卡维地洛对缺氧、再供氧心肌细胞缝隙连接通道蛋白43表达的影响

目的:检测卡维地洛(Cavedilol,CVD)对缺氧再供氧时心肌细胞缝隙连接通道蛋白43(Conexin43,CX43)的基因表达和CX43通道蛋白变化的影响。方法:原代培养心肌细胞,随机分为2组:未用药组,CVD组。建立缺氧、再供氧模型,分别于正常、缺氧30min、再供氧1h、2h、3h、6h搜集细胞。逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测CX43 mRNA表达、蛋白免役印迹法(Western blot)检测CX43蛋白的含量。结果:未用药组的心肌细胞缺氧30min时CX43 mRNA表达与蛋白含量和正常相比无显著差异(P>0.05)。再供氧1h、2h、3h、6h则分别减少了39.16%、45.00%、46.67%、51.67%,和正常时相比差异显著(P<0.01)。其中再供氧1h下降幅度最大。用CVD干预后再供氧1h、2h、3h、6h则分别减少了22.95%、27.87%、30.33%、35.25%(P<0.01)。再供氧1h、6h的下降幅较未用药组分别减少了41.39%、31.78%,差异显著(P<0.01)。结论:心肌细胞缺氧再供氧时,其CX43基因表达和蛋白含量明显减少,卡维地洛可抑制CX43降解。

心肌组织的连接蛋白通道

概述了心肌组织几种主要连接蛋白 (Cx)的特征、分布和某些病理情况下的改变 ,缝隙连接 (Gj)

TAT-Gap19通过抑制啮齿动物星形胶质细胞的连接蛋白43半通道发挥抗惊厥作用

越来越多的证据表明,星形胶质细胞连接蛋白43(Cx43)信号在癫痫中发挥至关重要的作用。但是,由于通过实验方法鉴别Cx43间隙连接通道(GJCs)和半通道(HCs)的技术尚不成熟,导致目前尚无法确定哪个通道在癫痫的发生中发挥更重要的作用。因此,本研究观察TAT-Gap19(Cx模拟肽)是否通过抑制Cx43半通道而非Cx43间隙连接通道影响实验诱导的啮齿动物癫痫发作。急性海马切片小鼠染料摄取实验表明,星形胶质Cx43半通道响应化学惊厥毛果芸香碱的作用而开放,并且可被TAT-Gap19抑制。体内实验中,毛果芸香碱诱导的癫痫发作及相伴随的D-丝氨酸微透析液的增长水平被Cx43半通道的抑制所抑制。此外,TAT-Gap19的抗惊厥作用被外源性D-丝氨酸给药逆转,这表明,抑制Cx43半通道可以通过降低细胞外D-丝氨酸水平来防止癫痫发作。抑制Cx43半通道的抗惊厥特性在电癫痫小鼠模型(如急性6 Hz难治性癫痫发作模型和慢性6 Hz角膜点燃模型)中得到了进一步的证实。总而言之,这些结果表明,Cx43半通道在癫痫发作中可以起到一定作用,并且有成为癫痫治疗中新型用药靶点的潜力。

