两种方法纯化胎鼠脑室管膜下区神经干细胞的结果比较

目的利用有限稀释法和连续传代法纯化体外培养的神经干细胞(neural stem cells,NSCs),并对2种方法纯化后的细胞纯度及增生能力进行比较。方法机械分离孕龄14.5d的胎鼠脑室管膜下区细胞,利用有限稀释法和连续传代法纯化NSCs,通过免疫细胞化学法鉴定纯度(Nestin阳性率)及分化细胞的类型。将2种方法纯化后的第3代NSCs以相同的密度接种后连续培养6周,每周进行细胞计数,绘制生长曲线。结果有限稀释法和连续传代法纯化NSCs的Nestin阳性率均高于原代NSCs(31.00%±0.02%),有限稀释法的Nestin阳性率(91.00%±0.03%)高于连续传代法(58.80%±0.02%,P<0.05)。有限稀释法纯化NSCs的生长曲线一直处于增生趋势,而连续传代法的细胞前3周是上升趋势,以后趋于平缓(P<0.05)。结论有限稀释法能有效纯化体外培养的NSCs,并保持细胞良好增生能力及多向分化潜能,为基因治疗视神经损伤疾病提供大量种子细胞。

极端嗜盐古菌的分离与纯化方法初探

从一平浪盐矿采集到的一块盐矿石样品中分离到2株极端嗜盐古菌(命名为CY1和CY2)。方法是用嗜盐培养基培养,采用连续传代法和NaCl浓度(m/V)梯度法分离该样品中的极端嗜盐古菌,结合平板划线纯化得到两株菌种。对分离得到的菌落进行观察,结果表明已分离纯化得到的这两株菌种为极端嗜盐古菌。由此,建立了分离纯化极端嗜盐古菌的一套可行的实验方法。

高毒性人呼吸道合胞病毒鼠适应株的筛选

目的以BALB/c小鼠作为动物模型筛选高毒性人呼吸道合胞病毒鼠适应株。方法以连续传代法经小鼠下呼吸道接种临床株人呼吸道合胞病毒hRSV-A-GZ08-0,确认8月龄BALB/c雄鼠作为人呼吸道合胞病毒动物模型较3周龄BALB/c小鼠和8月龄BALB/c雌鼠更佳后,以8月龄BALB/c雄鼠为动物模型,将hRSV-A-GZ08-0连续传代50代,分离获得1株鼠适应株hRSV-A-GZ08-P50-4,该株病毒与临床株hRSV-A-GZ08-0分别接种8月龄BALB/c雄鼠后第3d以TCID50方法测定鼠肺灌洗液中的病毒滴度,并作鼠肺病理切片比较两株病毒感染的不同。结果8月龄BALB/c雄鼠作为人呼吸道合胞病毒动物模型较3周龄BALB/c小鼠和8月龄BALB/c雌鼠更佳。与临床株hRSV-AGZ08-0比较,hRSV-A-GZ08-P50-4为高毒性hRSV鼠适应株。结论 8月龄BALB/c小鼠,特别是8月龄BALB/c雄鼠,可作为动物模型筛选高滴度hRSV鼠适应株。筛选到的高毒性hRSV鼠适应株hRSV-A-GZ08-P50-4致病力较强。