正常含糖的DMEM培养基培养1,2,3,6h,造成再给氧损伤。给药方案:分为三组;未用药组,庚醇组,卡维地洛组。庚醇用DMEM(含5%的小牛血清)配成1,2mmol/L的浓度,卡维地洛配成0.001g/L的浓度,分别加入药物于受试细胞,培养细胞30min后再做相关实验。未用药组不加药。采用细胞划痕技术,在倒置荧光显微镜下直观地观察不同组别、缺氧再灌注不同时间罗氏黄经过缝隙连接流通情况。利用流式细胞仪观察缺氧再灌注不同时间细胞凋亡情况。结果:①在缺氧30min时心肌缝隙连接通讯明显下降,荧光仅传至划痕附近第二列细胞,正常细胞荧光则传至四列以外的细胞。再供氧1h时恢复到第三列,以后逐步恢复到正常。运用庚醇后传导明显减慢荧光仅传至第二列细胞,缺氧和再供氧时传导也无明显变化。运用卡维地洛后传导改变不明显。②正常和缺血30min时凋亡指数差异无显著性(P>0.05),再供氧1h凋亡指数为27.4%,与正常相比差异显著(P<0.01)。坏死的心肌细胞在再供氧2h后差异有显著性(P<0.01)。运用卡维地洛、庚醇后凋亡指数在再灌注1h时分别较未用药组减少了55.11%,21.53%。③培养7d的心肌细胞搏动频率为(120±18)次/min,缺氧30min时,搏动减弱,次数为(56±16)次/min,再供氧1h时,搏动次数为(118±22)次/min,两者差异显著(P<0.01)。加入浓度为2mmol/L的庚醇后,心肌细胞搏动明显减弱,约为(64±20)次/min,差异显著(P<0.001)。加入0.001g/L卡维地洛搏动次数也有不同程度的减低(P<0.05)。在缺氧再灌注过程中,两个干预组搏动次数变化不大。结论:心肌细胞在缺氧时缝隙连接通透性减低,庚醇、卡维地洛也有不同程度的降低缝隙连接通讯的作用。庚醇、卡维地洛通过改变缝隙连接通讯以及其他方面的作用来减少心肌细胞的死亡和凋亡。

环境致癌物阻断NIH3T3细胞间隙连接通讯与细胞内游离钙离子关系初探

选用环境致癌物芥子气（ＭＧ）、苯并（ａ）芘（Ｂ（ａ）ｐ）、４－硝基喹啉－１－氧化物（４ＮＱＯ）、二甲基亚硝胺（ＤＥＮ）、环磷酰胺（ＣＰ）、雌二醇（Ｅｓｔ）、四氯化碳（ＣＣｌ４），作用于该细胞１２ｈ后，用划痕标记染料示踪技术（ＳＬＤＴ）检测其对该细胞间隙连接通讯（ＧＪＩＣ）功能的阻断作用，同时测定该细胞内［Ｃａ２＋］ｉ的变化，结果表明，环境致癌物阻断细胞ＧＪＩｃ与［Ｃａ２＋］ｉ变化密切相关。

热疗上调细胞间隙连接通讯对胶质瘤侵袭性的影响及其机制

目的探讨热疗降低胶质瘤侵袭性的作用与细胞间隙连接通讯(gap junctional intercellular communication,GJIC)的关系。方法热疗处理C6胶质瘤细胞后,免疫组织化学法和Western blot法动态检测HSP70和Cx43的表达水平;划痕标记染料示踪技术检测胶质瘤GJIC功能变化;结晶紫染色法检测胶质瘤侵袭性的改变。结果 C6细胞经热疗后,HSP70表达增加,于30 min时含量最多。C6细胞内Cx43的表达水平也在热疗后明显增加,并于热疗后的120 min达高峰,后逐渐减少。热疗后GJIC功能的恢复与C6细胞内Cx43的表达相一致,且GJIC功能越强,胶质瘤侵袭性越低。结论胶质瘤细胞经热疗后HSP70表达增加,增加的HSP70可能是通过其分子伴侣作用提高Cx43的表达水平,进而上调GJIC功能而引起胶质瘤侵袭性的下降。