泛连接蛋白1通道对睾丸癌Tcam-2细胞侵袭迁移的调控作用及可能机制

目的:探讨泛连接蛋白1(Panx1)在睾丸癌Tcam-2细胞侵袭迁移中的作用及可能机制。方法:用100μmol/L甘珀酸(CBX)和200μmol/L的丙磺舒(PBN)处理Tcam-2细胞后,采用实时荧光法检测细胞间荧光传递能力,化学发光法检测细胞外ATP浓度,Transwell法检测Tcam-2细胞的侵袭迁移能力,Western印迹法检测Panx1蛋白在睾丸间质细胞TM3和睾丸癌细胞Tcam-2中的表达及细胞外调节蛋白酶激酶1/2(ERK1/2)、磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)、波形蛋白、基质金属酶蛋白9(MMP-9)和E-钙黏蛋白的表达。结果:Western印迹结果显示,与睾丸间质细胞TM3相比,Panx1蛋白在睾丸癌Tcam-2细胞中表达量显著增高[2.79±0.17 vs 1.00±0.06,P<0.05];用CBX和PBN处理Tcam-2细胞后,实时荧光法和化学发光结果显示,与对照组[(99.50±3.12)%]相比,CBX和PBN显著抑制荧光传递能力[分别下降至(61.54±3.30)%和(68.06±4.03)%,P<0.01]和降低细胞外ATP水平[(110±8.16)%vs(57.06±5.80)%、(56.42±7.70)%,P<0.01];Transwell法和细胞划痕法结果显示,与对照组相比,CBX和PBN显著抑制睾丸癌Tcam-2细胞迁移[(331.00±30.80)个vs(11.5±1.11)、(8.25±1.23),P<0.05]和侵袭[细胞数目为(89.00±13.09)vs(11.75±3.77)、(11.5±3.5)个,P<0.01];Western印迹法结果显示,与对照组表达水平(0.98±0.03、1.093±0.09、1.00±0.09、1.13±0.04)相比,CBX和PBN显著抑制p-ERK1/2(0.538±0.05、0.476±0.02,P<0.05)、波形蛋白(0.541±0.09、0.705±0.07,P<0.01)、MMP-9蛋白表达(0.439±0.08、0.557±0.065,P<0.01),增强E-钙黏蛋白表达(3.896±0.06、3.551±0.04,P<0.01)。结论:Panx1通道蛋白在睾丸癌Tcam-2细胞中表达量增高,CBX和PBN抑制Panx1通道后,Tcam-2细胞侵袭迁移能力降低。

Pannexin1,2在小鼠睾丸癌I-10细胞和睾丸间质细胞TM3中的表达及通道功能调控

目的:探讨泛连接蛋白(Panx)蛋白在小鼠睾丸癌I-10细胞与睾丸间质细胞TM3中的表达水平及其功能调控。方法:Western印迹法检测Panx-1和Panx-2蛋白在睾丸癌细胞中的表达水平;使用Panx通道抑制剂100μmol/L的甘珀酸(CBX)、200μmol/L的丙磺舒(PBN)作用于I-10细胞后,采用实时荧光法检测细胞间荧光传递能力;化学发光法检测细胞外ATP浓度;分别干扰(shRNA)和过表达(m Panx-1) Panx-1基因,调控Panx-1蛋白的表达及功能。结果:Western印迹结果显示,与TM3细胞相比,I-10细胞中Panx-1和Panx-2的表达量分别增加(289. 5±55. 8)%(P <0. 05)和(264. 5±24. 6)%(P <0. 05);采用CBX和PBN处理后,实时荧光实验和化学发光法结果显示,与对照组相比,CBX组和PBN组平均荧光物质转运量下降(87. 5±17. 7)%和(89. 3±14. 3)%(P<0. 01),细胞外ATP水平在8、16、24 h时分别下降(57. 3±7. 2)%、(56. 4±9. 6)%,(63. 4±6. 4)%、(61. 7±2. 5)%,(35. 8±1. 6)%、(13. 5±8. 3)%(P <0. 01); shRNA和m Panx-1处理后,Western印迹结果显示,与阴性对照组相比,shRNA1和shRNA2组中Panx-1的表达量下降(38. 3±5. 2)%和(31. 8±5. 1)%(P <0. 01),m Panx-1组Panx-1的表达量增加(128. 4±7. 5)%(P <0. 01),且实时荧光实验和化学发光法结果显示,shRNA组荧光物质转运量下降(72. 4±39. 4)%(P <0. 01)和细胞外ATP含量在8、16、24 h分别下降(14. 7±0. 1)%、(13. 7±0. 3)%、(13. 1±0. 3)%(P <0. 01); m Panx-1组荧光物质转运量增加(122. 5±. 17. 1)%(P <0. 01)和细胞外ATP含量在8、16、24 h分别增加(886. 1±82. 1)%、(885. 8±83. 3)%、(841. 5±21. 8)%(P <0. 01)。结论:Panx-1和Panx-2在小鼠睾丸癌I-10细胞中表达增多,CBX和PBN及shRNA抑制Panx通道后,睾丸癌I-10细胞荧光传递能力减弱和细胞外ATP水平下降。