纳米SiO_2颗粒对HL-7702细胞的毒性作用和缝隙连接通讯的影响

目的:探讨纳米二氧化硅(SiO2)颗粒对HL-7702细胞的毒性作用和细胞缝隙连接通讯(GJIC)的影响,为纳米SiO2体内外毒性的预测和安全性应用提供实验依据。方法:透射电镜(TEM)观察2种SiO2颗粒的粒径、分散性和形状;动态光散射法(DLS)检测SiO2颗粒在高纯水和培养液中的粒度分布;MTT法检测细胞存活率;乳酸脱氢酶(LDH)活力实验检测细胞膜完整性;划痕染料示踪技术检测GJIC。结果:透射电镜,2种SiO2颗粒呈圆形,大小均一,分散性良好,2种颗粒的粒径分别为(447.60±20.78)和(67.42±5.69)nm,分别为亚微米级和纳米级颗粒。动态光散射法,2种颗粒在高纯水和RPMI-1640培养液中的水合粒径分别为(684.37±18.76)、(697.02±19.57)nm和(128.31±7.64)、(133.74±8.97)nm,颗粒均未发生聚集,分散性良好。MTT法,2种SiO2颗粒作用细胞24h后,同一粒径的颗粒,随着浓度的增加,细胞存活率下降;同一浓度下,纳米颗粒比亚微米颗粒的毒性大。LDH活力实验,当作用细胞24h后,2种SiO2颗粒均能够损伤细胞膜,同一浓度下,纳米SiO2颗粒比亚微米颗粒对细胞膜的损伤能力大;同一粒径的颗粒,随着作用浓度的增加,细胞膜的损伤程度加重。划痕染料示踪实验,纳米SiO2颗粒可抑制GJIC,并且随着作用浓度的增加,抑制作用增强;而在相同浓度下,纳米SiO2颗粒比亚微米颗粒对GJIC的抑制作用更明显。结论:纳米SiO2颗粒能够对HL-7702细胞产生毒性作用,且抑制GJIC。

北京市大气PM_(10)和PM_(2．5)对人肺成纤维细胞间隙连接通讯及连接蛋白的影响

[目的]探讨北京市大气颗粒物PM_(10)和PM_(2.5)对人肺成纤维细胞(HLF)间隙连接通讯(GJIC)及间隙连接蛋白(Cx43)的影响。[方法]颗粒物样品采自北京市城区采暖期,实验细胞为HLF。采用划痕染料标记示踪法(SLDT)测定HLF的GJIC的水平;蛋白免疫印迹(weslen bloting)法观察HLF细胞膜上Cx43的表达。[结果]细胞划痕实验结果显示,PM_(10)和PM_(2.5)均可抑制细胞间荧光扩散,抑制作用随剂量增高而增强;蛋白免疫印迹结果显示,PM_(10)和PM_(2.5)可使细胞膜Cx43表达减少,减少量随浓度的增高而增加。[结论]北京市大气颗粒物PM_(10)和PM_(2.5)能抑制HLF的GJIC,抑制的机制可能与Cx43表达抑制有关。

芳维A酸乙酯对细胞间隙连接通讯的影响

目的 研究芳维A酸乙酯对细胞间隙连接通讯的影响。方法 用划痕标记染料示踪技术检测黄色荧光素在培养细胞中的传递情况。结果 芳维A酸乙酯能够拮抗促癌剂TPA对GJIC的抑制作用 ,在一定范围内 ,芳维A酸乙酯浓度越大 ,其对NIH3T3细胞GJIC功能的恢复作用越强 ,因而具有抗促癌作用。结论 芳维A酸乙酯不仅具有抗增殖、诱导分化作用 ,同时还具有癌症的化学预防作用。