连接蛋白、Pannexin1:急性肝损伤治疗的新靶点

缝隙连接细胞间通信(gap junction intercellular communication,GJIC)在维持肝脏内环境的稳态以及肝脏功能方面起着重要的作用,缝隙连接功能障碍会引起细胞分化异常、细胞死亡、炎症、纤维化、肝硬化以及肝癌等。近年来,越来越多证据表明,急性肝损伤存在连接蛋白、Pannexin1(Panx1)表达的改变,细胞间通信功能的障碍。本文综述急性肝损伤连接蛋白、Panx1及其缝隙连接的研究进展以及基于连接蛋白、Panx1组成的细胞通道抑制剂的研究进展,以期为寻找与缝隙连接相关蛋白为靶点的潜在治疗药物提供参考。

缺血再灌注对心肌细胞CX43表达的影响

目的检测缝隙连接通道蛋白43(Conexin43,CX43)在缺血再灌注中的心肌细胞基因表达和CX43通道蛋白变化情况,分析CX43变化的原因,判断CX43在心肌缺血再灌注中所起得作用。方法原代培养心肌细胞,建立缺血再灌注模型,分别于正常、缺氧30 min、再灌注1h、2 h、3 h、6 h搜集细胞。逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测CX43mRNA表达、蛋白免役印迹法(Western blot)检测CX43蛋白的含量。结果未用药干预的心肌细胞缺氧30 min时CX43mRNA表达与蛋白含量和正常相比无显著差异(P＞0．05),再供氧1h、2 h、3 h、6 h则分别减少了39．16%、45．00%、46．67%、51．67%。和正常相比差异显著(P＜0．01)。其中再供氧1 h下降幅度最大。结论CX43在心肌细胞缺氧再灌注过程中mRNA表达与蛋白含量均是减低的,其中再供氧1 h下降幅度最大。

血清pannexin-1、CTRP1水平变化与新诊断2型糖尿病患者HOMA-IR的关联性探究

目的 探讨交感神经节缝隙连接半通道蛋白1(pannexin-1)、补体C1q肿瘤坏死因子相关蛋白1(CTRP1)水平变化对新诊断2型糖尿病患者胰岛素抵抗(HOMA-IR)的影响。方法 选取2型糖尿病患者56例为试验组,同时选取同期于我院体检健康者49例作为参照组,对比两组胆固醇(TC)、空腹血糖(FPG)、糖化血红蛋白(HbA1c)、甘油三酯(TG)、pannexin-1、空腹胰岛素(FINS)、HOMA-IR、CTRP1,探讨CTRP1及pannexin-1同糖脂代谢指标的相关性,Logistic回归方程分析影响因素。结果 试验组FPG、TC、TG、HbA1c水平较参照组高(P<0.05);试验组FINS、pannexin-1、CTRP1、HOMA-IR水平较参照组高(P<0.05);试验组血清CTRP1、pannexin-1水平变化与FPG、TG、TC、HOMA-IR、FINS、HbA1c呈正相关(P<0.05);Logistic回归方程显示,pannexin-1(OR:7.410)、CTRP1(OR:7.155)、BMI(OR:6.067)、HDL-C(OR:7.514)是HOMA-IR升高危险因素(P<0.05)。结论 新诊断2型糖尿病患者pannexin-1、CTRP1水平呈高表达,与HOMA-IR关系密切,可能参与了2型糖尿病及HOMA-IR的病理过程,联合检测其水平变化有助于临床确定合理诊治方案。

白藜芦醇预处理对糖尿病大鼠心肌缺血再灌注损伤中Cx43的作用

目的探讨白藜芦醇预处理对糖尿病大鼠心肌缺血再灌注损伤中缝隙连接蛋白43(Cx43)的影响。方法清洁级健康成年雄性SD大鼠,体重200~220 g。采用腹腔注射1%链脲佐菌素柠檬酸缓冲液30 mg/kg制备大鼠糖尿病模型。取糖尿病大鼠采用随机数字表法分为3组(n=10):糖尿病鼠假手术组(Sham组),糖尿病鼠心肌缺血再灌注组(MIR组),白藜芦醇-糖尿病鼠心肌缺血再灌注组(MIR+Res组)。取正常大鼠10只作为白藜芦醇-非糖尿病鼠心肌缺血再灌注组(N+Res组)。采用结扎冠状动脉左前降支30 min,恢复灌注120 min的方法制备大鼠心肌缺血再灌注损伤模型。N+Res、MIR+Res组于缺血再灌注模型建立前5d腹腔注射生理盐水稀释的白藜芦醇15 mg/kg,Sham、MIR组不注射白藜芦醇,注射等量生理盐水。于再灌注120min时腹主动脉取血检测LDH、CK-MB,TNF-α,IL-6浓度。取心脏组织检测MDA,SOD含量,切片HE染色观察病理改变,Western blot检测心肌组织里Cx43蛋白表达水平。结果 Sham组心肌细胞肌原纤维排列整齐,胞浆内线粒体丰富,部分组织见炎症细胞浸润。MIR组心肌组织结构紊乱,心肌肌原纤维溶解,大量炎症细胞浸润。N+Res、MIR+Res组心肌结构紊乱及细胞水肿程度较MIR组明显减轻,可见少量炎性细胞浸润。其中,N+Res组病理学损伤较MIR+Res组轻。与MIR组比较,N+Res及MIR+Res组的CK-MB、LDH、TNF-α、IL-6等炎性指标浓度降低(P <0.05);MDA含量降低,SOD含量增高、Cx43表达上升(P <0.05)。结论白藜芦醇通过作用于Cx43,减轻了糖尿病心肌缺血再灌注损伤,起到了心肌保护作用。

小肠上皮细胞钙转运机制研究进展

钙离子跨上皮细胞转运分为细胞旁途径和跨细胞途径。前者是经紧密连接顺电化学梯度进行；后者则需要借助上皮细胞顶膜上的钙离子通道蛋白TRPV6、胞浆钙结合蛋白CB、基底侧膜上的质膜钙ATP酶（PMCA）与钠一钙交换体（NCX）介导。1，25-二羟维生素D3、甲状旁腺激索（PTH）、降钙素（CT）等钙调激素对钙离子跨膜转运发挥调节作用。

先天性白内障致病基因及其功能的研究进展

先天性白内障是一种严重的致盲性晶状体疾病，遗传因素在其发病中起重要作用。文中总结近年来，先天性自内障基因定位的研究进展，就先天性白内障的致病基因及其功能加以综述。晶状体的发育是由多种基因及其产物在时间、空间上协调作用而指导完成的。涉及的基因包括晶状体蛋白基因（CRYAA、CRYAB、CRYBA1／A3、CRYBA4、CRYBB1、CRYBB2、CRYBB3、CRYGC、CRYGD、CRYGS）、缝隙连接通道蛋白基因（GJAI、GJA3、GJAB）、膜蛋白基因（GJA3、GJA8、MIP、LIM2）、细胞骨架蛋白基因（BF—SP2）、转录调节因子基因（HSF4、MAF、PITX3、PAX6）、铁蛋白轻链基因（FTL）、生长因子基因等。迄今为止已发现39个与白内障相关的基因位点，其中的23个与单纯性遗传性白内障有关，已成功克隆的相关基因有14个。